QBT 2583-2003 纤维素酶制剂.pdf

I CS 6 7.2 2 0.2 0分类号:X6 9备案号:1 2 4 9 7-2 0 0 3中 华 人 民 共 和 国 轻 口 巳 行 业 标 准Q B 2 5 8 3 一2 0 0 3纤 维 素 酶 制 剂Ce l l ul a s e s2 0 0 3-0 9-1 3发布2 0 0 3-1 0-0 1 实施中华人民共和国国家发展和改革委员会发布QB 2 5 8 3 一2 0 0 3n il胃 本标准的第5.4条为强制性的，其余为推荐性的。本标准参 考了联合国 粮农组织/世界卫生 组织食品添加剂联合专家委员 会的食品添加剂 标准纲要第一卷 C o m p e n d i u m o f F o o d A d d it i v e S p e c i f i c a t i o n s,V o l u m e l,J o in t F A O/W H O E x p e r t C o m m i tt e e o nF o o d A d d i t i v e(J E C F A)食品 工业用酶制剂通则中的“卫生指标”，其一 致性程度为非等效。本标准的附录A、附录B、附录 C为规范性附录，附录D为资料性附录 本标准由 中国轻工 业联合会提出。本标准由 全国食品 发酵标准化中 心归口。本标准起草单位:中国食品发酵工 业研究院、北京宁馨儿生物科技开发有限公司、诺维信 中国)生物技术有限公司、中 法合资 唐山 太博尔生物工程有限公司、中国科学院微生物研究所。本标准主要起草人:张蔚、焦志民、李忠兴、翟文景、赵力、刘建军、崔福绵、田栖静。本标准首次发布。Q B 2 5 8 3 一2 0 0 3引言 本标准是针对以木霉 属为代表的 微生物，经发酵、提取制得的 纤维素酶制剂。它是一种纤 维素酶复合物(纤维素酶系)，在各种酶的 协同 作用F 使 纤维素降 解，所以，统称为 纤维素酶。一般 来讲，纤维素 酶 中 的 多 组 分酶 系 包 括 外 切p-1,4-葡 聚 糖 酶(E x o p-1,4-g l u c a n as e,E C 3.2.1.9 1)、内 切p-1,4-葡聚糖酶(E n d o p-1,4-g l u c a n as e,E C 3.2.1.4)和纤维二 糖酶(C e ll o b ias e,E C 3.2.1.2 1)不同 来源的 纤维素 酶制剂产品中 三种酶组分含量的比 例不同，因此其最终的表观酶活力会有差异。考虑到市场上的 纤维素酶 制剂品 种繁多，等级不一，酶活 力标示方法各不相同，故制定本标准，以统一国内 纤维素酶的 测定 方法 及使 用单位，便于使用与交流。产品分类中酸性纤维素酶、中性 纤维素酶是按酶 制剂在使用时的 最适p H划分;而表 中的p H系指酶制剂 终产品的p H.附录A,B 所述方法，是通过测定纤维 素酶降解底物生成的还原糖来反映纤维素酶的 总酶活力;附录 C所 述方法，是以 标准酶为对照，通过测定 底物粘度的 降低，得到纤维素酶的 相对酶 活力(侧重反映纤维素酶的内切酶活力)。生产者和使用者可根据产品的用途选择相应的试验方法。由于 犬然纤维素的不溶性、底物结构的多样 性，酶系组成、相关浓度和化学结构的 不确定性，内切、外切酶的协同作用以 及复杂的作 用模式，各种终 产物的不断形 成及反 馈控制等因 素的影响，因 此，若使方法获得较好的 重现性和再现性，各实验室严格按照标准规定的底物、p H、反应时间 与温度等条件操作是十分重要的。本 标准酶活力的 测定，参考了I II P A C.F C C.J E C F A推荐的 方法以 及国内 外相关企 业标准的 测定方法，通过反复试验、验证修改而成。Q B 2 5 8 3 一2 0 0 3纤维素酶制剂范围 本标准规定了纤维素 酶制剂的 术语和定义、要求、试验方法、检验规则和 标志、包装、运输、贮存。本标准适用于以 木霉属(T r i c h o d e r m a)为 代表的 微生物及其变异株，经液体 深层发酵或固 态培养后，精制提纯制得的 酸性(或中 性)纤维素 酶制剂。主要用于食品、纺 织、造纸 等工业。食品 级纤维素酶制剂也可用作饲料添加剂。2 规范性引用文件 下列文件中 的条款通过本标准的引 用而成为本标准的条款。凡是 注日 期的 引用文件，其随后所有的修改单 不包括勘误的内 容)或修订版均不 适用于 本标准，然 而，鼓励根据 本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的 最新版本。凡是不注日 期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G B/T 1 9 1 包装储运图示 标志 G B/T 4 7 8 9.2 食品 卫生微生物学检验 菌落总数测定 G B/T 4 7 8 9.3 食品 卫生 微生物学检验 大肠菌群测定 G B/T 4 7 8 9.4 食品 卫生微生物学检验 沙门氏 菌检验 G B/T 5 0 0 9.1 1 食品中总砷的 测定方法 G B/T 5 0 0 9.1 2 食品中 铅的测定方法 G B/T 8 4 5 1 食品 添加剂中 重金属限量试验法 Q B/T 1 8 0 3 一1 9 9 3 工业酶制剂通用试验方法 Q B/T 1 8 0 4 工 业酶制剂通用检验规则和标志、包装、运输、贮存 J J F 1 0 7 0 定量包装商品净含量计量 检验规则 国家质量技术监督局【1 9 9 5 第4 3 号令定量包装商品计量监督规定3 术语、定义、符号、缩略语 下列术语、定义、符号、缩略语适用于本标准。3.1 纤维素酶c e ll u l a s e s 在各种酶组分的协同 作用下，能 降解纤维素，使之变成纤维寡糖、纤 维二糖和葡萄糖的酶。3.2 滤纸酶活力 F il t e r p a p e r a c t iv i t y(F P A)l g 固 体 酶(或i m L 液 体 酶)，在(5 0 1 0.1 C,指 定p H 条 件h(酸 性 纤 维 素 酶p H 4.8，中 性 纤 维素酶p H 6.0),l h 水解滤纸底物，产生出相当于l m g 葡萄糖的 还原 糖量，为 1 个酶活力 单位，以u/g (或 u/m L)表示。3.3 梭甲 基纤维素酶活力 S o d i u m c a r b o x y m e t h y l c e l l u l o s e a c t i v i t y(C M C A)还原糖法l g 固体酶(或1 m L 液体酶)，在(5。士。，1)0 C、指定p H条 件 F(酸性纤维素酶p H 4.8,中性纤维素酶p H 6.0),l h 水 解梭甲 基纤维素钠底物，产生出相当于1 m g 葡萄糖的还原糖 量，为1 个酶活力单位，以u/g(或u/m L)表示。简写为C MC A-D N S aQB 2 5 8 3-2 0 0 3 粘度法1 g 固体酶(或1 m L 液体酶)，在(4 0 士0.1)0 C、指定p H条件下(酸性纤维素酶p H 6.0，中性 纤 维 素 酶p H 7.5)，水 解 c0 甲 基 纤 维 素 钠 底 物，使 底 物 粘 度 降 低 而 得 到 的 相 对于 标 准品 的 纤 维 素 酶 相对酶活力。简写为C MC A-V I S o4 产品分类4.1 按适用p H 分为酸性纤维素酶和中性纤维素酶。4.2 按产品形态 分为固 体酶 制剂和液体酶制剂两种类型。5 要求5.1 净含量 按国家质量技术监督局 1 9 9 5 1 第 4 3号令执行。5.2 外观 固体剂型浅灰色或浅黄色，粉状或颗粒状。无霉变、潮解、结块现象，无异味。易溶于水，溶解时允许有少量沉淀物。液体剂型棕色或褐色液体，无异味，允许有少量凝聚物。5.3 理化要求 理化指标应符合表 1 的规定。表 1 纤维素酶的理化指标项目液体剂型固体剂型食 品 级“工 业 级b食 品 级“工 业 级b 总酶活力“u/g(或u/mL)F P A3 0 0C MC A-D NS2 0 0 0C MC A-V S5 0 0p H(2 5 0C)4.0 7.0a食品级产品也可用作饲料添加剂。用作饲料添加剂的纤维素酶制剂还应符合其他相关标准法规的要求b工业级产品 不得用于食品工业 及饲料添加剂(食用酒精和蒸馏酒类除外)。c可根据需要任意标注一种酶活。5，4 卫生要求 卫生指标应符合表 2 的规定。表2 纤维素酶的卫生指标项目液体剂型固体剂型食 品 级“工 业 级“食 品 级.工 业 级“，金属(P A P b 计)，m g/k g3 03 0铅，m g/k g55砷，m g/k g33菌落总 数，c f u/g -5 水1 0 5 X1 0大 肠菌群，MP N/t 0 0 g3 只 1 0 3 x1 0 沙门氏 菌(2 5 9 样)不得检出不得检出a.6同 表IQ B 2 5 8 3 一2 0 0 35.5 保质期5.5.1 在2 5 以 下，固 体酶制剂保质期不少于1 8 0 d，保质期内酶活力 应不低于标示的 酶活力5.5.2 在2 5 以下，液体酶制剂保质期不少于9 0 d，保质期内 酶活力应不低于标示的酶活力。试验 方法61 净含量 按 J J F 1 0 7 0 执行。6.2 外观 取样品l o g(或M L)，观察、嗅闻，作出 判断，做好记录。6.3 酶活力6.3.1 滤纸酶活力，F P A 按附录A方法测定。6.3.2 梭甲基纤维素 还原糖法)酶活力，C MC A-D N S 按附录B方法测定。6.3.3 梭甲 基纤维素(粘度法)酶活力，C M C A-V I S 按附录 C方法测定。6.4 p H 按Q B/T 1 8 0 3 一1 9 9 3 第9 章测定。6.5 重金属 按 G B/T 8 4 5 1 测定。6.6铅 按 G B/T 5 0 0 9.1 2测定。6.7 砷 按 G B/T 5 0 0 9.1 1 测定。6.8 菌落总数 按 G B/T 4 7 8 9.2测定。6.9 大肠菌群 按 G B/T 4 7 8 9.3测定。6.1 0 沙门氏菌 枯 GR/T 4 7 8 9.4拾骑。检验规则和标志、包装、运输、贮存包装储运图示 标志 按G B/T 1 9 1 执行。食品 级纤维素酶 制剂，应在标签(或质量证明)上标注“食品级”字样。除 上述提及条款外，均按Q B/T 1 8 0 4 执行。771议73QB 2 5 8 3 一2 0 0 3 附录A (规范性附录)滤纸酶活力(F P A)的测定方法A.1 原理 纤维素酶在一 定温度和p H条件下，将纤维素 底物(滤纸)水解，释放出还原糖。在碱性、煮沸条件下，3,5 一 二硝基水 杨酸(D N S 试剂)与还原糖发生显色反应，其颜色的 深浅与 还原糖(以 葡萄糖计)含量成正比。通过在5 4 0 r u n 测其吸光度，可得到产生还原糖的量，计 算出 纤维素酶的滤纸酶活力。以此代表纤维素酶的酶活力。A.2 试剂和溶液 除非另有说明，在分 析中 仅使用确认为分析纯的 试剂和 蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。A.2.1 D N S试剂 称取3,5 一 二 硝基水杨酸(1 0 1 0.1)g，置于约6 0 0 m L 水中，逐渐加入氢氧化 钠 l o g，在5 0 水浴中(磁力)搅拌溶解，再依次 加入酒石酸甲 钠2 0 0 g、苯酚(重 蒸)2 g 和无水亚硫酸钠5 g，待全部溶解并澄清后，冷却至室温，用水定容至 I O O O m L，过滤。贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置7 d 后使用。A.2.2 柠檬酸缓冲液，0.0 5 m o l/L p H 4.8(适用于酸性纤维素酶)称取一 水柠檬酸4.8 3 g,溶于约7 5 0 m L水中，在搅拌情况下，加入柠檬酸三钠7.9 4 g,用水定容至1 0 0 0 m L。调节 溶液的p H到(4.8 士 0.0 5)备用。注:也可 采用p H 4.8乙 酸缓冲溶液:称取三水乙酸钠8.1 6 g,溶于约7 5 0 m l,水中，加入乙 酸2.3 1 m l,，用水定容至 1 0 0 0 M L.调