青少年隐形矫治患者龈上菌斑龋病活跃性分析_岳圆.pdf

*基金项目:国家自然科学基金项目(编号:81271190)*通信作者:黄声富，E-mail:shengfuh2006whueducn青少年隐形矫治患者龈上菌斑龋病活跃性分析*岳圆1，程波1，黄声富2*(1武汉大学中南医院口腔科湖北武汉430071;2武汉大学口腔医院正畸科湖北武汉430071)摘要 目的:检测青少年隐形矫治患者龈上菌斑致龋菌数目及其产酸耐酸能力变化，分析隐形矫治对青少年龋病活跃性的影响。方法:选取青少年隐形矫治患者 14 例，在矫治前、矫治 3 个月、6 个月、12 个月采集患者龈上菌斑样本;通过平板计数检测龈上菌斑中总厌氧菌、链球菌及变形链球菌的数目;将适当稀释度菌液加入不同 pH 值和不同葡萄糖浓度的 BHI 培养基中，检测其产酸耐酸能力。结果:与矫治前相比，在患者隐形矫治后 3 个月、6 个月、12个月，厌氧菌数量及变形链球菌数量明显增加。菌斑产酸能力及耐酸能力均显著增强，且矫治 6 个月时最为显著。结论:隐形矫治器的佩戴使青少年患者龈上菌斑龋病活跃性增强，患龋风险增加。关键词 隐形矫治;龈上菌斑;龋病活跃性;产酸性;耐酸性 中图分类号 78357802 文献标识码 Adoi:10.3969/jissn1003-1634.2023.06.008Analysis of caries activity of supragingival plaque in adolescent invisible orthodontic patientsYUE Yuan1，CHENG Bo1，HUANG Sheng-fu2*1 Department of Stomatology，Zhongnan Hospital of Wuhan University，Hubei Wuhan430071，China;2Department of Orthodontics，School of Stomatology，Wuhan University，Hubei Wuhan 430071，China Abstract Objective:This study aimed to investigate the alteration of the number of cariogenic bacteria and acid-producing and acid-resistant ability of supragingival plaque in adolescents with invisible orthodontic treatment，thus analyzingthe effect of invisible orthodontic treatment on c aries activity in adolescentsMethods:Fourteen cases of adolescent patientswith invisible orthodontic treatment were selectedThe supragingival plaque samples were collected at the pre-treatment，3months，6 months and 12 months after treatmentThe number of total anaerobic bacteria，streptococcus and Streptococcus mu-tans in supragingival plaque was detected by counting platesThe appropriate dilution of bacterial solution was added to brainheartinfusion(BHI)medium with different pH and different glucose concentrations to detect its acid-producing and acid-toler-ant abilityesults:Compared with the pre-treatment，the number of anaerobic bacteria and Streptococcus mutans increasedsignificantly at 3 months，6 months and 12 months after invisible treatmentAcid production ability and acid tolerance abilityof plaque were significantly enhanced，which were most significant at 6 months of treatmentConclusion:The wearing of in-visible appliance increases caries activity and caries risk in adolescent patients Key words Invisible orthodontic;Supragingival plaque;Caries activity;Acid production;Acid resistance釉质脱矿是正畸矫治过程中一种常见的并发症，其发病率达 50%80%1，2，且釉质脱矿导致白垩色斑在正畸治疗结束后长时间仍难以消退，进而严重影响正畸治疗的美观效果及牙齿的健康3。釉质脱矿与正畸矫治器所引起口腔致龋菌群的改变密切相关4。传统固定矫治器的置入为菌斑附着提供有利条件，降低口腔自洁能力，导致口腔致龋微生物数目及产酸耐酸能力显著增加，龋病易感性增强4-6。与固定矫治器相比，隐形矫治器因其美观、舒适等优点，日益受到患者青睐7，8。目前尚未清楚隐形矫治是否和固定矫治一样会导致口腔致龋菌群改变，增加患者龋病易感性。考虑到龈上菌斑中致龋菌水平与釉质脱矿更为相关，有必要对隐形矫治患者龈上菌斑中致龋菌特点进行研究。本研究选取青少年隐形矫治患者 14 例，在隐形矫治期间不同时间点采集龈上菌斑样本，分析龈上菌斑中致龋菌(厌氧菌属、链球菌属、变形链球菌属)的数目及其产酸性、耐酸性变化。资料和方法1病例选择研究样本来自于 2017 年 10 月2018 年 2 月在武汉大学口腔医院正畸一科就诊的 14 例青少年隐形矫治患者;男 5 例，年龄(14.62.42)岁，女 9 例，年龄(15.01.49)岁;其中轻度拥挤(24 mm)5 例;中度拥挤(48 mm)7 例;重度拥挤(8 mm)2例。纳入标准:选择隐形矫治的正畸治疗患者，年龄 1218 岁，恒牙列;正畸矫治时间不少于 12 个月，上下颌均纳入矫治;近 3843临床口腔医学杂志 2023 年 6 月第 39 卷第 6 期J Clin Stomatol，Jun.2023，Vol.39，No.6个月内未服用抗生素，无系统性疾病;患者口腔卫生习惯良好，能认真完成口腔卫生清洁，并能按照医嘱及时就诊;患者及监护人知情并同意参加此项研究，在研究过程中能积极配合，并签署知情同意书。本研究经武汉大学口腔医院医学伦理委员会批准同意。2菌斑采集方法在隐形矫治期间的不同时间点(矫治前、矫治 3 个月、6 个月、12 个月)对同一患者采集龈上菌斑样本。被采检者 8 h 以上未刷牙及 2 h 以上未进食，局部棉球隔湿，生理盐水冲洗采样部位，气枪吹干，无菌刮匙刮取右上颌及左下颌象限牙齿唇(颊)舌及牙合面的菌斑，置于 1 mL 盛有无菌林格氏液的 EP 管中。样本低温条件下 2 h 内转运至实验室，振荡 60 s，充分打散细菌，用 PBS 作连续倍比稀释，获得实验所需的 106菌斑稀释液。3细菌的培养和计数将 50 L(稀释度为 10-6)菌液分别接种于 BHI、MS、MSB 琼脂平板，无菌涂布棒均匀涂布于平板，每个样品浓度重复接种 3次。将接种后的培养基置于 37、厌氧环境(95%N2、5%CO2)下培养 48 h，立即记录每个培养皿中的菌落形成单位(colony-forming unit，CFU)，选取 30300 之间的 CFU 值，分别计算 1 mL菌斑内总厌氧菌数、链球菌数及变形链球菌数目。4菌斑产酸性实验取适当稀释度菌液(106)100 L，加入初始 pH 值为 7.0(即 pH7.0)和葡萄糖浓度分别为 0.2%、1%、2%、5%的 900 L液体 BHI 培养基中(24 孔板)，37厌氧条件下培养 48 h，pH 计测定每个孔的 pH 值，作为菌斑生长后 pH 值(即为 pHX)。计算菌斑降低培养基 pH 值，即 pH=pH7.0pHX(pH7.0为培养基初始 pH 值，pHX为培养基菌斑生长后 pH 值)，每个样品浓度重复接种 3 次。菌斑影响培养基 pH 的变化，pH 大小可反映菌斑产酸能力的强弱，pH 越大，反映该菌斑的产酸能力越强。5菌斑耐酸实验取适当稀释度菌液(106)20 L 加入含有 pH 值分别为4.07.0(以 pH 1.0 为间隔)的180 L 液体 BHI 培养基中(96 孔板)，每个样品浓度重复接种 3 次。37厌氧条件下培养72 h，于可见光分光光度计 600 nm 处测定吸光度值 OD600，吸光度值OD600代表致龋菌生长情况，将不同 pH 下，治疗 3 个月、6 个月、12个月的吸光度值 OD600与治疗前比较，评估菌斑耐酸能力。6数据统计分析对细菌数量进行对数转换，采用 GraphPad Prism 8 软件对各数据方差分析，分别将治疗 3 个月、6 个月、12 个月的数值与治疗前进行自身对照比较，P0.05 表示具有统计学差异。结果1龈上菌斑细菌数量分析矫治前及矫治 3 个月、6 个月和 12 个月的龈上菌斑中总厌氧菌、链球菌和变形链球菌数量分析(表 1):隐形矫治器戴用后3 个月、6 个月及 12 个月与戴用前相比龈上菌斑中厌氧菌属的数目均显著升高(P0.01);链球菌数目呈增高趋势，但无统计学差异;隐形矫治器戴用后 3 个月与矫治前相比牙面菌斑中变形链球菌的数量呈升高趋势，但无统计学差异，在矫治 6 个月时及 12 个月时均显著增高(P0.05)。2菌斑总产酸性分析隐形矫治 3 个月、6 个月和 12 个月与矫治前相比，口腔菌斑产酸能力(pH)均明显增强，且在矫治 6 个月时产酸能力增强最为显著(图 1)。3菌斑耐酸性分析与矫治前相比，隐形矫治 3 个月、6 个月和 12 个月时 OD600显著升高，口腔菌斑耐酸能力显著增强(图 2)。表 1矫治前及矫治过程中细菌数量(对数值)分析(log，?xs)细菌类型样本例数治疗前治疗 3 个月治疗 6 个月治疗 12 个月厌氧菌数量146.150.416.300.43*6.320.42*6.390.40*链球菌数量145.810.415.930.485.890.426.040.33变链菌数量144.150.564.370.644.570.68*4.690.93*注:在相应时间上与矫治前相比较，*P0.05，*P0.01注:A:0.2%葡萄糖;B:1%葡萄糖;C:2%葡萄糖;D:5%葡萄糖;*P0.05，*P0.01，*P0.001，P0.0001，NSP0.05图 1菌斑总产酸性分析943临床口腔医学杂志 2023 年 6 月第 39 卷第 6 期J Clin Stomatol，Jun.2023，Vol.39，No.6注:*P0.05，*P0.01，P0.0001，NSP0.05图 2菌斑总耐酸性分析讨论目前研究显示，与釉质脱矿和龋病发生相关的致龋菌主要包括链球菌属、乳杆菌、放线菌等，其中链球菌属中的变形链球菌组与龋病密切相关;链球菌属主要为 G+兼性厌氧菌，厌氧环境有助于致龋菌的生长和繁殖1，9。本研究采用患者自身前后对照方法，与矫治前相比，隐形矫治 3 个月、6 个月和 12 个月时龈上