北方农业学报2023袁51渊2冤院员-员员JOURNALOFNORTHERNAGRICULTURE韩平安，唐宽刚，常悦，等.基于CRISPR/Cas9技术创建甜菜BvCENH3基因突变体的研究［J］.北方农业学报，2023，51（2）：员-11.DOI：10.12190/j.issn.2096-1197.2023.02.01收稿日期：2023-01-31基金项目：内蒙古自治区“揭榜挂帅”项目（2022JBGS0029）；国家糖料产业技术体系项目（CARS-170104）；国家自然科学基金项目（31860407）；内蒙古自治区“草原英才”创新人才团队项目（甜菜生物技术产业创新团队）；内蒙古农牧业创新基金项目（2022CXJJN09）作者简介：韩平安（1987—），女，副研究员，博士，主要从事甜菜分子育种的研究工作。通信作者：吴新荣（1967—），男，研究员，博士，主要从事甜菜分子育种的研究工作。李晓东（1977—），男，研究员，博士，主要从事甜菜分子育种的研究工作。基于CRISPR/Cas9技术创建甜菜BvCENH3基因突变体的研究韩平安1，2，唐宽刚1，2，常悦1，2，孙瑞芬1，2，王良1，2，张自强1，2，付增娟1，2，赵尚敏1，2，吴新荣1，2，李晓东1，2（1.内蒙古自治区农牧业科学院，内蒙古呼和浩特010031；2.内蒙古自治区甜菜品种遗传改良与种质创制重点实验室，内蒙古呼和浩特010031）摘要：【目的】通过CRISPR/Cas9技术对甜菜BvCENH3基因进行编辑，建立甜菜高效基因组编辑技术体系。【方法】以BvCENH3为编辑目标，设计双靶标构建基因编辑载体，通过农杆菌侵染甜菜叶柄获得转基因植株，利用二代测序技术检测转基因植株突变情况，通过微滴数字PCR技术筛选低拷贝编辑植株。【结果】获得82株甜菜转基因植株，其中40株被成功编辑，编辑效率为48.78%，靶标1效率优于靶标2。突变类型有单碱基替换（T寅G、A寅C）、碱基缺失（TC、TCTC缺失）等5种。筛选出23株低拷贝编辑植株，BvCENH3插入拷贝数为1.1~1.9。【结论】成功对甜菜BvCENH3进行定点编辑，获得40株BvCENH3基因突变体。初步创建了甜菜基因组编辑技术体系，为甜菜单倍育种奠定了理论与技术基础。关键词：甜菜；BvCENH3；CRISPR/Cas9；基因组编辑；基因突变体中图分类号：S566.335.3文献标识码：A文章编号：2096-1197渊2023冤园2原园园园员原员员ResearchontheconstructionofsugarbeetBvCENH3genemutantsbasedonCRISPR/Cas9technologyHANPing忆an1袁2袁TANGKuan忆gang1袁2袁CHANGYue1袁2袁SUNRuifen1袁2袁WANGLiang1袁2袁ZHANGZiqiang1袁2袁FUZengjuan1袁2袁ZHAOShangmin1袁2袁WUXinrong1袁2袁LIXiaodong1袁2渊1.In...
