·研究报告·生物技术通报BIOTECHNOLOGYBULLETIN2023,39(6):316-324收稿日期：2022-10-11基金项目：河北省科学院高层次人才培养与资助项目（2021G27,2022G16）作者简介：董聪，女，硕士，助理研究员，研究方向：酶制剂；E-mail:dongcong24@126.com；董聪同时为本文通讯作者FAD依赖的葡萄糖脱氢酶（FAD-GDH）（EC1.1.99.10）是一类以FAD为辅基催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸内酯的氧化还原酶，广泛应用于血糖检测、生物燃料电池［1］、植入式心脏起搏器［2］和基于联合策略提高FAD依赖的葡萄糖脱氢酶的酵母表达董聪高庆华王玥罗同阳王庆庆（河北省微生物研究所有限公司，保定071051）摘要：为了提高了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的表达量，本研究通过G418浓度梯度筛选，构建含有不同分子伴侣基因拷贝数共表达毕赤酵母重组菌株实现高效表达，优化摇瓶发酵条件。经G418浓度梯度筛选，得到1株高产重组菌，在此基础上分别构建了HAC1、Ero1、PDI三种分子伴侣1-4拷贝共表达重组菌株，RT-qPCR检测结果符合预期。试管水平酶活表明3拷贝PDI、3拷贝HAC1和2拷贝Ero1分别比1拷贝提高83%、77%和51%。总体比较而言，共表达3拷贝PDI的重组菌株酶活最高，比对照提高198%，优化摇瓶发酵条件表明培养基初始pH7.0，摇瓶装液量50mL，甲醇添加量1%，诱导温度28℃时，效果最佳。通过抗生素浓度筛选、增加分子伴侣的基因拷贝数策略可以提高FAD-GDH在毕赤酵母中的发酵产量。关键词：FAD依赖的葡萄糖脱氢酶；毕赤酵母；抗生素梯度筛选；分子伴侣多拷贝；发酵条件DOI:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2022-1255IncreasingtheExpressionofFAD-dependentGlucoseDehydrogenasebyRecombinantPichiapastorisUsingaCombinedStrategyDONGCongGAOQing-huaWANGYueLUOTong-yangWANGQing-qing（HebeiResearchInstituteofMicrobiologyCo.,Ltd.,Baoding071051）Abstract:InordertoincreasetheexpressionofFAD-dependentglucosedehydrogenase（FAD-GDH）inPichiapastoris,therecombinantstrainsofco-expressingdifferentcopynumbersofmolecularchaperonegeneswereconstructedtoachievehigh-efficiencyexpressionthroughtheG418concentrationgradientscreening,andtheshakeflaskfermentationconditionswereoptimized.Onehigh-yieldingrecombinantstrainwasobtainedbyG418concentrationgradientscreening.Onthisbasis,therecombinantstrainsco-expressing1-4copiesofthreemolecularchape...
