碱提酸沉法提取补骨脂中补骨脂乙素的工艺研究.pdf

收稿日期 2021-03-20摇 修回日期 2022-01-30基金项目 安徽省自然科学基金(2008085MH284);安徽高校自然科学研究项目(KJ2019A0335);蚌埠医学院研究生科研创新计划项目(Byycxz20027)作者单位 蚌埠医学院 药学院,安徽 蚌埠 233030作者简介 孙小龙(1996-),男,硕士研究生.通信作者 吴 成 柱,博 士,硕 士 研 究 生 导 师,教 授.E鄄mail:wuchengzhu0611 文章编号 1000鄄2200(2023)05鄄0656鄄05药摇学碱提酸沉法提取补骨脂中补骨脂乙素的工艺研究孙小龙,戴轶群,马摇 慧,俞俊霞,李红梅,朱美林,吴成柱摘要目的:通过碱提酸沉的方法对补骨脂乙素的提取进行工艺优化。方法:以补骨脂乙素的含量为指标,通过单因素试验和正交试验考察料液比、碱液浓度、碱提时间、酸沉 pH、酸沉时间以及超声时间对补骨脂乙素提取工艺的影响。结果:碱提酸沉法提取补骨脂乙素的最佳工艺为:料液比为 1颐 10、碱液浓度为 4%、碱提时间为 2 h、酸沉 pH 为 6、酸沉时间为 0.5 h、超声时间为 20 min。结论:本研究优化的最佳工艺条件具有良好的复重性,且稳定可靠、经济环保,适合大量提取补骨脂中的补骨脂乙素。关键词 碱提酸沉法;补骨脂乙素;正交试验;高效液相色谱法中图法分类号 R 284.2摇 摇 摇 文献标志码 A摇 摇 摇 DOI:10.13898/ki.issn.1000鄄2200.2023.05.024Study on the extraction process of isobavachalconefrom Psoraleae corylifolia using alkaline extraction and acid precipitationSUN Xiao鄄long,DAI Yi鄄qun,MA Hui,YU Jun鄄xia,LI Hong鄄mei,ZHU Mei鄄lin,WU Cheng鄄zhu(School of Pharmacy,Bengbu Medical College,Bengbu Anhui 233030,China)Abstract Objective:To optimize the extraction process of isobavachalcone by alkaline extraction and acid precipitation.Methods:The content of isobavachalcone was set as the objective parameter.The effects of solid鄄liquid ratio,alkali concentration,alkali extractiontime,acid precipitation pH,acid precipitation time and ultrasound time on extraction process of isobavachalcone were investigatedthrough single factor test and orthogonal test.Results:The optimal extraction conditions of isobavachalcone by alkaline extraction andacid precipitation were as follows:the ratio of solid鄄liquid for 1颐 10,alkali concentration for 4%,alkali extraction time for 2 h,acidprecipitation pH 6,acid precipitation time for 0.5 h and ultrasound time for 20 min.Conclusions:In this study,the optimal processconditions have the good repeatability,and it is stable,reliable,economical and environmental鄄friendly,which can greatly improve theextraction rate of isobavachalcone from Psoralea corylifolia.Key words alkaline extraction and acid precipitation;isobavachalcone;orthogonal test;high performance liquid chromatography摇 摇中药补骨脂为补骨脂 Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实,具有补肾壮阳、补脾健胃等 功效1-2。现代研究3-4表明,补骨脂含有香豆素类、黄酮类、单萜类等多种成分,具有抗菌、抗肿瘤、治疗骨质疏松、雌激素样作用以及治疗白癜风等药理活性5-7。其中,补骨脂中的黄酮类化合物补骨脂乙素对肿瘤细胞具有较强的增殖抑制作用,已被逐渐开发和利用。补骨脂乙素具有抗炎8、抗菌9、抗肿瘤10-11等多种药理活性。但是,目前对于从补骨脂中提取补骨脂乙素的工艺研究较少,鲜有的几篇报道主要通过浸提法、超临界 CO2萃取以及回流法12,这些方法具有提取效率低、能耗大等缺点,不能用于补骨脂乙素的大批量生产。碱提酸沉法具有低能耗、低污染、毒性低、高效率的特点,可以用于中药成分的大量提取。本研究采用单因素试验以及正交试验,优化碱提酸沉法提取补骨脂乙素的提取工艺,建立了一种高效率、无污染、可行性高的提取方法,这为今后提取补骨脂乙素提供了一定的参考价值。1摇 材料与方法1.1摇 材料与试剂摇补骨脂(江苏南京上元堂大药房);补骨脂乙素标准品(宝鸡市辰光生物有限公司,纯度 98.0%);碳酸钠(分析纯,上海展云化工有限公司);盐酸(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);甲醇、乙腈(色谱纯,美国天地有限公司);三氟乙酸(分析纯,美国天地有限公司)。1.2摇 仪器摇 SOPTOP 电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司),LC鄄20A 高效液相色谱仪(日本岛津公司),MixPlus 旋涡混合仪(合肥艾本森科学仪器有限公司),L550 离心机(湖南湘仪实验室仪器开656J Bengbu Med Coll,May 2023,Vol.48,No.5发有限公司),Milli鄄Q 超纯水仪(美国 Milipore 公司),WK鄄1000A 小型高速粉碎机(山东精诚医药装备制造有限公司),DHG鄄9123A 烘箱(上海精宏科技有限公司)。1.3摇 溶液配制摇1.3.1摇 供试品溶液的制备摇将补骨脂粉末加入碳酸钠水溶液中,超声后过滤,滤液用盐酸调 pH 后再过滤,将干燥后的滤渣用色谱甲醇溶解,用微孔滤膜过滤后备用。1.3.2摇对照品溶液的制备摇称取 1.60 mg 补骨脂乙素标准品,用色谱甲醇配成 5.12 mg/mL 后依次稀释 8 倍,则对照品溶液浓度依次为 640.00、320.00、160.00、80.00、40.00、20.00、10.00、5.00、2.50 滋g/mL。1.3.3摇色谱条件摇液相色谱柱为 Waters Sun FireTMC18(4.6 mm伊 250 mm,5 滋m),在进样量为20 滋L、流速为 1 mL/min、柱温为 40 益、检测波长为254 nm 的条件下进行检测,其中,流动相为 0.05%的三氟乙酸水溶液(A)和乙腈(B)进行梯度洗脱(0 30 min,20%B 100%B;30 40 min,100%B;40 45 min,100%B 20%B;45 47 min,20%B)。1.4摇 方法学考察摇1.4.1摇专属性摇按照“1.3.3冶项下的色谱条件对对照品和供试品进行分析,记录色谱图。1.4.2摇 标准曲线的制备摇将配制好的补骨脂乙素对照品溶液按照“1.3.3冶项下色谱条件进样分析,记录峰面积并绘制标准曲线,其中纵坐标表示峰面积,横坐标表示浓度。1.4.3摇加样回收率试验摇按照“1.3.1冶项下方法将称取的 6 份补骨脂乙素供试品制备为供试品溶液,按照“1.3.3冶项下色谱条件测定 6 份溶液的峰面积;另取 6 份相同体积的供试品溶液,分别加入一定量的补骨脂乙素对照品,按上述同样方法测定峰面积,计算回收率。1.4.4摇精密度试验摇将补骨脂粉末提取液按照“1.3.3冶项下色谱条件连续进样 6 次分析,测峰面积并计算相对标准偏差(RSD),得日内精密度;同样的方法每天连续进样 3 次,共进样 3 天,记录峰面积并计算 RSD 值,得日间精密度。1.4.5摇重复性试验摇按照“1.3.1冶项下方法将 6份质量相同的补骨脂粉末制备成供试品溶液,并按照“1.3.3冶项下色谱条件进行分析,记录峰面积并计算 RSD 值。1.4.6摇稳定性试验摇按照“1.3.3冶项下的色谱条件将补骨脂粉末提取液分别于 0、2、4、8、12、24、36、48 h 进行分析,记录峰面积并计算 RSD 值。1.4.7摇单因素试验摇(1)料液比对补骨脂乙素提取工艺的影响。固定碱液浓度为 1%,碱提时间为1 h,酸沉 pH 为 5,酸沉时间为 1 h,超声时间为10 min的条件保持不变,改变料液比例分别为 1颐 5、1颐 10、1颐 15、1颐 20、1颐 25 进行试验,以补骨脂乙素含量为指标,高效液相色谱法进样分析,记录峰面积。(2)碱液浓度对补骨脂乙素提取工艺的影响。固定料液比为 1颐 5,碱提时间为 1 h,酸沉 pH 为 5,酸沉时间为 1 h,超声时间为 10 min 的条件保持不变,改变碱液浓度分别为 1%、2%、3%、4%、5%进行试验。(3)碱提时间对补骨脂乙素提取工艺的影响。固定料液比为 1颐 5,碱液浓度为 1%,酸沉 pH 为 5,酸沉时间为 1 h,超声时间为 10 min 的条件保持不变,改变碱提时间分别为 0.5、1、1.5、2、2.5 h 进行试验。(4)酸沉 pH 对补骨脂乙素提取工艺的影响。固定料液比为 1颐 5,碱液浓度为 1%,碱提时间为 1h,酸沉时间为 1 h,超声时间为 10 min 的条件保持不变,改变酸沉 pH 分别为 3、4、5、6 进行试验。(5)酸沉时间对补骨脂乙素提取工艺的影响。固定料液比为 1颐 5,碱液浓度为 1%,碱提时间为 1 h,酸沉 pH为 5,超声时间为10 min 的条件保持不变,改变酸沉时间分别为 0.5、1、1.5、2、2.5 h 进行试验。(6)超声时间对补骨脂乙素提取工艺的影响。固定料液比为 1颐 5,碱液浓度为 1%,碱提时间为 1 h,酸沉 pH为 5,酸沉时间为 1 h 的条件保持不变,改变超声时间分别为 10、15、20、25、30 min 进行试验。1.5摇 正交试验摇 通过对单因素试验结果进行分析,以 L9(34)的方式进行正交试验(见表 1)。表 1摇 正交试验因素水平水平A 碱液浓度/%B 酸沉时间/hC 超声时间/min110.510232摇15342.5202摇 结果2.1摇 方法学考察摇2.1.1摇 专属性摇由标准品可知补骨脂乙素的峰出现在 24.4 min,其峰形良好,且分离度大于 2,达到了基线分离的条件,专属性良好(见图 1)。756蚌埠医学院学报 2023 年 5 月第 48 卷第 5 期2.1.2摇 线性相关性试验摇将补骨脂乙素峰面积作为纵坐标,浓度作为横坐标绘制标准曲线,曲线方程为 Y=24 683X+11 0191,R=0.999 7,其中 Y 表示补骨脂乙素峰面积,X 表示浓度(滋g/mL),试验结果表明,实验中补骨脂乙素在 2.50 640.00 滋g/mL呈现良好的线性关系。2.1.3摇 精密度试验 按照“1.3.1冶项下方法制备供试品