千金藤素通过靶向GLUT1...非小细胞肺癌细胞增殖的研究_潘岑.pdf

年月第卷第期，湖北中医药大学学报？千金藤素通过靶向干扰葡萄糖摄取抑制非小细胞肺 癌细胞增殖的研究潘岑，王庆兰，邓杨 清，王迪，黄平 平（武汉大学人民医 院，湖北 武汉 ）摘要：目的观察千金藤素（）通过把向干扰细胞葡 萄糖摄取，进而影响非小细胞肺癌细胞增殖。方法以终农度？的千金藤素处理非小细胞肺癌细胞，采用检测药物对细胞生存能力 的影响。选取、个浓度，建立高中低剂量分别处理细胞。采用细胞增殖实验检测药物对细胞增殖能力的影响，同时检测药物处理下细胞、增殖标志性基因的表达。采用分子对接模拟，测试千金藤素与 葡 萄糖转运蛋白（）的结合能力，并以测定在药物处理状态下细胞中葡 萄糖的相对含量。结果细胞活性测定结果显示，千金藤素干预后降低了细胞的活力，并呈现浓度依赖性。药物处理与，终浓度、的千金藤素均能显著降低细胞的增殖速率），并下调增殖标志性基因、的表达（）。分子对接模拟结果显示，千金藤素与 葡 萄糖转运蛋白（）能相互作用，结合能达到。采用千金藤素处理细胞与，细胞内葡 萄糖相对含量分别降低了约倍和倍（）。结论本研究揭示了千金藤素具有靶向降低细胞内葡 萄糖摄取，进而抑制 非小细胞肺癌细胞的增殖。这为进一步开发利用千金藤素作为抗肿瘤药物提供了一定的参考。关键词：肺癌；千金藤素；细胞合成；分子对接；葡萄糖中图分类号：文献标识码：，（，）基金项目：湖北省重点实验室开放项目（项目编 号：）。作者简介：潘岑（），女，武汉大学人民医 院主管护 师，研究方向：肿瘤营养研宂。通信作者：黄平平（），女，武汉大学人民 医院护士，研宄方向：肿瘤营养研宄，。，：，？，？，（）：姚国恩，王景周，陈曼娥血管性痴呆大鼠认知障碍的机制研究第三军医大学学报，（）：刘百祥，肖旭平，严文辉，等薯蓣丸加减方对鼻咽癌放疗患者病毒的影响湖 南中医药大学学报，（）：（稿件修回日期 编辑：万倩芸）？湖北中医药大学学报 年月第卷第期，：（），？，（），（），（）（），（），？：；非小细胞肺癌（）约占肺癌病例的，约的非小细胞肺癌患者在确诊时错过了最佳治疗时机。年生存率仅为，预后较差。因此，非小细胞肺癌是恶性程度最高的癌症之一，是全球发病率和死亡率极高的疾病。现阶段的抗癌药物对非小细胞肺癌的疗效并不理想，因此迫切需要找寻安全有效的抗非小细胞肺癌的疗法。千金藤素（）是一种从植物中提取的天然小分子化合物。它用于治疗多种急慢性疾病，如疟疾、脱发和内毒素休克等。最新的研宄表明，千金藤素还具有抗肿瘤的功效，对乳腺癌、肝癌和食管鳞状细胞癌等均有一定的抑制作用。有研宄显示，千金藤素通过促进活性氧物质的产生来破坏肺癌细胞的，导致肺癌细胞死亡和细胞周期停滞。千金藤素可通过上调、表达诱导人白血病细胞凋亡。等人报道，可通过 突变结直肠癌细胞中的上调和和的下调来诱导细胞周期停滞。虽然 千 金藤素对多种肿瘤 具 有一定的抑制 作用，但是其对 非小细胞肺癌的抑制作用有待研宄。因此，本研宄考察了千金藤素对非小细胞肺癌细胞的增殖作用，并从抑制 营养物质葡萄糖的摄取来探索其可能存在的机制。本研宄为合理利用千金藤素治疗非小细胞肺癌提供了理论参考与实验依据。材料与方法试剂与试药千金藤素（）购自于 公司，样品编 号，批号：；人非小细胞肺癌细胞细胞株（购自于细胞库），批号：培养基（，批号：），胎 牛血清（，批号：），双抗 试液（，批号：），胰酶消化液（，批号：），氯仿（川 东化工，批号：），二甲亚砜（，批号：），定量试剂（，批号：），检测试剂盒（锐博生物，批号：），顺铂（，批号：）。提取试剂（，批号：）。主要仪器酶标仪（公司），定量仪（公司），型凝胶成像仪（公司），分光光度计（），恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂），超净工作台（苏州空 气净化设备有限公司），培养箱（），荧光显微镜（），仪（？）。细胞培养与给药精确称取的千金藤 素 粉 末于的管中，以溶解，配制为的母液备用。实验时，用培养基稀释为高剂量、中剂量、低剂量共个终浓度的条件培养液干预细胞。指标检测细胞生存能力检测：测定 千金藤素对细胞增殖和活力的影响。将细胞接种于孔板中，密度为个？，培养至细胞密度接近融合，细胞饥饿处理后，采用不同浓度千金藤素（、）年月第卷第期，湖北中医药大学学报？处理细胞，于细胞培养箱中孵育，对照组仅加入二甲亚砜（）。随后，向每孔加入的工作液，在下再孵育，在酶标仪上测量光密度（）。细胞存活力以值表示。细胞增殖能力 测试：取对数生长期的细胞，以每孔的细胞密度接种于 孔板中，细胞融合至时，用不同浓度的千金藤 素（、阳性药物（顺铂，）处理细胞，培养后用清洗次，随后用的 多聚甲醛室温孵育固定 细胞。最后 按照试剂商的进行细胞增殖检测。细胞染色完成后，用荧光显微镜观察细胞的增殖情况，并获取图片进行统计分析。细胞增殖标志基因表达检测：采用检测千金藤素处理条件下细胞中增殖标志性基因的表达情况。将细胞以接种于孔板中，细胞生长融合至 时，分别用、的千金藤素处理细胞，细胞培养箱中孵育后用裂解液收集样品。采用天根抽提试剂盒获得细胞的总，并用逆转录试剂盒按照两步法对总进行反转录得到，最后以为模板，对增殖标志性基因、进行扩增。基因引物由上海英骏 生物技术有限公司设计合成。分子对接模拟：使用软件对千金藤素（）分子与蛋白可能的结合方式进行计算。首先需要从蛋白数据库（：）中获得（：）的晶体结构数据，在蛋白三维结构准备过程中，去掉结 构上的水分子，并添加上所有的氢原子和部分原子上所带的电荷，在最 终的结 果中，选择自由能 最 低的结合方 式进行分 析。并利用构建三维模型。细胞内葡萄糖相对含量检测：细胞内葡萄糖相对含量采用测定。色谱条件：色谱柱）。升温程序：初始温度，以 升温至，保持；以升温至（，保持，再以升温至；保持。质谱检测条件：质量范围（）：？，全扫 描模式。选取葡 萄糖峰面积，采用峰面积积分计算相对含量。统计学分析采用软件对数据进行 统计分析，计量资料以均值标准差表示，多组间 比较采用单因素方差 分析，两组间比较采用检验，以表示具有统计学差异。结果千金藤素对细胞生存能力的影响采用？千 金藤素处理细胞后，细胞活性测 定 结果显示，与组相比，千金藤素干预后降低了细胞的活力，并呈现浓度依赖性。千金藤素以浓度梯度 依赖性抑制细胞的活力，与组相比较，？浓度处理下具有显著性差异（）。见表。表细胞活性测定数据（元，）浓度（）值 与（组比较，。千金藤素对细胞增殖能力的影响采用的千金藤素分别处理细胞、后，细胞的增殖速率显著低于组（）。其中，千金藤素对细胞增殖的抑制 作用 与阳性药物相比并无显著性差异（）。统计结 果显示，处理后，与组相比，、浓度的千金藤素处理的细胞增殖速率分别被抑制了约、，；处理后，与组相比，、浓度的千金藤素处理的细胞增殖速率分别被抑制了约、。以上结 果提示千金藤素抑制的合成进而抑制细胞的增殖。见表，图。表细胞合成测定结果比较（元）浓度（）土土 与组比较，。图实验考察千金藤素对细胞增殖的抑制作用（）？湖北中医药大学学报 年月第卷第期，千金藤素对细胞增殖标志基因表达的影响经千金藤素分别 处理、后，结 果显示，细胞中 的增殖标志性基因、的水平显著低于组）。处理后，与组相比，、浓度的千金藤素分别 下调了基因的表达约、倍。与组相比，、浓度的千金藤 素分别 下 调了基因的表达约、倍。与组相比，、浓度的千金藤 素分别 下 调了 基因的表达约、倍。处理后，与组相比，、浓度的千金藤 素分别下 调了基因的表达约、倍。与（组相比，、浓度的千金藤 素 分别下 调了基因的表达约、倍。与组相比，、浓度的千金藤素分别 下调了基因的表达约、倍。以上结果表明千金藤素通过下调增殖标志性基因、的表达，进而抑制了细胞的增殖。见表表。表经千金藤素处理后 细胞基因表达比较，）基因 士士 与组比较，。表经千金藤素处理 后细胞基因表达比较，）基因 士 士 士与（组比较，。千金藤素把向影响细胞葡萄糖摄取计算机分子对接模拟结果显示，千金藤素与葡萄糖转运蛋白（）能相互作用，结合能达到，这表明千金藤 素具有靶向进而抑制的增殖的作用。细胞经过千金藤素分别处理、后，葡萄糖含量检测 结果显示，细胞内的葡萄糖相对含量明显低于对照组（）。与对照组相比较，处理与后，葡荀糖相对含量分别降低了约倍和倍。见表，图。表经千金藤素处理后细胞内葡萄糖含量比较（，）时间对照（）处理（）与对照组比较，。讨论研宄表明，癌 症的重要特征之一是细胞周 期异 常 图分子对接模拟图引起的肿瘤细胞过度增殖，因此调控肿瘤 细胞的细胞周期，抑制细胞合成复制，被认为是治疗癌症的一种有力的方法。我们的实验证实了，处理能有效降低细胞的活力，抑制细胞复制进而抑制细胞增殖的作用。此外，我们的研宄发现，下 调了、这些经典 细胞增殖标志基因 的表达。大量的研宄表 面，抑制 这些基因的表达会显著降低 细胞的增殖速率。综上，具有治疗非小细胞肺癌的潜在作用。为了更进一步的探索的作用机制，我们对细胞对营养物质葡糖糖的摄取进行了分析。研究表面肿瘤细胞的快速增殖依赖大量的营养摄取。效应证实了肿瘤细胞以糖酵解形式快速摄取能量，进而维持细胞的功能。我们的研宄显示，千金藤素干扰了细胞葡糖糖的摄取，并以较高的结合能靶向调控葡萄糖转运蛋白这一关键调控因子。我们有理由相信，千金藤 素抑制非小细胞肺癌 细胞增殖是通过干扰细胞葡萄糖的摄取，通过抑制细胞的营 养摄取来发挥作用的。我们的研宄为千金藤素 作为抗肿瘤药物的开发利用提供了参考。参考文献：马进元，于鹏，祝毓琳，等晚期或转移性非小细胞肺癌全身治疗进展中 国实用内科杂志，（）：何晓玲，陈仕红，刘祖浩，等抗肿瘤药物靶向制剂研宄概况湖北中医药大学学报，（）：，（）：谌錾，丁一，朱丽红千金藤素的抗肿瘤作用研宄进展癌症进展，（）：，？，：，：年月第卷第期，湖北中医药大学学报？补气通 络 解毒方联合方案对中晚期胰腺癌影像学变化的影响于敏张磊郭姗姗（山东省烟台市烟台山医院，山东烟台；中 国人民解放军火箭军特色医学中心，北京）摘要：目的观察补气通络解毒方联合（吉西他汀奥沙利铀）方案治疗对中晚期胰腺癌（）影像学变化的影响。方法将我院 例中晚期患者随机分为 治 疗组与对照组各例。对照组采用方案治疗，治疗组采用补气通络解毒方联合方案治疗。比较两组客观有效率（）、卡氏评分（）评分、糖链蛋白（）、癌胚抗原（）、证候和副反应量表（）评分以及平扫、动脉期、延迟期值。结果治疗后，治 疗组与对照组比较无统计学差异（户）；治疗组评分好转率高于对照组（）；两组、水平低于治疗前，治 疗组、水平低于对照组（）；两组证候评分降低，评分增加，治疗组证候评分低于对照组，评分高于对照组（）；两组平扫、动脉期、延迟期值低于 治疗前，治疗组平扫、动脉期、延迟期值低于对照组（）。结论补气通络解毒方联合方案治疗中晚期患者疗效较好，能显著提高患者体力状况，降低肿瘤标志物水平，改善证候，减少 副反应发生，降低值。关键词：胰腺癌；中晚期；补气通络解毒方；影像中图分类号：文献标识码：基金项目：火箭军新型核武器核事故医学应急救援体系研究项目（项目编 号：）。作者简介：于敏（），男，山东省烟台市烟台山医院影像科副主任技师，研宄方向：医 学影像。，：，（）：，？，（）：，？，（）：刘然，邢爽，王璐，等千金藤素通过调控 信号介导的自輕转人非小细胞市癌细胞的埃克替尼耐药性临床肺科杂志，（）：，蔡斌，马洁，李林霞，等千金藤素腹腔注射对卵巢癌模型大鼠的作用及其机制研究现代生物医学进展，（）：周玉，汪萍，杨建课黄精多糖抗肿瘤作用的研究进展湖 北中医杂志，（）：黄仁宝，周晋华，李崇慧益气养血法对消化道肿瘤化疗后血细胞及凝血功能的影响湖北中医药大学学报，（）：尹杨峰，蒋磊千金藤素通过调节信号通路对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响中 国医药生物技术，（）：（稿件修回日期 编辑：万倩芸）