QBT 4617-2013 化妆品中黄芩苷的测定 高效液相色谱法.pdf

1CS71.100.70分类号：Y42备案号：43649-201348中华人民共和国轻工行业标准QB/T4617-2013化妆品中黄芩苷的测定高效液相色谱法Determination of baicalin in cosmetics-High performance liquid chromatography2013-12-31发布2014-07-01实施中华人民共和国工业和信息化部发布QB/T4617-20135.6超声振荡器5.7离心机：转速不小于8000rmin5.8滤膜：孔径0.22m材质可用聚四氟乙烯PTE)聚偏氟乙烯(PVDF)或混合纤维素膜。5.9涡旋振荡器。5.10阴离子交换固相萃取小柱5.11氮吹装置。5.12移液管或移液器：2mL和10mL。6分析步6.1样品处理6.1.1提取分析天平取样品100g(精确至0.01)于具塞离心刻度式管(5.5)中，加入75%乙醇溶液(4.3)至近10.0m,涡旋振荡1mim30水浴中超声取20min,冷却至室温后用75%乙醇溶液(4.3)补足至10.0mL,8000rmim离心分离5min,上清液经0.22m滤膜过滤。6.1.2净化（当需要降低检出限或试样中存在对黄芩苷检测有干扰的杂质时使用将阴离子交换固相萃取小柱(5.10)先用5mL甲醇和5mL水活化，然后取6.1.1步骤中离心后的样品上清液5L加入小柱进行上样（如上清液较为浑浊，可提高离心速度或用滤膜过滤后再上样）。上样结束后用5mL甲醇(4.6)洗涤，然后用5%甲酸-甲醇溶液(4.11)5mL洗脱，收集洗脱液氮并吹干，用75%Z乙醇溶液(4.3)1mL定容并超声助溶，经0.22um滤膜过滤。上述过程的流速均应控制在1mL/min。6.2测定条件高效液相色谱测定参考条件如下：a)色谱柱规格：C18色谱柱，250mm4.6mm(内径5um),或相当者：b)流动相：乙腈(41)：0.1%磷酸(4.5)为22：78（体积比）：c)柱温：30d)流动相流速：1.0 mL/mine)进样量10Lf)检测波长：276pm。6.3标准工作曲线绘制按6.2色谱条件检测。以标准系列溶液(0g/mL、1Hg/mL、10g/mL、20gmL、40gmL、100g/mL的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，进行线性回归得到标准曲线方程。黄芩审标准品的HPLC色谱图参见附录B中的图B.1。6.4测定按6.2的色谱条作，取6.14步骤中（采用固相萃取取用6.1.2步骤中）的滤液进样，得到试样溶液的峰面积，根据保留时间和一极管阵列的光谱图定性，黄芩茸标准品的DAD光谱图参见附录B中的图B.2。从标准线上查得试样溶液中黄芩苷的含量。若在相同保留时间出现千扰峰且无法用固相萃取去除时，可用1%氧化钠溶液(4.13)调节流动相的pH为2.5或3，黄芩苷的保留时闯会相应提前，借此可判断样品中是否存在黄芩苷。试样溶液中黄芩苷的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应将提取液稀释后测定或增加提取溶液的量重新检测。6.5空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。QB/T4617-20136.6平行试验样品中的黄苷含量应根据两次独立的平行试验结果的算术平均值确定7结果计算试样中的黄芩苷含量按公式(1)计算：CV1000(1)X=Fm1000式中：X试样中黄芩苷的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);从标准曲线中得出的黄苷浓度（应扣除空白值），单位为微克每毫升（g/mL):试样溶液的体积，单位为毫升(mL):m试样质量，单位为克(g);F不采用固相萃取时为1，采用固相萃取时为0.2。计算结果保留3位有效数字8检出限和定量限本方法黄芩苷的检出限、定量下限分别为10.0 mgkg、30.0 mg/kg;使用固相萃取时检出限、定量下限分别为3.0mg/kg、10.0mg/kg9回收率和精密度样品在添加浓度为16mg/kg82mg/kg的范围内，回收率在81.3%104.5%之间，相对标准偏差小于7%。10允许差在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%