基于超高效液相色谱-四极杆...心舒胶囊化学成分分析与鉴定_张欢.pdf

安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱联用技术的益心舒胶囊化学成分分析与鉴定张欢，尹德录，路翔宇，苏炳新作者单位：连云港市第一人民医院心血管内科，江苏 连云港222000通信作者：苏炳新，男，副主任医师，研究方向为心血管疾病基础及中医药结合诊疗，Email：摘要：目的 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱（UPLC-Q-TOF-MS）联用技术对中药复方益心舒胶囊的化学成分进行分析与鉴定。方法 自2021年912月，采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm100 mm，1.8 m）分析益心舒胶囊50%甲醇提取物；流动相0.1%甲酸水-乙腈，梯度洗脱；体积流量0.3 mL/min；柱温30。采用电喷雾离子源，在正、负离子模式下采集数据。运用MassLynx V4.1软件，根据化合物保留时间、准分子离子峰、二级碎片等质谱信息，结合对照品和相关文献资料，对益心舒胶囊的化学成分进行鉴定。结果 从益心舒胶囊中检测并鉴定出86个化合物，其中皂苷35个、酚酸16个、二萜20个、木脂素9个及其他类别成分6个。结论 该方法准确稳定，快速阐明益心舒胶囊的化学成分。益心舒胶囊物质基础的阐明为其质量控制、有效成分确定和治疗机制研究提供了有力支撑。关键词：主成分分析；益心舒胶囊；化学成分；结构解析；超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱Chemical analysis and identification of Yixinshu capsules based on ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight high-resolution mass spectrometryZHANG Huan,YIN Delu,LU Xiangyu,SU BingxinAuthor Affiliation:Department of Cardiovascular Medicine,The First Peoples Hospital of Lianyungang,Lianyungang,Jiangsu 222000,ChinaAbstract：Objective To identify the chemical constituents of Yixinshu capsules by ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry(UPLC-Q-TOF/MS).Methods From September to December 2021,the 50%methanol extract of Yixinshu capsules was analyzed on Waters ACQUITY UPLC HSS T3 column(2.1 mm100 mm,1.8 m)and eluted with 0.1%formic acid and acetonitrile in gradient elution.The flow rate was set at 0.3 mL/min and the column temperature was maintained at 30 C.By applying software MassLynx V4.1,the chemical constituents of Yixinshu capsules were identified according to the retention times,quasi-molecular ions,and MS/MS ions,and referring to the reference standards and literatures.Results In total,86 compounds were identified in Yixinshu capsules,including 35 saponins,16 phenolic acids,20 diterpenes,9 lignans and 6 other compounds.Conclusion The method is accurate and stable,and quickly elucidates the chemical compositions of Yixinshu capsules.The clarification of the material basis of Yixinshu capsules provids strong support for its quality control,determination of active ingredients,and research on its therapeutic mechanism.Key words：Principal component analysis;Yixinshu capsules;Chemical constituents;Structural elucidation;Ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry益心舒胶囊由人参、麦冬、五味子、黄芪、丹参、川芎、山楂7味中药组成，其中人参细粉入药，五味子、丹参 85%乙醇提取入药，麦冬等 4味水煎煮入药；具有益气复脉，活血化瘀，养阴生津的功效，主要用于气阴两虚，瘀血阻脉所致的胸痹，症见胸痛胸闷、心悸气短、脉结代；冠心病心绞痛见上述证候者1。临床研究表明，益心舒胶囊单独用药或联合用药对持续性心房颤动、心力衰竭、心绞痛等症均有效2-5。益心舒胶囊现收录于 2020年版 中国药典（一部），作为非处方药品，在心血管疾病中应用广泛。但是其相关物质基础研究薄弱，药物组成复杂，药效成分不清，进而影响了其有效的质量控制和更加广泛的临床应用。本研究自 2021 年 912 月采用 UPLC-Q-TOF-MS技术对益心舒胶囊的化学成分进行系统分析与鉴定，为其药效物质基础研究和临床应用提供参考。药物分析引用本文：张欢，尹德录，路翔宇，等.基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱联用技术的益心舒胶囊化学成分分析与鉴定 J.安徽医药，2023，27（8）：1543-1551.DOI：10.3969/j.issn.1009-6469.2023.08.013.1543网络首发时间：2023-07-06 16:59:46网络首发地址：https:/ 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）1材料与方法1.1药物与试剂益心舒胶囊（贵州信邦制药股份有限公司，批号 20210109）；人参皂苷 Rg1（批号4318，纯度 98.0%）、人参皂苷 Rb1（批号 2326，纯度98.0%）、人参皂苷Rd（批号3505，纯度98.0%）、丹参素钠（批号6716，纯度98.0%）、丹酚酸B（批号5853，纯度 98.0%）、迷迭香酸（批号 2886，纯度 98.0%）均购自上海诗丹德生物技术有限公司；丹酚酸 A（批号O-011-170607，纯度98.0%）购自成都瑞芬思生物科技有限公司；人参皂苷 Ro（批号 20120805，纯度98.0%）购自上海源叶生物科技有限公司；人参皂苷Re（批号110754-200320，纯度96.0%）购自中国食品药品检定研究院。乙腈和甲醇（色谱级，Thermo Fisher Scientific公司）、甲酸（色谱级，阿拉丁试剂优有限公司），超纯水由纯水仪制备（Milli-Q Integral，Millipore，Bedford，USA）。1.2仪器Waters ACQUITY UPLC 超高效液相色谱仪（Waters，USA），Waters Synapt G2-Si Q-TOF 质谱 仪（Waters，USA）；超 声 波 水 浴（德 国 Elma P180H）；电子天平（Quintix 224-1 CN-1，赛多利斯北京有限公司）。1.3方法1.3.1色谱条件色谱柱 Waters Acquity HSS T3（2.1 mm100 mm，1.8 m）；流动相0.1%甲酸（A）-乙腈（B），梯度洗脱（013 min，5%70%B；1315 min，70%95%B；1517 min，95%B）；体积流量 0.3 mL/min；柱温30；进样量2.0 L。1.3.2质谱条件电喷雾离子源（ESI），正离子和负离子模式检测；采集方法：Fast DDA；扫描范围：m/z 501 500；采集前三强母离子的二级碎片；毛细管喷雾电压离子：2.0 kV；锥孔电压：40 V；源温度：100；去溶剂气温度：450；去溶剂气流速：800 L/h，锥孔气流速：50 L/h；负离子碰撞能：低质量端能量设置为2030 V，高质量端能量设置为60100 V；正离子碰撞能：低质量端能量设置为1030 V，高质量端能量设置为4060 V。1.3.3溶液制备1.3.3.1供试品溶液精密称取益心舒胶囊粉末20 mg，置于离心管中，加入50%甲醇水溶液1 mL，超声（功率1 130 W，频率37 kHz）提取30 min，冷却至室温后，离心（14 000 r/min，10 min），取上清，即得。1.3.3.2对照品溶液分别精密称定对照品人参皂苷 Rg1、Rb1、Re、Rd、Ro、丹参素钠、丹酚酸 A、丹酚酸 B、迷迭香酸各 1 mg，分别置于离心管中，加入 1 mL 50%甲醇使其溶解，各移取10 L，再用50%甲醇稀释，将其制成质量浓度为10 mg/L的混标溶液。1.4数据分析通过文献检索，归纳总结分离自人参、麦冬、五味子、黄芪、丹参、川芎、山楂等7个益心舒胶囊组成药味的化学成分信息，建立化合物库。数据库中包括各化合物名称、结构、分子式、分子量等信息，数据库采用Progenesis SDF（Waters，USA）进行管理。采用Waters MassLynx V4.1分析供试品溶液中化合物的保留时间、一级质谱、二级质谱等信息，一级质谱中限定质量偏差（5 mDa），根据一级质谱推导化合物分子式，分子式输入Progenesis SDF检索自建数据库，并与对照品、文献报道数据进行比对，对化合物进行结构鉴定。2结果在上述实验条件下采集益心舒胶囊的 UPLC-QTOF基峰离子流图，见图1。按照“1.3”项下方法，共解析出86个化合物，见表1。其中9种化合物经过与对照品比对保留时间及一级、二级质谱图进行鉴定，其余化合物结合数据库及参考文献进行鉴定。表1益心舒胶成分鉴定结果1*23456789*10*3.154.264.384.55.115.846.116.726.987.01197.044 5337.091 4353.087 2353.086 4337.092 2491.118 5521.129 8717.144 2359.076 0493.113 10.50.90.110.10.60.21.40.70.4M-HM-HM-HM-HM-HM+FA-HM-HM-HM-HM-HC9H10O5C16H18O8C16H18O9C16H18O9C16H18O8C22H22O10C24H26O13C36H30O16C18H16O8C26H22O10150.03，135.04，123.04191.05，135.04，119.05191.05，161.02，135.04，127.04191.05，179.03，135.04191.05，163.04