HBV相关性肝病患者循环血...1表达水平检测及相关性分析_刘娇.pdf

四川医学 年 月第 卷（第 期），通信作者：论著 相关性肝病患者循环血、表达水平检测及相关性分析刘 娇，王川林，赵 川，谢 巍，李 毅（遂宁市中心医院，四川 遂宁；川北医学院附属医院，四川 南充）【摘要】目的 分析乙型肝炎病毒（）相关性肝病患者循环血可溶性程序性死亡因子（）、水平表达差异及意义。方法采用酶联免疫法检测，、，运用实时荧光定量 法检测 载量，采用化学发光法检测乙肝病毒感染标志物，及运用全自动生化分析仪测定肝功能指标。结果 健康对照组外周血、表达水平最低，与 携带者组比较差异无统计学意义（）；其他各组与对照组及 携带者组比较差异均有统计学意义（）。随着病情进展，外周血、表达水平明显升高，在重型乙型肝炎组最高，与其他各组比较差异有统计学意义（）；相关性肝病循环血中总体 表达水平与 载量、表达水平均呈正相关（）；相关性肝病循环血中总体、表达水平与 载量、表达水平亦呈正相关（）；相关性肝病各组循环血中 表达水平与、表达水平均呈正相关。同时各组循环血中 表达水平与 表达水平亦呈正相关。结论、表达水平可能成为潜在反应肝组织损伤、病毒复制水平、病情变化、治疗新靶点的指标和方向。【关键词】肝炎病毒；乙肝相关性肝病；可溶性程序性死亡因子；趋化因子；【中图分类号】【文献标志码】【文章编号】（），；，【】（），（），（）（），（），（），（），【】；四川医学 年 月第 卷（第 期），乙型肝炎病毒（，）属嗜肝 病毒科（），全球约有 亿慢性 感染者，其中报告显示每年死于 相关性肝病约有 万人。乙型肝炎发病机制是一个复杂的多因素的交互事件，主要由病毒因素、环境因素和宿主免疫因素组成。其中，宿主免疫应答在 易感性、疾病发展形势发挥重要作用。全基因组关联研究发现在宿主基因的单核苷酸多态性（）与亚洲 感染相关，包括细胞因子、人类白细胞抗原 主要组织相容性复合体、趋化因子等。程序性死亡分子（，）及 其 配 体（，）是新发现的 家族成员之一的具有负性协同共刺激信号的调节分子。膜型 与 结合可传递负性调节信号，致使细胞生长周期停留在 期，同时也导致机体内 淋巴细胞各亚群的凋亡以及其功能减弱、消失。而可溶性程序性死亡因子（）可以封闭细胞膜性 与 形成的信号通路，维持 之间的平衡及机体免疫耐受状态。可溶性协同信号分子 不仅可以调节膜型 信号传递参与机体生理和病理状态下的免疫调节网络，也可如细胞因子一样参与血液循环，影响临近细胞及远端细胞表面的受体结合，与膜型 相比，其发挥的生物学功能更为广泛、深层。越来越多的研究发现，与多种自身免疫性疾病、炎症性疾病、肿瘤等疾病发展及预后相关。趋化因子是由免疫细胞产生的细胞因子，其具有趋化白细胞功能。研究显示趋化因子可促进细胞脱颗粒和增加生物活性物质的释放，可通过诱导、维持和放大炎症 免疫反应等在慢性肝病、自身免疫性疾病、肿瘤逃逸等多种病理生理过程发挥关键作用。、与 感染慢性化和病情进展密切相关，且目前关于它们在慢性 感染过程中浓度和动力学研究较少。本研究通过测定 相关性肝病患者外周血中、表达水平来分析其与 淋巴细胞亚群、等指标的相关性，探讨、与疾病进展、预后的相关性，为揭示免疫应答在慢性乙肝发病进程的生物学机制、疾病免疫防控措施、药物治疗新靶点提供依据。资料与方法 一般资料：收集 年至 年在川北医学院附属医院感染科门诊和遂宁市中心医院感染科门诊就诊的 例 相关性肝病患者作为观察组。选择同期 例健康体检者为对照组。观察组：例 携带者，其中男 例，女 例，平均年龄（）岁；例慢性乙肝患者，其中男 例，女 例，平均年龄（）岁）；例乙肝肝硬化患者，其中男 例，女 例，平均年龄（）岁；例重型乙型肝炎患者，其中男 例，女 例，平均年龄（）岁，例乙肝肝癌患者，其中男 例，女 例，平均年龄（）岁。对照组：男 例，女 例，平均年龄（）岁。两组年龄、性别比较差异无统计学意义（）。纳入标准：患者知情同意；观察组诊断符合 年中华医学会肝病学分会“慢性乙型肝炎防治指南”诊断标准。排除标准：哺乳、妊娠期妇女；、重叠感染；自身免疫、酒精、药物、肥胖等因素导致的肝损害患者；原因不明的慢型肝炎者。仪器与试剂：型 全 自 动 生 化 分析 仪 购 自 美 国 公司，实时荧光定量 仪购自美国 公司，流式细胞仪购自美国 公司。感染标志物试剂盒购自美国雅培公司，试剂盒购自美国 公司，检测试剂盒购于武汉新启迪生物科技有限公司；肝功能检测试剂盒购自上海蓝怡科技有限公司。检测方法：采用实时荧光定量 法检测各时段的 载量；运用全自动生化分析仪检测肝肾功能指标，、采用 测定。统计学方法：采用 统计软件进行统计分析。计量资料采用（）表示，分类资料采用率表示；计量资料比较采用 检验或方差分析，分类资料比较采用卡方检验；相关性分析采用 法；非参数资料比较采用秩和检验，以 为差异有统计学意义。四川医学 年 月第 卷（第 期），结 果 相关性肝病中各组循环血中、表达水平比较：健康对照组外周血、表达水平最低，与 携带者组比较差异无统计学意义（）。其他各组与对照组及 携带者组比较差异均有统计学意义（）。随着病情进展，外周、表达水平明显升高，在重型乙型肝炎组最高，与其他各组比较差异有统计学意义（）。见表。表 相关性肝病各组循环血中、表达水平比较（）组别健康对照组 携带组 慢性乙肝组 乙肝肝硬化组 重型乙型肝炎组 肝细胞肝癌组 注：采用方差分析，法。与健康组比较，；与携带者组比较，；与重型乙型肝炎组相比，相关性肝病循环血中总体、表达水平与、表达水平相关性分析：表达水平与 载量、表达水平均呈正相关（）；相关性肝病循环血中总体、表达水平与 载量、表达水平亦呈正相关（）。见表。表 相关性肝病循环血中总体、表达水平与、表达水平相关性分析指标 相关性肝病中各组循环血中、表达水平与、表达水平相关性分析：表达水平与、表达水平均呈正相关。同时各组循环血中 表达水平与 表达水平亦呈正相关。见表。表 各组循环血中 与、表达水平的相关性分析健康对照组 携带组 慢性乙肝组 乙肝肝硬化组 重型乙型肝炎组 肝细胞肝癌组 四川医学 年 月第 卷（第 期），讨 论目前有关乙型肝炎的发病机制十分复杂且尚未形成共识。多数研究结果显示，感染后慢性化的主要原因之一是因为 淋巴细胞数量下降及其功能衰竭。淋巴细胞各亚群的激活需要在双信号参与下才能发生，一是 细胞受体（）专性识别 表面的肽复合物信号刺激；二是 细胞表面的膜蛋白分子及其配体介导的共刺激信号作用。当第二信号缺失时则将会致使 淋巴细胞无反应甚至凋亡，其中、等作为正性共刺激分子途径传递活化信号，刺激 细胞增殖和分化。是具有负性协同共刺激信号的调节分子，抑制 淋巴细胞激活，削弱 淋巴细胞生物功能，但 通过与膜型 相结合抑制阻断了 途径的传递，促进 淋巴细胞活化，恢复其生物功能。研究发现在 相关肝病患者的外周血清中 表达水平显著高于健康体检者，并随着病情的加重 表达量也随之增加。、属于趋化因子 亚家族非 组的一员。研究发现 趋化因子不仅能诱导激活炎性因子、免疫因子、补体成分，还可以交叉式激活炎症信号通路，抑制 细胞活化、介导细胞融解、抑制血管生成等。同时 趋化因子对血管生成、肝脏炎症发生、新生物增生、纤维化形成、免疫反应有重要影响，在肝硬化发生中也起到一定作用。本研究结果显示，健康对照组外周血、表达水平最低，与 携带者组比较差异无统计学意义。其他各组与对照组及 携带者组比较差异均有统计学意义。随着病情进展，外周、表达水平明显升高，在重型乙型肝炎组最高，与其他各组比较差异有统计学意义。这与多数学者研究结果相似，。这说明机体的炎症反应随着病情严重程度增加而加重，外周血、表达水平也随之升高。同时也提示、参与了肝组织炎症的发生、发展过程，针对疾病进展方向有预示作用。在笔者既往研究发现，随着抗病毒治疗，患者 表达水平会逐渐降低，这与 等研究结果相似。这提示、水平高表达可能是慢性 感染患者免疫活化的标志，、水平变化可以作为慢性 感染患者免疫耐受被突破及区分疾病所处阶段（等）的独立生物标志物。本研究资料结果提示，相关性肝病循环血中总体 表达水平与 载量、表达水平均呈正相关；相关性肝病循环血中总体、表达水平与 载量、表达水平亦呈正相关。这与学者们研究结果相似，提示、可通过介导多种信号通路，从而诱导、促进 病毒复制增加，致使肝细胞持续性损伤。笔者认为，、与肝脏炎症指数、呈正相关，一方面这可能与 相关性肝病患者外周血清中 表达水平显著上调，且随着病情加重表达水平增加。与调节患者体内 、介导的病毒持续感染后的免疫状态，促进 淋巴细胞活化增殖，机体免疫功能的免疫活化，打破机体细胞免疫耐受，从而维持机体持续性抗病毒免疫应答相关。另一方面这可能与、能促进单核细胞或者巨噬细胞的激活，诱导炎性细胞向肝脏迁移、聚集，同时促进下游细胞炎症因子的激活，不同信号通路被交叉式激活，从而发挥抗病毒免疫反应。研究发现趋化因子及下游的细胞炎症因子例如、等，通过不同的应答模式能够扰乱肝细胞代谢、合成、解毒等功能障碍，影响 相关性肝病患者病毒颗粒对肝细胞本身的损伤和破坏，加剧肝细胞膜损伤，致使病情持续性加重。本研究结果提示，相关性肝病各组循环血中 表达水平与、表达水平均呈正相关。同时各组循环血中 表达水平与 表达水平亦呈正相关。提示负性共刺激因子（）与趋化因子（、）有协同性，在 相关性肝病患者机体内的免疫应答、免疫耐受、免疫逃逸、病毒复制、炎性反应中互相协同促进。综上所述，相关性肝病患者循环血中、表达水平随着病情的加重而表四川医学 年 月第 卷（第 期），达增加，与病情进展、疾病预后密切相关。循环血中、高表达可能是疾病慢性化、恶化的危险因素。因此，干预负性共刺激因子与趋化因子介导的信号通路可能成为治疗 相关性肝病的一种新思路。本研究存在一定的局限性，即各研究组样本量相对较少，部分患者后期随访未能完成，研究层次不够深入。希望在后期的研究中能加大样本量，跟紧随访进程，能够在、与下游的各细胞因子，随访时限各节点的炎性指标、病毒载量进行更深层次的探讨。参考文献：中华医学会感染病学分会肝衰竭与人工肝学组，中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组 肝衰竭诊治指南（年版）实用肝脏病杂志，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：胡蓉，康信通，曾义岚，等干扰素对慢性 感染者 淋巴细胞趋化因子受体及血清趋化因子表达水平的影响中华肝脏病杂志（电子版），（）：，（）：，（），（）：王东生，杜琴，刘彦信，等慢性乙型肝炎患者血清中 和 升高及意义基础医学与临床，（）：李佳，吴珺，杨东亮 参与疾病发病机制的研究进展 中国免疫学杂志，（）：张海涛，覃岭 类趋化因子受体 基因 干扰对人肝癌细胞 和 增殖和侵袭的影响中国肝脏病杂志（电子版），（）：，（）：陈星，戢敏，喻雪琴，等循环血、在 相关性肝病中表达水平的差异及相关性分析川北医学院学报，（）：，（）：祝先进，宋艳芳，曹颖平，等慢性乙型肝炎患者外周血趋化因子 和 的表达及意义临床肝胆病杂志，（）：（收稿时间：）