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旱柳浸提物对金线莲组培苗生根的影响但 英,陈 若,何 德,李翠新(西南林业大学生命科学学院/云南省高校林木生物技术重点实验室,云南昆明 650224)摘要 用 4 种不同浓度(0.020、0.025、0.050、0.100 g/L)旱柳浸提物对金线莲组培苗生根情况进行研究,以期改善金线莲组培苗不易生根的现状。结果表明,旱柳浸提物对金线莲生根呈低浓度(0.020、0.025 g/L)促进、高浓度(0.100 g/L)抑制的趋势;相比于对照组,旱柳浸提物培养组的生根率、根长和根量均显著提高,并易对金线莲培养基表面下的茎节上分化出根。关键词 金线莲;旱柳浸提物;组织培养;生根中图分类号 S682.31 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2023)11-0025-03doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2023.11.007 开放科学(资源服务)标识码(OSID):Effect of Salix mandshurica Extract on Rooting of Anoectochilus roxburghii Tissue Culture SeedlingsDAN Ying,CHEN Ruo,HE De et al(College of Life Sciences,Southwest Forestry University/Key Laboratory of Forest Biotechnology in Yunnan,Kunming,Yunnan 650224)Abstract The rooting of tissue cultured seedlings of Anoectochilus roxburghii was studied by using four different concentrations(0.020,0.025,0.050 and 0.100 g/L)of Salix mandshurica extracts in order to improve the current situation of difficult rooting of A.roxburghii tissue culture seedlings.The results showed that the extract of S.mandshurica promoted the rooting of A.roxburghii with low concentration(0.020,0.025 g/L)and inhibited with high concentration(0.100 g/L)and could significantly shorten the culture time of tissue culture rooting.Com-pared with the control group,the rooting rate,root length and root quantity of S.mandshurica extract culture group were significantly im-proved.And it was easy to differentiate roots on the stem nodes under the surface of A.roxburghii culture medium.Key words Anoectochilus roxburghii;Salix mandshurica extract;Tissue culture;Rooting基金项目 云南省大学生创新创业训练计划(20180451041);云南省高校林木生物技术重点实验室资助项目(2018KF19);云南省高校林下生物资源保护和利用科技创新团队(51400605)。作者简介 但英(1997),女,四川成都人,硕士研究生,研究方向:资源微生物开发与利用。通信作者,副教授,博士,从事分子细胞生物学研究。收稿日期 2022-06-06 金线莲(Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lind1.),又名金线兰、乌人参,属兰科开唇兰属单子叶植物1,株型小巧,叶脉网状排列并呈金红色光泽,观赏价值极高2,是我国国家二级保护植物,素有“金草”“神药”“药王”等美称3,其味甘性平,有清凉解毒、滋阴降火、消炎止痛之功效,降血糖,降血压,利尿,保肝4,能祛风利湿、平衡阴阳、生津养颜、调和气血,能全面提高人体免疫力和增强抵抗力。金线莲对生境依赖较高,自然界蕴含量少,野外繁殖不易,其种子种胚小,需借助真菌共生才能萌发5。随着人们对金线莲药用价值的广泛认识,导致野生金线莲遭过度采挖,其生境也受到严重破坏6-7。为推进金线莲资源保护与利用,我国近些年对金线莲组织培养开展了广泛研究,各研究颇有成效,实现大规模人工种植指日可待,但金线莲组培苗面临生根较不易、根系弱、根量少、培养周期长等问题8。旱柳(Salix matsudana Koidz)枝条含有水杨酸、水杨苷、水杨醇、邻苯二酚、对羟基苯甲酸等多种糖苷类化合物和酚类化合物9,对植物具促进生根、发芽和光合作用等作用。原红娟等10研究发现,柳枝水浸提液的化感作用对长叶梅花鹿水泡(Adromischus marianiae cv.)幼苗主根数量增加总体上呈促进作用,且作用强度和水浸提液的浓度有关,整体表现出低促高抑的效应,旱柳枝条浸提物对植物根量增加有促进作用。笔者以金线莲组培扩繁苗为材料,添加不同浓度旱柳枝条浸提物,研究其对金线莲生根的影响,以期改善金线莲组培苗不易生根的现状。1 材料与方法1.1 材料 试验材料为福建金线莲组培无菌苗。1.2 方法1.2.1 金线莲组培苗培养条件。调节金线莲组培苗培养基pH 在 5.65.8,培养室温度控制在 2426,光照强度为1 5002 000 lx,光照培养时间控制在 12 h/d。1.2.2 金线莲的继代增殖。选取分化程度高、丛生芽多的金线莲无菌苗作接种材料,将丛生芽适当分割,接种至增殖培养基(MS 培养基+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+25 g/L蔗糖+6 g/L 卡拉胶)中培养。30 d 后计算增殖率,增殖率=m/n,m 为增殖后的总苗数,n 为接种的外植体数。1.2.3 金线莲的壮苗。黄勇11研究表明添加花宝一号、蛋白胨有利于金线莲的生根壮苗,添加活性炭有助于节省培养时间,获得较高的质量。选取 23 cm 长的金线莲丛生芽,其茎节无分化幼芽且叶片稍舒展的组培苗接种到壮苗培养基(MS 培养基+3 g/L 花宝一号+6 g/L 卡拉胶+25 g/L 蔗糖+3 g/L 蛋白胨+5 g/L 活性炭)中,培养 30 d 后观察并记录壮苗情况。1.2.4 旱柳浸提母液的制备。取一年生旱柳枝条,剪成约5 cm 小段,自来水冲洗晾干后放入中药材粉碎机中粉碎。称取 100 g 旱柳粉碎,加蒸馏水恒温 25 振荡处理 24 h 后,用8 层纱布过滤去除杂质,定容至 500 mL,得到 200 g/L 旱柳浸提物母液,4 冷藏备用。1.2.5金线莲的生根。对照组培养基:1/2MS+0.5 mg/L NAA+4.0 mg/L IBA+0.1 mg/L 6-BA+30 g/L 蔗糖+5.5 g/L卡拉胶11;4 个试验组为 1/2MS 培养基分别添加 0.020、0.025、0.050、0.100 g/L 的旱柳浸提物,对照组和试验组各接入 80 瓶壮苗后的金线莲。40 d 记录根长、生根率和根增殖安徽农业科学,J.Anhui Agric.Sci.2023,51(11):25-27,31 率。生根率=(P-L)/P100%(P 为总株数,L 为未生根株数),根的增殖倍数=S/T(S 为增殖后的总根数,T 为接种的外植体数)。2 结果与分析2.1 金线莲的继代增殖 培养 30 d 后金线莲分化出大量的丛生芽,有的丛生芽已变长、变壮,且茎干尖端分化的叶片多,叶片稍舒展可用于壮苗生根(图 1A)。有的丛生芽处于持续分化状态,且尖端分化叶片不舒展(图 1B)。金线莲分化诱导出丛生芽效果显著,30 d 的增殖率为 3.25。2.2 金线莲的壮苗 通过观察并记录 30 d 后 400 瓶苗的壮苗情况,金线莲的壮苗率达 99.4%。金线莲植株生长良好、较为健壮,叶片均舒展,茎干普遍增长 2 cm 左右,均可用于生根培养。可见壮苗后金线莲叶片舒展、叶面增大、茎干变粗增高(图 2)。注:A.叶舒展苗;B.叶未展苗。Note:A.Leaf spreading seedlings;B.Undeveloped seedlings.图 1 金线莲诱导增殖Fig.1 Induced proliferation of Anoectochilus roxburghii注:A.壮苗前;B.壮苗 30 d 后。Note:A.Before seedling strengthening;B.After 30 days of seedlings strengthening.图 2 金线莲壮苗培养Fig.2 Strong seedlings culture of Anoectochilus roxburghii2.3旱柳浸提物对金线莲生根的影响添加旱柳浸提物后,金线莲的生根率与平均根长均高于对照组(表 1),生根率总体上呈低浓度促进、高浓度抑制的作用,旱柳浸提物浓度 0.100 g/L时对金线莲组培苗生根率抑制明显;旱柳浸提物浓度为 0.020 g/L 时根的增殖倍数最高为 4.28;平均根长呈先增加后降低趋势,旱柳浸提物的浓度为 0.050 g/L时平62 安徽农业科学 2023 年表 1 不同旱柳浸提物对金线莲生根的影响Table 1Effects of different Salix mandshurica on rooting of Anoec-tochilus roxburghii处理Treatment 生根率Rooting rate%根的增殖倍数Root multiplication factor平均根长Average root lengthcm对照组 Control42.90.640.670.330.020 g/L 旱柳浸提液0.020 g/L S.mandshurica extract92.94.281.300.500.025 g/L 旱柳浸提液0.025 g/L S.mandshurica extract92.83.211.390.710.050 g/L 旱柳浸提液0.050 g/L S.mandshurica extract90.02.531.674.330.100 g/L 旱柳浸提液0.100 g/L S.mandshurica extract53.30.730.830.33均根长最大为 1.67 cm。0.020 和 0.025 g/L 时生根数较多(图 3B、C)。对金线莲而言,生根的数目越多,在进行移栽时存活率越高,因此在该试验中,旱柳浸提物浓度为 0.020 g/L时生根效果最好。添加旱柳浸提物的处理和对照组的处理金线莲单个茎节均仅生 1 条根(图 3),具体原因有待进一步研究。对照组不易在培养基表面下的茎节上分化出根(图 3A),而添加旱柳浸提物后均易在金线莲培养基表面下的茎节分化出根(图3BF)。3 讨论韩晓红等12发现添加 0.5 mg/L NAA、4.0 mg/L IBA、0.1 mg/L 6-BA 激素处理对金线莲的根长、生根率、出根时间有显著促进作用,但根量影响不显著,且多以气生根为主,根呈墨绿色且表面带有一层小绒毛。而该试验以 0.5 mg/L NAA、4.0 mg/L IBA、0.1 mg/L 6-BA 作为对照组,未取得与韩晓红等11一致的研究结果,而在培养基中添加旱柳浸提物后,金线莲的根多以培养基表面下的不定根为主,且生根率、根长、出根时间和根量均有显著提高,根细长,