西北植物学报,２０１９,３９(６):０９６３－０９７３ActaBot．Boreal．ＧOccident．Sin．doi:１０．７６０６/j．issn．１０００Ｇ４０２５．２０１９．０６．０９６３http://xbzwxb．alljournal．net收稿日期:２０１９Ｇ０３Ｇ１３;修改稿收到日期:２０１９Ｇ０４Ｇ２５基金项目:中国农业科学院科技创新工程(ASTIPＧIAS１４);国家牧草产业技术体系(CARSＧ３５Ｇ０４)作者简介:王菊萍(１９９２－),女,在读硕士研究生,主要从事牧草遗传育种研究.EＧmail:１４８４７１５５８５＠qq．com∗通信作者:康俊梅,副研究员,主要从事牧草遗传育种的研究.EＧmail:Kangjunmei＠caas．cn蒺藜苜蓿MtbHLH１４８转录因子的克隆与转化及其功能分析王菊萍,王珍,张铁军,龙瑞才,杨青川,康俊梅∗(中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京１００１９３)摘要:bHLH(BasichelixＧloopＧhelix,bHLH)转录因子家族是植物最大的转录因子家族之一,广泛参与植物生长发育和盐胁迫应答机制.该研究利用同源克隆的方法克隆蒺藜苜蓿(Medicagotruncatula)的MtbHLH１４８基因,采用qRTＧPCR方法分析MtbHLH１４８基因在蒺藜苜蓿中的表达特性,构建超表达载体并通过农杆菌侵染法转化拟南芥(Arabidopsisthaliana),对转基因拟南芥的耐盐性相关功能进行分析研究.结果显示:(１)从蒺藜苜蓿中获得MtbHLH１４８基因,该基因cDNA全长１３４３bp,包含开放阅读框为６０３bp,编码２０１个氨基酸,蛋白分子量２２．７kD,等电点为１１．７６;蛋白结构分析显示,该蛋白无跨膜结构域,无信号肽,为亲水性蛋白;含有精氨酸/赖氨酸残基的保守结构域和典型的bHLH结构域;二级结构以αＧ螺旋和无规则卷曲为主.(２)亚细胞定位表明,MtbHLH１４８蛋白定位在细胞核.(３)进化树分析表明,MtbHLH１４８与大豆(Glycinemax)的亲缘性最近;启动子分析发现,该基因启动子区域含有光响应元件、MYB结合位点以及ABA应答元件ABRE,可能参与非生物胁迫.(４)qRTＧPCR分析发现,MtbHLH１４８基因在蒺藜苜蓿的茎中表达量最高,叶中表达量最低,且MtbHLH１４８基因受ABA(１００μmol/L)诱导并在盐胁迫(２００mmol/LNaCl)处理８h内表达量上调,而在低温(４℃)处理时表达量明显下调.(５)成功构建超表达载体pCAMBIA３３０１ＧMtbHLH１４８并转化拟南芥获得１６个抗性株系,经鉴定有１２个过表达株系,其中表达量最高的转基因株系为OE８;对OE８株系耐盐性功能分析发现,转基因拟南芥植株的发芽率明显高于野生型,盐胁迫下转基因拟南芥的根长是野生型的１．５倍,...
