第４７卷第３期２０２３年５月江西师范大学学报（自然科学版）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｘｉＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）Ｖｏｌ．４７Ｎｏ．３Ｍａｙ２０２３收稿日期：２０２２⁃１１⁃１６基金项目：国家自然科学基金（２２０６８０１４，２１６６６０１０），江西省自然科学基金（ＧＪＪ１１０７１）和江西师范大学博士科研启动基金（５４５１）资助项目．通信作者：赵喜华（１９７７—），男，江西玉山人，教授，博士，主要从事酶工程和合成生物学研究．Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｘｈｚｈａｏ＠ｊｘｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ张念，林颖颖，祁可丹，等．草酸青霉１６β⁃葡萄糖苷酶的异源表达［Ｊ］．江西师范大学学报（自然科学版），２０２３，４７（３）：２３７⁃２４１．ＺＨＡＮＧＮｉａｎ，ＬＩＮＹｉｎｇｙｉｎｇ，ＱＩＫｅｄａｎ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｏｘａｌｉｃｕｍ１６β⁃ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｘｉＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ），２０２３，４７（３）：２３７⁃２４１．文章编号：１０００⁃５８６２（２０２３）０３⁃０２３７⁃０５草酸青霉１６β⁃葡萄糖苷酶的异源表达张念，林颖颖，祁可丹，王国平，欧阳蓓，赵喜华∗（江西师范大学生命科学学院，江西南昌３３００２２）摘要：为探究真核菌株草酸青霉１６的β⁃葡萄糖苷酶（１６ＢＧＬ）在不同宿主中的异源表达情况，该文通过基因克隆技术，将１６ＢＧＬ基因分别与ｐＰＩＣ９Ｋ、ｐＥＴ⁃２８ａ、ｐＧＡＰＺαＡ载体进行连接，转化到毕氏酵母ＧＳ１１５或大肠杆菌Ｒｏｓｅｔｔａ（ＤＥ３）上，筛选阳性克隆子，比较并分析其表达情况．结果表明：１６ＢＧＬ⁃９Ｋ未能成功电转到毕氏酵母ＧＳ１１５上；将１６ＢＧＬ⁃２８ａ转化到大肠杆菌Ｒｏｓｅｔｔａ上，使用最终物质的量浓度为５０μｍｏｌ·Ｌ－１的ＩＰＴＧ和质量分数为１．７％的乳糖在２２℃下诱导可实现高水平表达，但极易形成包涵体且无活性．为了消除包涵体的影响，在相同条件下将１６ＢＧＬ的Ｎ端加入ＤｓｂＡ分泌信号肽，经ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ检验，１６ＢＧＬ有高水平可溶性表达，但无活性；将１６ＢＧＬ⁃ＺαＡ电转到ＧＳ１１５上，筛选阳性克隆子并接种到含ＹＰＧ培养基的摇瓶中，结果表明：上清液蛋白质量浓度达到２３．７２３...
