菊花珍品梨香菊离体快繁技术研究.pdf

菊花珍品梨香菊离体快繁技术研究邵会会(唐山园林科学研究所,河北唐山 063000)摘要 以梨香菊的幼嫩叶片为外植体,MS 为基本培养基,研究了不同植物生长调节剂及基本培养基对其愈伤组织诱导、增殖、分化及丛生芽增殖和生根的影响,旨在建立离体快繁体系。结果表明:用 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L 作为培养基可以较快地建立间接再生体系,诱导愈伤组织;愈伤组织增殖的最佳培养基为 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L;MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L 为最佳的分化培养基,分化的芽数较多,芽体健壮饱满;MS+6-BA 1.0 mg/L 最适合丛生芽增殖,增殖系数高,芽体粗壮、质量好;1/2MS+NAA 1.0 mg/L 培养基中梨香菊生根最好。关键词 梨香菊;组培;增殖;分化中图分类号 S682.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2023)11-0070-03doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2023.11.016 开放科学(资源服务)标识码(OSID):Study on the Technique of in vitro Rapid Propagation of Chrysanthemum curiosa LixiangjuSHAO Hui-hui(Garden Institute of Tangshan,Tangshan,Hebei 063000)Abstract The leaves of Lixiangju were used as explant,plant growth regulators and basic mediums were studied on callus induction,multi-plication,differentiation and shoot multiplication,rooting and growth.The results showed that use MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L as cul-ture medium to establish indirect regeneration system and induce callus more faster and better.MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L was the best culture medium for callus multiplication.MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L was the best culture medium for callus differentiation,the number of buds was more than some other treats,buds stronger and fuller.The vigor of buds was best.When used MS+6-BA 1.0 mg/L as cul-ture medium for shoot multiplication and growth,multiplication coefficient higher,the length of buds longer significantly than other treats.The best rooting medium was 1/2MS+NAA 1.0 mg/L.Key words Lixiangju;Tissue culture;Multiplication;Differentiation基金项目 河北省建设科技研究计划项目。作者简介 邵会会(1985),女,河北沧州人,工程师,硕士,从事园林植物育种与栽培养护研究。收稿日期 2022-07-29 梨香菊又名白梨香,花色洁白、素雅,因具有酷似鸭梨的香味而得名。轻轻晃动花头就有酷似鸭梨的香气扑鼻而来,更有“盈手生香”的说法,中花期前香味较浓,后随花朵绽放程度的提高香味逐渐变淡,栽培历史达数百年,是目前中国数千个菊花品种中唯一一个具有特殊香味的菊花品种1。梨香菊的花和茎中含有高浓度的挥发油,是普通药用菊花的310 倍,其绿原素和黄酮类成分含量也较高,是目前我国药用菊花中黄酮类成分含量最高的菊花品种之一。因此,其具有较高的保健、药用作用及经济价值。植物组织培养的研究历史可以追溯到 19 世纪中期,其发展的理论基础是植物细胞全能性及植物生长调节剂的应用2。采用组织培养的方法对植物进行离体培养,不仅繁殖系数高、繁殖速度快,而且还可以进行品种的脱毒复壮、种质资源的离体保存等研究。长期以来,梨香菊均由扦插和分株的方式进行繁殖,品种特性有不同程度的退化,而目前国内外关于梨香菊的相关研究尚鲜见报道。笔者选用梨香菊幼嫩叶片为外植体材料,旨在建立一套梨香菊的高效再生体系,为今后其脱毒育苗、育种及其他方面的研究工作提供理论和实践依据。1 材料与方法1.1 试验材料 梨香菊幼嫩叶片。1.2 试验方法1.2.1 无菌体系的建立。选取梨香菊健壮的幼嫩叶片,流水冲洗20 min,在无菌条件下用75%乙醇消毒30 s,再用无菌水冲洗 2 次,然后用 1.0%NaClO 溶液消毒 5 min,最后用无菌水冲洗 45 次,将消毒后的叶片于接种盘内切去四周后,再切成 0.5 cm0.5 cm 的小块,接种在愈伤组织诱导培养基上。1.2.2 愈伤组织增殖、分化培养。将获得的梨香菊愈伤组织切成 1.0 cm1.0 cm 的小块,接种于愈伤组织增殖、分化培养基中,25 d 后统计增殖、分化系数,实时观察其生长状况并记录。1.2.3 丛生苗增殖培养。将分化培养获得的无菌苗切成单株,分别接种于增殖培养基中,观察侧芽长势,20 d 后统计增殖系数。1.2.4 试管苗生根培养。将增殖培养获得的无菌苗接种于生根培养基中,观察根系生长情况,20 d 后统计生根率。1.3 试验条件 以上试验均以 MS 为基本培养基3,添加琼脂 7 g/L、蔗糖 30 g/L,pH 5.8,每处理接种 10 瓶,每瓶接种 3块(株),光照强度 2 000 lx,光周期12 h/8 h,温度(251)。1.4 数据分析 采用 Excel 进行数据计算整理,SPASS 16.0进行方差分析,LSD 进行多重比较(P0.05)。增殖系数=增殖后的愈伤组织重量(侧芽数)/接种时愈伤组织重量(芽数)再生率=再生出不定芽的愈伤组织数/接种愈伤组织数100%生根率=生根芽数/接种芽数100%2 结果与分析2.1 无菌体系的建立 将梨香菊叶片消毒后接种在 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L 的培养基上,发现接种5 d 后叶片明显膨起、变大,颜色浅绿,7 d 时叶片表面有透明凸起和丝状体,叶片边缘有愈伤组织出现,20 d 时整块叶片分化形 安徽农业科学,J.Anhui Agric.Sci.2023,51(11):70-72,103成较大的愈伤组织(图 1)。图 1 叶片诱导愈伤组织形成Fig.1 Leaf induced callus formation2.2不同植物生长调节剂对梨香菊愈伤组织增殖的影响 由表 1 可知,低浓度 6-BA 搭配高浓度的 NAA 对梨香菊愈伤组织增殖具有显著的促进作用,6-BA 与 NAA 的浓度比值为 1 2时增殖系数明显增高,浓度比为 1 1时增殖系数明显降低。当6-BA 1.0 mg/L、NAA 2.0 mg/L 时愈伤组织增殖系数为 4.5,但愈伤组织颜色暗黄,有褐化迹象,活性较差,当6-BA 0.5 mg/L、NAA 1.0 mg/L 时,愈伤组织增殖系数为4.7,显著高于其他处理,且愈伤组织黄绿色、质地松脆,表面有小颗粒状凸起(图 2),活性好。因此,该处理为梨香菊愈伤组织增殖最佳植物生长调节剂配比组合。表 1 不同植物生长调节剂对梨香菊愈伤组织增殖的影响Table 1Effect of plant growth regulator on callus multiplication of Lixiangju生长调节剂浓度Plant growth regulator concentrationmg/L6-BANAA增殖系数Multiplication coefficient愈伤组织长势Growth vigor of callus0.50.52.3 e+0.51.04.7 a+0.52.03.8 c+1.00.53.3 d+1.01.02.1 f+1.02.04.5 b+注:同列不同小写字母表示处理间差异显著(P0.05)。Note:Different lowercase letters in the same column indicate significant differences between treatments(P0.05).2.3不同植物生长调节剂对梨香菊愈伤组织分化的影响 由表 2 可知,当 NAA 浓度一定时,不同浓度 6-BA 对梨香菊愈伤组织分化有明显的影响,随着 6-BA 浓度的增加,再生率不断提高,分化的芽数增加,侧芽长势逐渐变好,当6-BA 浓度为 4.0 mg/L 时,愈伤组织分化情况显著高于其他处理,但不定芽矮小、细弱,部分芽发生了玻璃化,整体分化情况较差。此外,添加低浓度的 NAA 对愈伤组织分化有显著的促进作用,不定芽叶色鲜绿,生长健壮(图 3)。因此,梨香菊愈伤组织分化的最优培养基为 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L。图 2 愈伤组织增殖Fig.2 Callus proliferation表 2 不同植物生长调节剂对梨香菊愈伤组织分化的影响Table 2Effect of plant growth regulator on callus differentiation of Lixiangju植物生长调节剂浓度Plant growth regulator concentrationmg/L6-BANAA再生率Regeneration rate%平均芽数Average number of buds芽的生长状况Growth vigor of buds0.50 40.02.5 g+0.50.0553.32.7 f+0.50.1046.71.6 h+1.0066.72.9 e+1.00.0563.33.4 c+1.00.1053.33.1 d+2.0070.03.4 c+2.00.0576.73.8 b+2.00.1060.03.5 c+4.0073.33.8 b+4.00.0586.74.2 a+4.00.1070.03.9 b+注:同列不同小写字母表示处理间差异显著(P0.05)。Note:Different lowercase letters in the same column indicate significant differences between treatments(P0.05).图 3 愈伤组织分化Fig.3 Callus differentiation2.4 不同植物生长调节剂对梨香菊丛生芽增殖的影响 由表 3 可知,添加 NAA 对梨香菊侧芽的增殖具有一定的抑制作用,不同浓度 6-BA 对梨香菊的增殖有明显的影响,随着1751 卷 11 期 邵会会 菊花珍品梨香菊离体快繁技术研究6-BA 浓度的增大,增殖系数和侧芽长势均出现不同程度的先增加后降低的迹象,6-BA 为 2.0 mg/L、NAA 为 0 时,增殖系数最高,达 9.5,但 芽 的 长 势 不 强,当 6-BA 浓 度 为1.0 mg/L、NAA 为 0 时,虽然增殖系数有所降低,但丛生芽健壮饱满,叶色鲜绿,叶片较宽,侧芽长度显著大于其他处理(图 4)。因此,梨香菊丛生芽增殖的最佳培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L。表 3 不同植物生长调节剂对梨香菊丛生芽增殖