·技术与方法·生物技术通报BIOTECHNOLOGYBULLETIN2023,39(6):133-140收稿日期：2022-09-26基金项目：国家“十三五”重点研发计划（2016YFD0101803），黑龙江省自然科学基金联合引导项目（LH2019C056）作者简介：朱少喜，硕士研究生，研究方向：玉米分子鉴定；E-mail:zhushaoxi0501@163.com；金肇阳为本文共同第一作者通讯作者：路运才，男，博士，教授，研究方向：玉米种质资源创新与利用；E-mail:luyuncai@hlju.edu.cn；王凤格，女，博士，研究员，研究方向：玉米分子鉴定；E-mail:gege0106@163.com基于KASP平台的转基因玉米高通量特异性检测方法朱少喜1，2金肇阳1，2葛建镕2王蕊2王凤格2路运才1（1.黑龙江大学现代农业与生态环境学院，哈尔滨150080；2.北京市农林科学院玉米研究所玉米DNA指纹及分子育种北京市重点实验室，北京100097）摘要：为了促进转基因玉米产业化发展，加快优良性状转化体与骨干自交系的转育工作，适用于回交群体的高通量前景选择方法亟待开发。本研究以转基因玉米DBN9936为材料，根据其外源插入片段及其侧翼序列，采用primer5软件设计了6对特异性引物，与内标准基因zSSIIb引物进行组合用于评估，获得最优引物组合后，进一步开展特异性验证、检出限测试和多样品验证。结果显示，最优引物组合为DBN9936-LB1*zSSIIb-k1；10份DBN9936BC1代种子的KASP基因分型结果与琼脂糖凝胶电泳结果完全一致；10份转化体DBN9858、DBN9501、C0010.1.3、C0010.3.1、C0010.3.7、C0030.2.5、BT11、GA21、MIR162和2A-7的转基因玉米样品在双平台上检测结果均表现为阴性；转基因玉米DBN9936的检出限为10%；48份不同DBN9936杂交种材料的KASP基因分型结果均表现为阳性。综上，本研究方法可用于转基因玉米DBN9936回交转育过程中的前景选择，且样品通量高，为其他农作物在转基因育种过程中的目标基因检测提供了技术参考。关键词：转基因玉米；回交转育；前景选择；KASP平台；高通量DOI:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2022-1191High-throughputSpecificDetectionMethodsforTransgenicMaizeBasedontheKASPPlatformZHUShao-xi1,2JINZhao-yang1,2GEJian-rong2WANGRui2WANGFeng-ge2LUYun-cai1（1.CollegeofAdvancedAgricultureandEcologicalEnvironmentofHeilongjiangUniversity,Harbin150080;2.MaizeResearchCenter,BeijingAcademyofAgricultureandForestrySciences,BeijingKeyLaboratoryofMaizeDNAFingerprintingandMolecularBreeding,Beijing100097）...
