基于HACCP体系的核酸检测实验室质量控制初步探讨_王义平.pdf

疾病预防控制通报2023年6月第38卷第3期 Bull Dis Control Prev Jun.,2023,Vol.38,No.3基于HACCP体系的核酸检测实验室质量控制初步探讨王义平1，张红妮2，何军霞1，王娟11.甘肃省平凉市疾病预防控制中心，甘肃 平凉 744000；2.甘肃省平凉市食品检验检测中心，甘肃 平凉 744000摘要：目的 为了提高核酸检测实验室质量，引用危害分析与关键控制点（HACCP）体系对核酸检测实验室质量进行系统控制，为核酸检测实验室质量控制措施提供参考方法。方法 本文依照HACCP体系对核酸检测实验室质量控制进行初步探讨，分析了HACCP体系在收样、试剂准备、核酸提取、结果判读、结果报告工作环节所采取的监控程序、纠偏和验证措施等关键控制点（CCP）。结论 HACCP体系在核酸检测实验室的引入，可以完善核酸检测实验室的质量控制，促进核酸检测实验室关键控制点的掌控，提升实验室质量及生物安全水平，使得核酸检测实验室的质量控制更加科学有效，提高核酸检测实验室工作的的检验质量。关键词：核酸检测实验室；危害分析与关键控制点；HACCP；质量控制中图分类号：TS201.6；R563.1 文献标识码：A 文章编号：10003711（2023）03009203危害分析与关键控制点（HACCP）于20世纪60年代由皮尔斯伯（Pillsbury）公司联合美国国家航空航天局（NASA）和美国一家军方实验室（在 Natick 地区）共同制定，最早运用于航天食品的预防性食品安全管理体系，以保证实施美国太空计划时所使用的食品100%不含微生物病原菌，美国是应用最早的国家，加拿大、日本、俄罗斯等国均在推广和采纳HACCP体系，是国际共同认可和接受的食品安全质量管理体系1。HACCP体系自1988年引入我国，发展迅速，在实践中取得了明显效果。目前已经在食品加工、餐饮服务、畜牧养殖、教学质量管理、虫害防治、实验室安全管理、人才培养考核等领域得到广泛应用，已成为国际各行业质量管理的发展趋向与必然要求2-9。分子生物学实验室的质量控制是为了确保检测结果的准确性和可靠性，严禁交叉污染事件的发生。HACCP体系还未在核酸检测实验室有引用和报道，本文提出了HACCP体系在核酸检测实验室的可行性，并以新型冠状病毒肺炎（COVID-19）核酸检测为例分析了HACCP体系在核酸检测实验室关键控制点（CCP）进行质量控制的措施，为强化核酸检测过程的质量控制提供参考。1 HACCP在核酸检测实验室质量控制中的可行性HACCP 体系包括危害分析、确定关键控制点（CCP）、确定关键控制点限值、建立CCP的监控程序、确定纠偏措施、建立验证程序、建立并保持记录和文件化程序7个方面。核酸检测实验室内部质量控制指实验室内部工作人员对影响检验结果质量的每一个环节进行系统控制，监测和控制实验室工作的精密度，提高核酸检测批内、批间结果的一致性，以确定检测结果可靠有效。其包括分析前质量控制（人员资质、仪器设备管理、试剂耗材、样品采集运输与接收保存、实验室环境设备）、分析中质量控制（核酸提取、核酸扩增、产物检测）、统计学质量控制（假阴性、假阳性的质量控制）。对HACCP体系的基本原理与核酸检测实验室质量控制联合分析，HACCP体系的基本原理可有效应对控制核酸检测实验室质量，主要表现在3个方面。1.1 目标导向的一致性 核酸检测实验室质量控制是指为将分析测试结果的误差控制在允许限度内所采取的控制措施，目的是确保实验室质量稳定可控并实现检测数据的验证与溯源，而HACCP体系的宗旨也是为了实现系统风险的识别监测及预防，以确保系统运行的稳定性，核酸检测实验室质量控制体系与HACCP体系的目标导向一致。1.2 技术指导的科学性 根据 关于做好新冠疫情常态化防控工作的指导意见 医疗机构新冠核酸检测工作手册（试行第二版）中质量控制工作的要求，在性能验证、室内质控和室间质控中采用特定试验方式实现实验室的质量控制；而HACCP的7个原理12个工作步骤是通过层层梳理，实现风险的监测与预防，对核酸检测质量控制工作系统规划、科学布局。1.3 检测预防的指导性 HACCP通过分析工作的全 综述 作者简介：王义平（1979-），男，副主任技师，学士，从事卫生检验工作，E-mail：DOI:10.13215/ki.jbyfkztb.2302020 92疾病预防控制通报2023年6月第38卷第3期 Bull Dis Control Prev Jun.,2023,Vol.38,No.3过程的危害，确定了CCP并建立监控程序，实现全过程风险的预防控制，尤其建立关键控制点的监控程序，能有效地提升对实验室工作人员质量控制工作的指导，提升质量控制工作的质量和效能。2 HACCP用于核酸检测实验室质量控制初步探讨按 GB/T 19538-2004危 害 分 析 与 关 键 控 制点（HACCP）体系及其应用指南 要求，结合核酸检测实验室质量控制工作的实际，设立HACCP体系在核酸检测实验室质量控制的工作思路，见图1。2.1 建立HACCP计划的准备步骤 2.1.1 成立HACCP工作小组 HACCP小组成员应熟悉HACCP体系的基本原理、核酸检测的相关法律法规、工作流程及质量控制等相应的工作，HACCP小组的任务是：收集资料；制定HACCP计划，体系修改与验证；对HACCP计划的实施过程进行监督；保证HACCP计划在每个环节顺利执行。2.1.2 描述产品 核酸检测实验室检验的过程包括样本收样、试剂准备、核酸提取、核酸扩增及结果分析。核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵病毒的核酸，通过实验室试剂提取检测来确定个体是否被病毒感染。2.1.3 确定产品预期用途 提供核酸检测数据。2.1.4 工作流程 核酸检测全过程设4个区域，各区域物理空间相互独立，始终处于完全分隔状态，不可有空气的直接流通。人员严格按照单一方向流动，准备区核酸提取区扩增区 产物分析区；不同工作区域内的设备、物品不得混用；不同的工作区域使用不同的工作服，如不同的颜色或人员标记。2.1.5 验证流程 对于工艺流程的每一个工作步骤，须对照国家标准、规范和实验室工作流程进行验证，确保流程的精确性。2.2 HACCP计划的制订与实施 2.2.1 潜在危害点 在核酸检测中，对检测结果准确性产生危害的潜在危害点：收样过程（漏液、消杀及人员培训防护）、试剂准备（个人防护、阳性对照和阴性对照试剂）、核酸提取（样本转运桶开启、核酸加样过程、废弃物处理）、核酸扩增（反应管的密封性、扩增结束后严禁开盖）、仪器设备的日常消杀维护、结果报告、异常处置、信息系统管理过程中的生物性、物理学性和化学性危害等。2.2.2 确定关键控制点和关键限值 建立监控程序梳理核酸检测过程中潜在的危害点，重点对潜在危害点管控的必要性、危害点的可接受水平、预防监控措施的可操作性等确定关键控制点CCP。结合核酸检测实验室工作实际，按GB/T 27341-2009 危害分析与关键控制点（HACCP）体系 确定关键控制点的限值，并建立关键控制点监控程序。2.2.2.1 收样 关键控制点：样品完整性、收样人员防护、样本信息完整。关键限值：每批次样品无漏液、信息完整，收样人员按照生物安全要求做好防护。监控程序：由收样室负责人对收样人员接收的每批次样品信息详细复核、人员间交叉互验进行监督。纠偏措施：如果样品漏液应做好收样环境及同批次送检样的消杀，并重新采样；对样品信息不完整漏项错误信息样品拒收重采；未落实人员防护措施的进行培训考核后重新上岗。验证措施：样品接收记录；实验室防护用具领取使用记录；实验室不合格样品拒收记录。2.2.2.2 试剂准备 关键控制点：试剂耗材性能验证、阳性对照与阴性对照品。关键限值：试剂耗材性能符合实验室使用要求，试剂盒开封后立即置于核酸提取间。监控程序：由实验室负责人对每批次试剂耗材、阳性对照品进行核查。纠偏措施：实际达不到要求，使用功能差的耗材退回，对已开封的对照品灭活处理后对环境开展消杀。图1HACCP体系在核酸检测实验室质量控制工作思路 93疾病预防控制通报2023年6月第38卷第3期 Bull Dis Control Prev Jun.,2023,Vol.38,No.3验证措施：实验室人员培训考核记录；实验室试剂耗材验收记录；实验室试剂稳定性验收记录；实验室供应商评价记录；对每批次阳性对照和阴性对照品位置进行复核查验记录。2.2.2.3 核酸提取 关键控制点：转运桶及密封袋、生物安全、废弃物处置。关键限值：人员防护按照三级实验室防护水平；使用后的耗材废弃物生物安全消杀措施落实到位；不发生实验室生物污染性事故。监控程序：由实验室负责人对每批次实验后的试剂耗材废弃物、转运桶和密封袋进行查验，确保生物安全措施落实到位。纠偏措施：手消毒后将垃圾袋带出生物安全柜，放入废弃物转运袋内。生物安全柜内试管架、台面等使用75%酒精擦拭。随后关闭生物安全柜，紫外照射60120 min。对不当的实验操作过程标本封存后综合评估再处置；对实验过程操作不规范人员停岗重新培训考核；对实验室核酸提取及扩增的过程每月进行一次实验室内部监督；对实验室操作人员每月开展生物安全培训。验证措施：实验室生物安全柜及检测的仪器设备的检定校准，每年一次；实验室生物安全柜的使用记录；实验室每季度对检测人员操作过程进行监督记录；对实验室使用的设备及对照标准品定期开展期间核查；实验室消杀及废弃物处置记录。2.2.2.4 核酸检测 关键控制点：结果判读、结果报告、异常曲线处置。关键限值：实验室数据准确率和报告差错率达到实验室 质量手册 要求。监控程序：每批次实验过程人开展实验操作并对结果双报告；由实验室技术负责人对异常检测结果及异常曲线开展监督复核；每批次抽取5%10%检测报告开展过程记录复核。纠偏措施：对报告结果异常检测样品重新开展实验室检测或重新采集再次检测。验证措施：实验室质量控制的阳性对照品每批次带样对照检测结果，定期开展实验室检测人员技术能力考核。2.2.2.5 实验室信息系统 关键控制点：LIMS系统信息。关键限值：实验室信息网络系统安全，无数据泄露。监控程序：实验室质量负责人对实验室数据安全程序落实情况定期核查。年度实验室内审中抽取一定数量的检验报告对数据完整性和机密性进行监督。纠偏措施：对信息管理系统异常情况及时开展维护；对信息安全管理员定期开展培训考核监督。验证措施：实验室数据系统维护管理记录。2.3 文件记录 HACCP记录程序包括样本接收记录、关键控制点CCP监控及纠偏记录、检验记录、温湿度监控记录、人员培训记录及质量控制记录等，所有的记录必须统一归档并有相关负责人审核签字并留存2年以上，以便随时查询和追溯。HACCP 体系与核酸检测实验室质量管理的目标导向一致，对质量提升方面具有技术指导的科学性、检测预防的指导性优势，将核酸检测的整个过程点从传统的对最终结果效能检验转移到对整个过程体系的质量进行管制，强调了全过程控制，将危害扼杀于萌芽状态，最大程度降低风险，保证了核酸检测质量与生物安全。HACCP在核酸检测实验室的引入，可以健全和完善核酸检测实验室的质量控制，促进核酸检测实验室关键控制点的掌控，提升实验室质量及生物安全水平，使得核酸检测实验室的质量控制更加科学有效，提高核酸检测实验室工作的的检验质量。参考文献1姜南,张欣,贺国铭,等.危害分析和关键控制点(HACCP)及在食品生产加工中的应用M.北京:化学工业出版社,2003.106-108.2陈德经,李新生.HACCP在干香菇生产中的应用J.食品科学,2004,25(4):206-209.3李兴伟,马申嫣,白宏伟.HACCP体系在食用油灌装生产中的应用J.粮食与食品工业,2020,27(4):18-20,23.4于爱华.HACCP 体系在餐饮企业食品安全管理中的应用研究J.现代食品,2021,21(35):135-138.5张宏飞,朱建纲,周亚丽.畜产品生产过程中HACCP体系的构建J.中国畜牧业,2021(10):45-