eIF2B1在肝细胞癌中的表达及意义.pdf

安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2023 Ma y；58(5)799网络出版时间：2023-04-21 10：58：19 网络出版地址:h t t ps:/k n s.c n k i.n et/k c ms/d et a il/34.1065.R.20230420.1340.016.h t mleIF2Bl在肝细胞癌中的表达及意义齐文月J周大臣駕张振华J夏国美J陈 伟駕邹桂舟I摘要 目的 探究真核细胞翻译起始因子2B1(eIF2Bl)在 肝细胞癌(HCC)中的表达与其临床预后的相关性。方法 通过对标本库中743例HCC患者的临床数据进行随访，筛 选出91例具有完整随访信息的与乙型肝炎病毒(HBV)相关 的HCC患者，选择其术后肿瘤组织,同时留取距肿物边缘 2 c m的癌旁组织，制作为组织芯片，进行West er n bl o t和免 疫组化实验，使用Ima g e J分析组织芯片染色的阳性细胞比 例及West er n bl o t结果的灰度值，通过R4.0.5软件对纳入患 者的临床数据和随访数据进行统计学分析。结果免疫组 化结果提示相对于癌旁组织中的表达,eIF2Bl在肿瘤组织 中的表达效果更强。West er n bl o t结果显示，与HepG2细胞 比较,eIF2Bl在HepG2.2.15细胞中表达更强.HCC组织中 eIF2Bl的表达与肿瘤数目相关(P 0.05)。Co x多因素回归分析结果显示,eIF2Bl的表达是HBV-DNA阳性患者总体临 床预后的独立危险因素(HR=4.28,P=0.018)o结论 在 HBV相关的HCC组织中,eIF2Bl的表达显著增强且与HBV DNA阳性的患者的整体生存显著相关。关键词 肝细胞癌;乙型肝炎病毒；eIF2Bl；eIF2a；蛋白质翻 译;预后中图分类号R735.7 文献标志码A 文章编号1000-1492(2023)05-0799-07 d o i：10.19405/j.c n k i.issn l OOO-1492.2023.05.016原发性肝癌是全球第六大癌症,居全世界癌症 相关病死率的第三位。在我国，肝细胞癌(h epa-t o c el l u l a r c a r c in o ma,HCC)是最常见的肝癌类型，占 总病例的85%-90%20肝癌由于其起病隐匿，早 期易漏诊，大多数患者确诊时已处于疾病的中晚阶 段，预后不佳，发现并研究新的分子靶点，是当前 HCC的研究热点内容之一。近年来的研究发现,蛋白质翻译的调控在肿瘤的发生发展过程中发挥着 重要的作用,但是在HCC中，目前还缺少足够的研2023-01-04 接收基金项目：安徽省自然科学基金(编号：1608085MH162)作者单位:安徽医科大学第二附属医院1肝病科、2肝胆外科，合肥230601作者简介:齐文月，女,硕士研究生；邹桂舟，男，教授，硕士生导师，责任作者,E-ma il:a y zo u-g u izh o u sin a.c o m it s ef f ec t o n ex pr essio n o f in f l a mma t io n f a c t o r s in LP S-in d u c ed RAW264.7 c el l s,a s w el l a s o n t h e pr o l if er a t io n a n d a po pt o sis o f RAW264.7 c el l s.Me t hods Th e NUP 85 g en e w a s a mpl if ied by P CR t o c o n st r u c t pc DNA3.1-3 x Fl a g-C-NUP 85 eu k a r y o t ic ex pr essio n pl a smid.Th e pc DNA3.1-3 X Fl a g-c v ec t o r w a s d iv id ed w it h en zy mes.Th e pu r if ied P CR pr o d u c t w a s l ig a t ed w it h t h e v ec t o r,a n d t h e l ig a t ed pr o d u c t w a s t r a n sf o r med in t o ba c t er ia l c o mpet en t c el l s Aft er id en t if ic a t io n by en zy me d ig est io n,seq u en c in g a n d a n a l y sis w er e per f o r med.Th en,it w a s t r a n sf ec t ed in t o RAW264.7 c el l s,a n d t h e bl a n k pl a smid w it h o u t NUP 85 g en e w a s set a s t h e c o n t r o l g r o u p.Th e ef f ec t o n c el l pr o l ifer a t io n a n d a po pt o sis w er e d et ec t ed by CCK-8 a ssa y a n d f l o w c y t o met r y,a n d t h e ex pr essio n o f in f l a mma t o r y c y t ok in es su c h a s t u mo r n ec r o sis f a c t o r-a(TNF-a)a n d in t er l eu k in-6(IL-6)in LP S-in d u c ed RAW264.7 c el l s w a s d et ec t ed by West er n bl o t a n d ELISA.Re sult s En zy me d ig est io n id en t if ic a t io n a n d West er n bl o t r esu l t s sh o w ed t h a t pc DNA3.1-3 x Fl a g-c-NUP 85 eu k a r y o t ic ex pr essio n pl a smid w a s su c c essf u l l y c o n st r u c t ed a n d ex pr essed.Th e r esu l t s o f CCK-8 a ssa y sh o w ed t h a t t h e c el l su r v iv a l r a t e o f NUP 85 o v er ex pr essio n g r o u p w a s sig n if ic a n t l y l o w er t h a n t h a t o f c o n t r o l g r o u p a f t er 24 h (0.55 0.03)vs(0.67 0.05),F=30.98,P 0.05.Th e r esu l t s o f f l o w c y t o met r y sh o w ed t h a t t h e c el l a po pt o sis r a t e o f NUP 85 o v er ex pr essio n g r o u p w a s h ig h er t h a n t h a t o f c o n t r o l g r o u p (15.78 1.05)%vs(13.40 0.47)%,F=75.38,P 0.05.Th e r esu l t s o f West er n bl o t a n d ELISA sh o w ed t h a t a f t er t r a n sf ec t io n o f pc DNA3.1-3 X Fl a g-c-NUP 85,t h e ex pr essio n o f TNF-a a n d IL-6 in RAW264.7 c el l s w er e h ig h er t h a n t h o se in t h e c o n t r o l g r o u p,w it h st a t ist ic a l sig n if ic a n c e(P 0.05).Conc lusion NUP 85 c a n in h ibit t h e pr o l ifer a t io n a n d pr o mo t e a po pt o sis in LP S-st imu l a t ed RAW264.7 c el l s,a n d NUP 85 c a n pr o mo t e t h e ex pr essio n o f inf l a mma t o r y c y t o k in es IL-6 a n d TNF-a in LP S-st imu l a t ed RAW264.7 c el l s.Key words NUP 85；RAW264.7 c el l s；pr o l if er a t io n；a po pt o sis；TNF-a；IL-6800安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2023 Ma y；58(5)究数据。蛋白质的翻译过程主要包括起始、延长和 终止3个步骤，其中翻译的起始阶段被认为是蛋白 质合成中重要的限速步骤，起始因子(t r a n sl a t io n in it ia t io n f a c t o r,eIFs)通过调控遗传密码来影响蛋白质 的翻译，其中发挥重要作用的有eIF2、eIF2B、eIF4F 复合物等。eIF2与eIF4F复合物是蛋白质翻译过程 中两个关键调控点，前期研究表明eIF4F复合物 对HCC患者有一定的预后价值，但目前关于 eIF2Bl在HCC中表达的研究较少。基于此背景,该研究致力于探讨eIF2Bl在HCC中的表达及其临 床意义。1材料与方法1.1主要材料 胎牛血清购自美国Gibr o公司;一 抗eIF2Bl、eIF2a、P-eIF2a购自美国CST公司；山羊 抗兔或抗鼠二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公 司；HCC细胞系HepG2和HepG2.2.15购自中国科 学院上海细胞库，其中HePG2细胞指人肝癌细胞,HepG2.2.15是指稳定转染了 HBV DNA的人肝癌 细胞;BCA试剂盒和4%多聚甲醛购自上海碧云天 生物技术有限公司。1.2方法1.2.1临床数据的收集与分析 从安徽医科大学 第二附属医院现有的HCC组织标准库中，筛选出 91例具有完整随访信息的，且与乙型肝炎病毒(h epa t it is B v ir u s,HBV)相关的HCC术后患者的配 对临床组织(包括肿瘤组织以及距肿物边缘2 c m 的癌旁组织)，制作4套组织芯片(t issu e mic r o a r r a y,TMA1 4)o所纳入HCC患者的标准:首次病理 确诊为HCC；患者有乙型肝炎病史，首次诊断为 HCC且年龄18-70岁:术前未行放疗、化疗及相 关抗肿瘤治疗。排除标准:混合型肝癌或合并其 他肝脏恶性肿瘤;既往或同期伴有其它脏器恶性 肿瘤，包括复发性HCC；合并自身免疫系统疾病 的患者;临床病理资料不完整患者。随访通过与 患者或患者家属的联系来保持对出院患者病情的追 踪,具体内容包括:患者入院以来的肝功能指标;术后病理报告的肿瘤的大小、数目以及卫星灶;出院之后的3年生存率和5年生存率以及生存 状态等。该研究已通过安徽医科大学第二附属医院 伦理委员会审查(编号：202