桔梗皂苷-D联合5-氟尿嘧啶通过葡萄糖转运蛋白-1抑制宫颈癌细胞增殖的作用及机制研究.pdf

论著基础研究 d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 1-8 3 4 8.2 0 2 3.1 2.0 0 4网络首发 h t t p s:/k n s.c n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/5 0.1 0 9 7.R.2 0 2 3 0 1 3 0.1 6 4 2.0 1 7.h t m l(2 0 2 3-0 1-3 1)桔梗皂苷-D联合5-氟尿嘧啶通过葡萄糖转运蛋白-1抑制宫颈癌细胞增殖的作用及机制研究*王立娟1,孙 全2,曾 敏1(重庆市中医院:1.病理科;2.药剂科,重庆 4 0 0 0 2 1)摘要 目的 探讨桔梗皂苷-D(P D)联合5-氟尿嘧啶(5-F U)对宫颈癌细胞的增殖抑制作用。方法 用C C K-8实验检测P D单用及与5-F U联用对宫颈癌细胞的增殖抑制作用及半抑制浓度(I C5 0)。将细胞分为对照组、2 0 m o l/L P D组、2 0 m o l/L 5-F U组及联合处理组(1 0 m o l/L P D+1 0 m o l/L 5-F U)。用流式细胞术检测各组细胞凋亡率、线粒体膜电位变化和活性氧水平变化;用细胞划痕实验检测细胞迁移;用W e s t e r n b l o t检测各组蛋白表达变化。结果 C C K-8实验结果显示,联合处理组宫颈癌细胞的存活率降低,与两个单药实验组相比,差异有统计学意义(P0.0 5)。流式细胞术显示联合处理组凋亡细胞比例达到4 2.3 7%,高于两个单药实验组,差异有统计学意义(P0.0 5)。联合处理组迁移的细胞数目显著降低,抑制效果达到5 0%,与两个单药实验组相比差异有统计学意义(P0.0 5)。流式细胞术显示联合处理组活性氧水平大幅度上升,加入NA C后联合处理组凋亡细胞比例下降为1 5.2 6%(P0.0 5)。W e s t e r n b l o t结果表明联合处理组葡萄糖转运蛋白-1(G L UT 1)蛋白的表达量降低,加入NA C后G L UT 1蛋白的表达升高。结论 P D与5-F U联用能协同发挥抗癌作用,促进宫颈癌细胞凋亡,其作用机制是通过上调细胞中R O S水平,进而抑制G L UT 1蛋白的表达。关键词 桔梗皂苷-D;5-氟尿嘧啶;细胞凋亡;活性氧;宫颈癌 中图法分类号 R 7 3 7.3 3 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 1-8 3 4 8(2 0 2 3)1 2-1 7 8 3-0 6E f f e c t a n d m e c h a n i s m o f c o m b i n e d u s e o f P l a t y c o d i n D a n d 5-f l u o r o u r a c i l t o i n h i b i t p r o l i f e r a t i o n o f c e r v i c a l c a n c e r c e l l s t h r o u g h g l u c o s e t r a n s p o r t e r-1*WANG L i j u a n1,S UN Q u a n2,Z ENG M i n1(1.D e p a r t m e n t o f P a t h o l o g y;2.D e p a r t m e n t o f P h a r m a c y,C h o n g q i n g H o s p i t a l o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,C h o n g q i n g 4 0 0 0 2 1,C h i n a)A b s t r a c t O b j e c t i v e T o e x p l o r e t h e i n h i b i t o r y e f f e c t s o f P l a t y c o d i n-D(P D)c o m b i n e d w i t h 5-f l u o r o u-r a c i l(5-F U)o n t h e p r o l i f e r a t i o n o f c e r v i c a l c a n c e r c e l l s.M e t h o d s T h e i n h i b i t o r y e f f e c t o f P D a l o n e a n d c o m-b i n e d w i t h 5-F U o n t h e p r o l i f e r a t i o n o f c e r v i c a l c a n c e r c e l l s a n d t h e I C5 0 v a l u e w e r e d e t e c t e d b y C C K-8 a s s a y.S u b s e q u e n t l y,t h e c e l l s w e r e d i v i d e d i n t o t h e b l a n k g r o u p,t h e 2 0 m o l/L P D g r o u p,t h e 2 0 m o l/L 5-F U g r o u p a n d t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p(1 0 m o l/L P D+1 0 m o l/L 5-F U),a n d t h e c e l l s w e r e t r e a t e d w i t h c o r r e s p o n d i n g c o n c e n t r a t i o n s.T h e f l o w c y t o m e t r y w a s u s e d t o d e t e c t c e l l a p o p t o s i s r a t e,m i t o c h o n d r i a l m e m-b r a n e p o t e n t i a l c h a n g e a n d R O S l e v e l c h a n g e i n e a c h g r o u p.C e l l s c r a t c h t e s t w a s u s e d t o d e t e c t c e l l m i g r a t i o n.W e s t e r n b l o t w a s u s e d t o d e t e c t c h a n g e s o f t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n i n e a c h g r o u p.R e s u l t s T h e C C K-8 e x p e r i-m e n t r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e s u r v i v a l r a t e o f t h e f o u r c e r v i c a l c a n c e r s i n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p w a s f u r t h e r r e d u c e d.C o m p a r e d w i t h t h e t w o s i n g l e-a g e n t e x p e r i m e n t a l g r o u p s,t h e d i f f e r e n c e w a s s i g n i f i c a n t(P0.0 5).F l o w c y t o m e t r y s h o w e d t h a t t h e p r o p o r t i o n o f a p o p t o t i c c e l l s i n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p r e a c h e d 4 2.3 7%,w h i c h w a s h i g h e r t h a n t h e a p o p t o s i s-i n d u c i n g e f f e c t o f t h e t w o d r u g s w h e n t r e a t e d w i t h 2 0 m o l/L,a n d t h e r e w a s a s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P0.0 5).T h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d t h e n u m b e r o f m i g r a t i n g c e l l s,a n d t h e i n h i b i t o r y e f f e c t r e a c h e d 5 0%,t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t c o m p a r e d w i t h t h e t w o d r u g g r o u p s a l o n e(P0.0 5).F l o w c y t o m e t r y s h o w e d t h a t t h e l e v e l o f r e a c t i v e o x y-g e n s p e c i e s i n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y.A f t e r a d d i n g N A C,t h e p e r c e n t a g e o f a p o p t o t i c3871重庆医学2 0 2 3年6月第5 2卷第1 2期*基金项目:重庆市科研机构绩效激励引导专项基金资助项目(c s t c 2 0 1 9 j x j l 1 3 0 0 0 9)。作者简介:王立娟(1 9 8 4-),硕士,主治医师,主要从事肿瘤病理研究。通信作者,E-m a i l:1 8 2 3 2 3 7 1 2q q.c o m。c e l l s i n t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p d r o p p e d s i g n i f i c a n t l y t o 1 5.2 6%,w h i c h w a s s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o m t h e c o m b i n e d t r e a t m e n t g r o u p(P0.0 5).W e s t e r n b l o t r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e e x p r e s s i o n o f G L UT 1 p r o t e i n d e c r e a s e d a f t e r P D a n d 5-F U w e r e c o m b i n e d,a n d t h e e x p r e s s i o n o f G L U T 1 p r o t e i n i n c r e a s