Notch1信号通路通过上调P15、P21、P57抑制前列腺癌细胞增殖.pdf

论著基础研究 d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 1-8 3 4 8.2 0 2 3.1 2.0 0 5网络首发 h t t p s:/k n s.c n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/5 0.1 0 9 7.r.2 0 2 3 0 1 3 0.1 7 3 4.0 2 2.h t m l(2 0 2 3-0 1-3 0)N o t c h 1信号通路通过上调P 1 5、P 2 1、P 5 7抑制前列腺癌细胞增殖*秦丽霞,李 明,贡强君,周真珍,丁叔波(浙江省金华市中心医院放疗科 3 2 1 0 0 0)摘要 目的 研究N o t c h 1信号通路在前列腺癌中的作用及其作用机制。方法 在数据库及前列腺癌细胞系中分析检测N o t c h 1的表达情况。在L N c a p细胞系中构建N o t c h 1诱导表达系统,研究N o t c h 1诱导表达后细胞增殖、凋亡及细胞周期分布,并检测细胞周期相关因子表达情况。最后用裸鼠移植瘤形成试验验证N o t c h 1在前列腺癌中的作用。结果 与正常前列腺组织及前列腺正常细胞系相比,前列腺癌组织和前列腺癌细胞中N o t c h 1表达均降低(P0.0 5)。N o t c h 1诱导表达后前列腺癌细胞增殖能力减弱(P0.0 5)。N o t c h 1诱导表达后通过改变细胞周期而非诱导细胞凋亡使细胞增殖能力减弱(P0.0 5)。N o t c h 1诱导表达后细胞周期激酶抑制因子P 1 5、P 2 1、P 5 7表达上调(P0.0 0 1)。N o t c h 1信号通路诱导表达后可以抑制L N c a p细胞在裸鼠体内移植瘤的生长(P0.0 5)。结论 N o t c h 1信号通路通过上调细胞周期激酶抑制因子P 1 5、P 2 1、P 5 7而抑制前列腺癌细胞增殖能力。关键词 N o t c h 1;前列腺癌;增殖;细胞周期激酶抑制因子;P 1 5;P 2 1;P 5 7 中图法分类号 R 7 3 7.2 5 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 1-8 3 4 8(2 0 2 3)1 2-1 7 8 9-0 6N o t c h 1 s i g n a l i n g p a t h w a y i n h i b i t s p r o l i f e r a t i o n o f p r o s t a t e c a n c e r c e l l s b y m e d i a t i n g P 1 5,P 2 1,P 5 7Q I N L i x i a,L I M i n g,G ONG Q i a n g j u n,ZHO U Z h e n z h e n,D I NG S h u b o(D e p a r t m e n t o f O n c o l o g y R a d i o t h e r a p y,J i n h u a M u n i c i p a l C e n t r a l H o s p i t a l,J i n h u a 3 2 1 0 0 0,C h i n a)A b s t r a c t O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t a n d m e c h a n i s m o f N o t c h 1 s i g n a l i n g p a t h w a y i n p r o s t a t e c a n c e r c e l l s.M e t h o d s N o t c h 1 e x p r e s s i o n w a s d e t e c t e d i n d a t a b a s e s a n d p r o s t a t e c a n c e r c e l l l i n e s.T h e N o t c h 1 i n d u c e d e x p r e s s i o n s y s t e m w a s c o n s t r u c t e d i n L N c a p c e l l l i n e s t o s t u d y c e l l p r o l i f e r a t i o n,a p o p t o s i s a n d c e l l c y-c l e d i s t r i b u t i o n a f t e r N o t c h 1 i n d u c e d e x p r e s s i o n,a n d t o d e t e c t t h e e x p r e s s i o n o f c e l l c y c l e r e l a t e d f a c t o r s.F i-n a l l y,t h e r o l e o f N o t c h 1 i n p r o s t a t e c a n c e r w a s v e r i f i e d b y t u m o r f o r m a t i o n t e s t i n n u d e m i c e.R e s u l t s C o m-p a r e d w i t h n o r m a l p r o s t a t e t i s s u e s a n d n o r m a l p r o s t a t e c e l l l i n e s,N o t c h 1 e x p r e s s i o n i n p r o s t a t e c a n c e r t i s s u e s a n d p r o s t a t e c a n c e r c e l l s w a s d e c r e a s e d(P0.0 5).A f t e r t h e e x p r e s s i o n o f N o t c h 1,t h e p r o l i f e r a t i o n o f p r o s-t a t e c a n c e r c e l l s s l o w e d d o w n(P0.0 5).A f t e r t h e e x p r e s s i o n o f N o t c h 1,t h e p r o l i f e r a t i o n o f c e l l s w a s s l o w e d d o w n b y c h a n g i n g t h e c e l l c y c l e i n s t e a d o f i n d u c i n g a p o p t o s i s(P0.0 5).T h e e x p r e s s i o n s o f c e l l c y c l e k i n a s e i n h i b i t o r s P 1 5,P 2 1 a n d P 5 7 w e r e u p-r e g u l a t e d a f t e r N o t c h 1 i n d u c t i o n(P0.0 0 1).T h e e x p r e s s i o n o f N o t c h 1 s i g n a l i n g p a t h w a y i n h i b i t e d t h e g r o w t h o f L N c a p c e l l s i n n u d e m i c e(P0.0 5).C o n c l u s i o n N o t c h 1 s i g n a l i n g p a t h w a y i n h i b i t s t h e p r o l i f e r a t i o n o f p r o s t a t e c a n c e r c e l l s b y u p-r e g u l a t i n g c e l l c y c l e k i n a s e i n h i b i t o r s P 1 5,P 2 1 a n d P 5 7.K e y w o r d s N o t c h 1;p r o s t a t e c a n c e r;p r o l i f e r a t i o n;c y c l i n-d e p e n d e n t k i n a s i n h i b i t o r;P 1 5;P 2 1;P 5 7 据统计,发达国家中前列腺肿瘤已经超过肺癌成为男性发病率最高的肿瘤1。在我国,虽然前列腺肿瘤的发病率低于欧美等发达国家,但随着人民生活水平的提高和全民肿瘤普查力度的加大,前列腺肿瘤的发病率正逐年升高2。研究前列腺肿瘤发生、发展机制,进而为前列腺肿瘤的临床治疗寻找更有效的治疗手段具有重要的现实意义。N o t c h信号通路是生物界中从果蝇到人类中普遍存在的高度保守的信号通路,在生物组织的发育过程中扮演重要角色3-6。大量的研究表明N o t c h信号通路在多种肿瘤的发生发展中9871重庆医学2 0 2 3年6月第5 2卷第1 2期*基金项目:浙江省金华市科技计划项目社会发展类重点项目(2 0 1 8-3-0 1 6)。作者简介:秦丽霞(1 9 8 7-),主治医师,硕士,主要从事肿瘤放化疗研究。通信作者,E-m a i l:j h y y y s 1 6 3.c o m。起着关键的作用7-1 4。但N o t c h信号通路在前列腺肿瘤中的作用目前还存在争议。对于不同的肿瘤类型,甚至同一种肿瘤的不同阶段N o t c h的作用并不相同。本研究旨在探讨N o t c h 1信号通路对于前列腺肿瘤细胞增殖的影响及相关机制,为未来利用N o t c h信号通路开展前列腺肿瘤的临床治疗提供理论依据。1 材料与方法1.1 细胞株及主要试剂人源前列腺上皮二倍体细胞RWP E 1,前列腺癌细胞系L N c a p、C 4 2及2 2 R V 1购自中国科学院上海细胞库。DMEM细胞培养液购自美国T h e r m o公司,胎牛血清购自美国T h e r m o公司,脂质体细胞转染试剂(L i p o f e c t a m i n e 2 0 0 0)购自美国I n v i t r o g e n公司,慢 病 毒 质 粒 载 体(p L V X-a c G F P-N 1)购 自 美 国C l o n t e c h公司,细胞裂解液(R I P A)购自上海碧云天生物技术公司,逆转录试剂盒和荧光定量P C R试剂盒购自日本T a K a R a公司,C C K-8试剂盒购自日本D o j i n d o公司,细胞凋亡检测试剂盒购自日本东仁化学科技有限公司。A c t i n、P 1 5、P 2 1、P 5 7和N o t c h 1抗体(一抗以及二抗)购自英国A b c a m公司。1 2只4周龄的雄性S P F级B A L B/C免疫缺陷型裸鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。1.2 方法1.2.1 R T-q P C R实验 收集11 06个培养细胞,使用T R I z o l试剂提取细胞R NA,经逆转录后再用q P C R仪进行荧光定量P C R反应。记录各组基因扩增的 C t值,基因相对表达:倍数变化=2 -(C ta-C tb)目的基因-(C ta-C tb)a c t i n。C ta为实验组中基因的表达值,C tb为对照组中的基因表达值。每次实验重复3次。荧光定量P C R使用的引物见表1。表1 荧光定量P C R引物序列引物名称引物序列A c t i n正向C A T G T A C G T T G C T A T C C A G G