论著纳米二氧化钛颗粒对人肝癌细胞ＨｅｐＧ２中ｃｉｒｃＲＮＡ表达谱的影响史佳琪ꎬ马莺ꎬ张奕ꎬ陈章健ꎬ贾光△(北京大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系ꎬ食品安全毒理学研究与评价北京市重点实验室ꎬ北京１００１９１)[摘要]目的:通过体外细胞实验探讨纳米二氧化钛颗粒(ｔｉｔａｎｉｕｍｄｉｏｘｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓꎬＴｉＯ２ＮＰｓ)对人肝癌细胞(ｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓꎬＨｅｐＧ２)中环状核糖核酸(ｃｉｒｃｕｌａｒｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄꎬｃｉｒｃＲＮＡ)表达谱的影响ꎬ并通过生物信息学分析ＴｉＯ２ＮＰｓ肝细胞毒性的潜在机制ꎮ方法:分别从粒径、形状、团聚状态等方面对ＴｉＯ２ＮＰｓ进行表征ꎬ在暴露于０、１.５６、３.１３、６.２５、１２.５、２５、５０、１００和２００ｍｇ/ＬＴｉＯ２ＮＰｓ２４ｈ或４８ｈ后ꎬ利用细胞计数试剂盒(ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｋｉｔ￣８ꎬＣＣＫ８)检测ＴｉＯ２ＮＰｓ对ＨｅｐＧ２的细胞毒性ꎮ以０ｍｇ/Ｌ(对照组)和１００ｍｇ/Ｌ(染毒组)的ＴｉＯ２ＮＰｓ处理ＨｅｐＧ２细胞４８ｈ后ꎬ收集细胞样本ꎬ提取ＲＮＡ并进行测序ꎮ筛选出对照组和ＴｉＯ２ＮＰｓ染毒组之间的差异ｃｉｒｃＲＮＡꎬ通过多变量统计分析差异ｃｉｒｃＲＮＡ靶基因的富集通路ꎮ根据测序结果ꎬ筛选出显著改变的基因以及显著富集通路中的重要基因ꎬ对ＨｅｐＧ２细胞进行实时逆转录聚合酶链反应(ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ￣ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎꎬｒｅａｌ￣ｔｉｍｅＲＴ￣ＰＣＲ)验证ꎮ结果:ＴｉＯ２ＮＰｓ为球形锐钛矿ꎬ在无血清培养基中的水合粒径为(３２３.５０±８５.４４)ｎｍꎬＺｅｔａ电位为(－２１.００±０.７２)ｍＶꎮＣＣＫ８细胞毒性检测结果发现ꎬ随着ＴｉＯ２ＮＰｓ浓度的增加ꎬ细胞活力逐渐下降ꎮＲＮＡ测序共发现１１４７８个ｃｉｒｃＲＮＡꎬ与对照组相比ꎬＴｉＯ２ＮＰｓ染毒组(１００ｍｇ/Ｌ)中共有８９个差异ｃｉｒｃＲＮＡꎬ其中５９个上调ꎬ３０个下调ꎮ根据日本京都基因与基因组百科全书(ＫｙｏｔｏＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＧｅｎｅｓａｎｄＧｅ￣ｎｏｍｅｓꎬＫＥＧＧ)富集分析ꎬ差异ｃｉｒｃＲＮＡ的靶向基因主要富集在脂肪酸降解、范可尼贫血(Ｆａｎｃｏｎｉａｎｅｍｉａ)通路以及脂肪酸代谢等通路上ꎮＲｅａｌ￣ｔｉｍｅＲＴ￣ＰＣＲ验证结果显示ꎬ代表性...
