HPLC法同时测定保健食品中9种降糖药物的含量_于文萃.pdf

85安徽医专学报 2023 年 22 卷第 3 期HPLC法同时测定保健食品中9种降糖药物的含量于文萃【中图分类号】R587.1【文献标识码】【文章编号】2097-0196（2023）03-0085-03【摘 要】目的：建立同时测定保健食品中磺酰脲类、非磺酰脲类、噻唑脘二酮类等9种降糖药物含量的高效液相色谱方法。方法：迪马Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m），流动相为0.1%冰醋酸-0.01mol/L乙酸铵水溶液-乙腈（53:47），柱温为35，进样量为10 L，流速为1.0 mLmin-1，检测波长为210 nm。结果：9种化学降糖药完全分离，检出限为0.030.4 gmL-1；9种药物具有宽的线性范围和良好的线性关系（r0.9998）；在辅助降糖类保健食品中的加样回收率大于95%，RSD为0.77%2.03%。结论：该方法准确、简便、可操作性强，适用于筛查降糖类保健食品中磺酰脲类、非磺酰脲类、噻唑脘二酮类等9种降糖药物的非法添加。【关键词】磺酰脲噻唑脘二酮高效液相色谱保健食品含量测定doi：10.20072/ki.issn2097-0196.2023.03.028近年来，随着人们养生保健观念的逐渐加强，一些宣称可以辅助调节血糖的保健食品越来越受到老年人尤其是老年糖尿病患者的青睐，据文献1-3报道，有商家在产品中非法添加化学降糖药以达到令患者满意的降糖效果，导致患者放弃了药物治疗，长期服用该类产品将严重威胁糖尿病患者的健康。检出非法掺入化学降糖药最权威的方法是高效液相色谱-质谱联用4-5技术，但该方法设备费用昂贵，一定程度上限制了在基层检验单位的使用。本研究为了使基层检验单位也可以及时准确地筛查保健食品的药物添加问题，更快、更简便地确定降糖类保健食品中是否掺入了化学降糖药物的成分，节约检测时间和成本，建立了使用高效液相色谱-紫外检测器法同时检测9种化学降糖药物含量的方法，检测品种涵盖了目前上市的磺酰脲类、非磺酰脲类、噻唑脘二酮类等主要降糖类化学药物，该方法准确，简便，可操作性强，适用于降糖类保健食品非法添加降糖药物成分的筛查。现报告如下：1 资料与方法1.1 一般资料 本研究立项时间为2022年初，于2022年底完成。研究重点是对我市在售降糖类保健食品中是否添加降糖药物进行筛查，以保障我市人民群众的用药安全。本研究所用样品均为我市各保健食品销售商店在售的宣称具有降糖类保健功能的19个厂家生产的19个批次保健产品。1.2 仪器与试药1.2.1 仪器 岛津LC-20AT高效液相色谱系统，岛津SPD-20A（UV-VisDetector），岛津Labsolution色谱工作站。1.2.2试药对照品：格列本脲（批号：100135-201806），格列齐特（批号：100269-201505），格列喹酮（批号：100280-201403），格列吡嗪（批号：100281-201604），格列美脲（批号：100674-201904），那格列奈（批号：100619-201702），瑞格列奈（批号：100753-201303），盐酸吡格列酮（批号：100634-202104），盐酸罗格列酮（批号：100673-201902）以上均由中国药品生物制品检定研究院提供。取供试品为辅助降糖类保健食品19批（均为市售），水为纯化水，乙腈为色谱纯，冰醋酸、乙酸铵为分析纯。1.3 方法1.3.1对照品溶液的制备 精密称取格列本脲对照品10.81mg，格列齐特对照品10.12mg，格列喹酮对照品10.89mg，格列吡嗪对照品10.34mg，格列美脲对照品10.34mg，那格列奈对照品10.72mg，瑞格列奈对照品10.47mg，盐酸吡格列酮对照品10.21mg，盐酸罗格列酮对照品10.98mg，分别置于10mL的量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。分别精密量取格列本脲，格列齐特，格列喹酮，格列吡嗪，格列美脲，那格列奈，瑞格列奈，盐酸吡格列酮，盐酸罗格列酮对照品溶液各5mL，置同一50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液。1.3.2供试品溶液的制备精密称取供试品约1.5g，置100mL锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，超声提取30min（功率125W，频率53kHz），滤过，残渣用少量甲醇洗涤3次，合并滤液于50mL 作者单位：辽宁地质工程职业学院辽宁丹东118000基金项目：辽宁地质工程职业学院院级课题（编号：LDY20210101）丹东市哲学社会科学立项课题（编号：2022DDSK092）作者简介：于文萃，女，硕士，讲师2023-04-03收稿，2023-05-15修回医学基础与药学研究医学基础与药学研究86容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，即得。1.3.3色 谱 条 件 及 系 统 适 用 性 实 验迪 马DiamonsilC18色谱柱；以0.1%冰醋酸-0.01mol/L乙酸铵水溶液-乙腈（53：47）为流动相；柱温为35；进样量10L；流速为1.0mLmin-1；检测波长为210nm。混合对照品色谱图（见图1）。在该色谱条件下，理论塔板数分别按格列吡嗪、那格列奈、盐酸罗格列酮、盐酸吡格列酮、格列齐特、格列本脲、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈峰计算均不低于10000，分离度均符合 中国药典2020年版要求。1.格列吡嗪 2.那格列奈 3.盐酸罗格列酮 4.盐酸吡格列酮 5.格列齐特6.格列本脲 7.格列美脲 8.格列喹酮 9.瑞格列奈图1 混合对照品HPLC色谱图1.4 方法学考察1.4.1线性范围精密量取1.3.1项下的混合对照品溶液2L、5L、10L、20L、40L分别注入液相色谱仪，按照1.3.3项下的色谱条件进行测定，以峰面积（Y）为纵坐标，质量浓度（X）为横坐标，绘制标准工作曲线，经回归分析，格列吡嗪质量浓度在22.68413.60gmL-1，那格列奈 在21.44428.80gmL-1，盐 酸 罗 格 列 酮 在21.96439.20gmL-1，盐酸吡格列酮在20.42408.40gmL-1，格列齐特在20.24404.80gmL-1，格 列 本 脲 在21.62432.40gmL-1，格 列 美 脲在20.68413.60gmL-1，格 列 喹 酮 在21.78435.60gmL-1，瑞格列奈在20.94418.80gmL-1范围内有良好的线性关系，r0.9998，回归方程见表1。表1 9种降糖药物的回归方程与线性范围（n=5）成分回归方程r值线性范围(gmL-1)格列吡嗪Y=2320.4X+4164.2 r=0.999922.68413.60那格列奈Y=1767.2X-4108.5 r=0.999921.44428.80盐酸罗格列酮 Y=1870.5X+2260.9 r=0.999921.96439.20盐酸吡咯列酮 Y=2582.5X-1553.8 r=0.999920.42408.40格列齐特Y=1390.3X+441.55 r=0.999920.24404.80格列本脲Y=4590.4X+4633.3 r=0.999921.62432.40格列美脲Y=2166.3X+3342.9 r=0.999920.68413.60格列喹酮Y=3007.5X+8805.8 r=0.999821.78435.60瑞格列奈Y=5199.9X+3062.2 r=0.999820.94418.801.4.2精密度实验精密吸取同一混合对照品溶液10L，按照1.3.3项下色谱条件，重复进样6次，记录色谱图，9种降糖药物各自峰面积的RSD值范围为0.3%0.8%（n=6）。1.4.3稳定性实验按1.3.1项下的方法制备混合对照品溶液，按照1.3.3项下色谱条件，分别 于0，2，4，8，12，16和24h进 行 测 定，记 录 色谱图，9种降糖药物各自峰面积的RSD值范围为0.5%0.7%（n=7）。1.4.4检出限和定量限精密量取1.3.1项下混合对照品溶液，使用微量取样器精确稀释制备不同浓度的系列溶液，分别注入液相色谱，按照1.3.3项下的色谱条件测定，记录色谱图，按信噪比（S/N）为3时，确定检出限，信噪比（S/N）为10时，确定定量限，检出限和定量限结果见表2。9种降糖药物的检出限浓度范围为0.030.4g mL-1，定量限浓度范围为0.11.1gmL-1。表2 9种降糖药物的检出限和定量限结果对照品名称检出限(gmL-1)(S/N=3)定量限(gmL-1)(S/N=10)格列吡嗪0.030.1那格列奈0.20.7盐酸罗格列酮0.30.7盐酸吡咯列酮0.20.6格列齐特0.30.9格列本脲0.040.1格列美脲0.10.5格列喹酮0.060.3瑞格列奈0.41.1表3 9种降糖药物的回收率结果（n=6）标准样品加入量(gmL-1)测得量(gmL-1)回收率(%)RSD(%)51.7051.850.36 100.290.70格列吡嗪103.40103.110.90 99.720.870.77206.80206.290.12 99.760.0653.6054.500.31 101.670.59那格列奈107.20106.520.21 99.360.201.13214.40214.940.72 100.260.3354.9053.730.39 97.870.71盐酸罗格列酮109.80107.790.52 98.170.471.68219.60221.860.55 101.030.2551.0552.250.82 102.351.61盐酸吡咯列酮102.10100.850.64 98.780.632.03204.20203.711.46 99.760.7250.6051.800.37 102.370.73格列齐特101.20101.310.93 100.211.02 1.57202.40201.771.54 99.690.7654.0554.880.25 101.540.46格列本脲108.10108.741.48 100.581.38 1.05216.20219.360.78 101.460.3651.7051.500.82 99.601.57格列美脲103.40102.080.16 98.720.161.09206.80204.970.34 99.120.1654.4553.500.25 98.260.46格列喹酮108.90107.190.27 98.430.251.17217.80218.261.85 100.210.8552.3551.590.42 98.550.80瑞格列奈104.70103.180.36 98.540.351.23209.40210.700.43 100.620.201.4.5回收率试验在空白降糖保健食品供试品溶液中精确加入降糖药物对照品溶液，配成低、87安徽医专学报 2023 年 22 卷第 3 期中、高3个浓度的加样标准品样品，考察9种降糖药物成分在降糖保健食品中的回收率。结果见表3。2 结 果取供试品为19个生产厂家共计19个批次的辅助降糖类保健食品，按1.3.2的方法制备供试品溶液，按照1.3.3项下的色谱条件进行测定，记录色谱图，以外标法按峰面积计算含量。与对照品检测结果对照，结果显示19个批次的供试品，均未检出磺酰脲类、非磺酰脲类、噻唑脘二酮类等9种降糖药物的非法添加，证明检测方法有效。3 讨 论辅助降糖类保健食品是具有保健功能或者以补充营养物质为目的的食品，适宜于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的，并且是对人体不产生任何急性、亚急性或慢性危害的食品，正因为保健食品被定义为食品的一个种类，所以在人们的印象中保健食品会比药品安全，但目前市场上在售降糖类保健食品中个别存在添加降糖药物的现象，对老年朋友或者糖尿病患者来说，服用这种添加降糖药物的保健食品会比直接服用降糖药物后果严重，因为降糖药物会明确指明适用人群、服用剂量、不良反应以及注意事项等等6-7，而添加降糖药物的保健食品则属于违法行为，其没有明确地标出添加的是何种药物