固相萃取-高效液相色谱法测...可食性组织和蛋中氨丙啉残留_刘畅.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2023,Vol.39,No.6 298 固相萃取-高效液相色谱法测定禽类可食性组织和 蛋中氨丙啉残留 刘畅1,2，王蓓3，李康1，徐坤1，邱梅1，程雪晴1，郝智慧2*，曲丽华1*（1.青岛农业大学化学与药学院，山东青岛 266109）（2.中国农业大学动物医学院，中兽医药创新中心，北京 100193）（3.青岛食品检验所，山东青岛 266071）摘要：该文建立了固相萃取-高效液相色谱法检测鸡、鸭、鹅的可食性组织（肌肉、肝脏、肾脏、脂肪）和蛋中氨丙啉残留的分析方法。样品中的氨丙啉经三氯乙酸-乙腈溶液提取，固相萃取柱净化。色谱柱为亲水性 C18色谱柱，使用甲醇-乙腈-6 mmol/L 1-庚烷磺酸钠溶液为流动相进行等度洗脱，检测波长为 268 nm。氨丙啉在0.110 g/mL 呈良好的线性关系，r2为0.999。该方法对鸡、鸭、鹅的肌肉中氨丙啉的检出限为 150 g/kg，定量限为 250 g/kg；鸡、鸭、鹅的肝脏、肾脏、脂肪、蛋中氨丙啉的检出限为250 g/kg，定量限为 500 g/kg。这些空白组织中添加水平分别为定量限 0.5 倍、1 倍、2 倍最大残留限量时，各组织中氨丙啉的平均回收率在74.65%96.24%之间，其日内和日间相对标准偏差分别小于15%。该方法准确度和精密度高，适用于禽类可食性组织和蛋中氨丙啉残留的检测，为日常工作中食品质量控制提供了一种可行的方法。关键词：氨丙啉；固相萃取-高效液相色谱法；残留分析；食品质量控制 文章编号：1673-9078(2023)06-298-305 DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2023.6.0759 Determination of Amprolium Residues in Edible Tissues and Eggs of Poultry by Solid Phase Extraction-high Performance Liquid Chromatography LIU Chang1,2,WANG Bei3,LI Kang1,XU Kun1,QIU Mei1,CHENG Xueqing1,HAO Zhihui2*,QU Lihua1*(1.College of Chemistry and Pharmaceutical Sciences,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China)(2.Innovation Center for Traditional Chinese Veterinary Medicine,College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China)(3.Qingdao Institute for Food Control,Qingdao 266071,China)Abstract:An analytical method based on solid phase extraction-high performance liquid chromatography was established for the determination of amprolium residues in the edible tissues(muscle,liver,kidney,and fat)and eggs of chicken,ducks,and geese.First,amprolium in the sample was extracted by trichloroacetic acid-acetonitrile solution and purified by the solid-phase extraction column.A hydrophilic C18 chromatographic column was used;methanol,acetonitrile,and 6 mmol/L sodium 1-heptanesulfonate solution were used as the mobile phase for isocratic elution,with a detection wavelength of 268 nm.Amprolium exhibited an optimum linear relationship in the range of 0.110 g/mL(r2=0.999).The limit of detection and limit of quantification were 150 g/kg and 250 g/kg,respectively,for amprolium in chicken,ducks,and geese muscle,whereas the limit of detection and limit of quantification of amprolium in the liver,kidney,fat,and eggs of chicken,ducks,and 引文格式：刘畅,王蓓,李康,等.固相萃取-高效液相色谱法测定禽类可食性组织和蛋中氨丙啉残留J.现代食品科技,2023,39(6):298-305.LIU Chang,WANG Bei,LI Kang,et al.Determination of amprolium residues in edible tissues and eggs of poultry by solid phase extraction-high performance liquid chromatography J.Modern Food Science and Technology,2023,39(6):298-305.收稿日期：2022-06-15 基金项目：农业行业标准制定和修订项目（662/2319043）；山东省重点研发计划项目（2019GSF107073）；山东省双百计划项目（WST2017010）作者简介：刘畅（1997-），女，硕士，研究方向：兽药残留分析，E-mail： 通讯作者：郝智慧（1980-），女，博士，教授，研究方向：兽药药理学与毒理学、新兽药创制和兽医公共卫生，E-mail：；共同通讯作者：曲丽华（1987-），女，博士，讲师，研究方向：药物残留分析，E-mail： 现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2023,Vol.39,No.6 299 geese were 250 g/kg and 500 g/kg,respectively.When the addition levels in the blank tissues had a limit of quantification 0.5,1,and 2 times the maximum residue limit,the average recoveries of amprolium ranged from 74.65%96.24%and the intra-day and inter-day relative standard deviations were less than 15%.This method has high accuracy and precision,and is suitable for determining amprolium residues in the edible tissues and eggs of poultry,providing a feasible method for ensuring food quality control in routine applications.Key words:amprolium;solid phase extraction-high performance liquid chromatography;residue analysis;food quality control 在现代家禽养殖场中，家禽饲养条件拥挤且饲养不规律1。在这种饲养环境中极易产生的球虫卵囊，会导致家禽腹泻，甚至死亡2。因此，球虫病是家禽养殖过程中的重要问题之一。氨丙啉别名为氨丙基嘧吡啶，20 世纪 50 年代被发现并被广泛用于球虫病的治疗和预防1。与天然辅酶相比，氨丙啉对焦磷酸硫胺素相关酶有很大的亲和力，在高效和安全的抗球虫病的同时，不易引起球虫的耐药性3。但氨丙啉长期大量施用会导致家禽体内的疾病，如雏鸡多发性神经炎，同时造成组织内的高浓度残留，随食物链进入人体内，对人体健康会造成潜在威胁4,5。随着这一食品安全问题的凸显，中国、美国、日本等国家相继规定了动物可食性组织中氨丙啉的最大残留限量。我国农业农村部 GB 31650-2019 文件明确了不同鸡组织中氨丙啉的最大残留限量（Maximum Residue Limit，MRL），在肌肉中为500 g/kg，肝、肾中为1 000 g/kg，鸡蛋中为 4 000 g/kg6。在美国，鸡组织的 MRL 与我国 GB 31650-2019 规定相一致。日本对鸡组织的MRL 限制是最严格的，肌肉、肝脏和肾脏为 30 g/kg，鸡蛋为 5 000 g/kg。这些报道引起了公众广泛关注如何建立高效、可行的检测方法。近年来，世界各国报道了许多检测氨丙啉残留的方法1,4,5,7-22，主要包括液相色谱-质谱联用（Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，LC-MS/MS）1,5,7-17和 高 效 液 相 色 谱 法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）4,17-22，检测的禽源食品主要包括鸡肉、鸡肝脏、鸡蛋8-15,19-22。在家禽食品中，不只有鸡组织及其蛋被广泛作为可食性产品，较为常见的还有鸭、鹅可食性组织及其蛋。目前我国已有动物性食品中氨丙啉残留检测的相关行业标准 3 个（SN/T 3144-201114、SN/T 4583-201615、SN/T 4812-201716）和 国 家 标 准 1个（GB 31613.1-202117），但缺少检测这些禽类动物组织及其蛋的 HPLC 方法。使用 HPLC 检测方法对家禽组织中氨丙啉进行检测，可为监管部门食品安全监测提供一种简便易行的方法。样品前处理是残留检测中的关键组成部分，是衡量残留检测方法先进性和实用性的关键指标。目前已经开发了几种净化过程以减少动物食品提取物的干扰，如固相萃取法11-15,19-21，液-液萃取法10。与液-液萃取法相比，固相萃取法（Solid Phase Extraction，SPE）减少了有机溶剂和杂质的干扰，对色谱分析的适应性也更强。因此，固相萃取法对样品净化具有重要的作用。根据氨丙啉作为抗球虫病的研究现状，本研究建立了一种高效、稳定的 SPE-HPLC 法检测禽类可食性组织和蛋中氨丙啉残留的方法，以控制氨丙啉的残留，确保禽类可食性组织的食品安全。方法按照 GB 31650-2019 要求进行验证。1 材料与方法 1.1 材料与试剂 甲醇和乙腈（色谱纯），美国 Tedia 公司；1-庚烷磺酸钠（纯度 98%），麦克林公司；三氯乙酸（Trichloroacetic Acid，TCA）、冰醋酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和三乙胺（分析纯），中国医药集团有限公司；OasisPRiME HLB 固相萃取柱（200 mg/6 cc），美国 Waters 公司；ACES C18 AQ Plus 色谱柱 （250 mm4.6 mm，5 m），美国 Aces 公司；0