5%氟醚菌酰胺烟剂的HPLC分析_刘振邦.pdf

农 药AGROCHEMICALS刘振邦,刘杰,唐剑峰.5%氟醚菌酰胺烟剂的HPLC分析J.农药,2023,62(7):492-495.doi:10.16820/j.nyzz.2023.2087收稿日期：2023-03-02，修返日期：2023-03-14作者简介：刘振邦(1987)，男，山东胶州人，主要从事农药制剂加工与应用技术研究。E-mail：。通信作者：唐剑峰(1971)，男，江苏泰兴人，主要从事农药创制与应用研究。E-mail：。5%氟醚菌酰胺烟剂的HPLC分析刘振邦，刘 杰，唐剑峰(山东中农联合生物科技股份有限公司，济南 250000)摘要：目的建立HPLC测定5%氟醚菌酰胺烟剂中有效成分的分析方法。方法使用以ODS-3为填充物的不锈钢柱和可变波长紫外检测器，以甲醇-水(体积比8020)为流动相，在波长230 nm条件下测定试样中氟醚菌酰胺的含量。结果氟醚菌酰胺的决定系数为1，相对标准偏差为0.21%，回收率在99.91%100.45%之间。结论该方法操作简便，分离效果好，精密度和准确度高，适用于制剂中氟醚菌酰胺的定量分析。关键词：氟醚菌酰胺；烟剂；高效液相色谱；分析中图分类号：TQ450.7文献标志码：A文章编号：1006-0413(2023)07-0492-04Determination of fluopimomide 5%FU by HPLCLIU Zhenbang,LIU Jie,TANG Jianfeng(Shandong Sino-agri United Biotechnology Co.,Ltd.,Jinan 250000,China)Abstract:Aims This study aims to establish a HPLC method for determination of active ingredient contents influopimomid 5%FU.Methods The determination of fluopimomide in the samples was conducted by HPLC withstainless steel column filled with ODS-3 and variable wavelength UV detector at 230 nm,and methanol and water(8020,by vol)was used as mobile phase.Results The linear correlation coefficient of fluopimomide was 1,the relativestandard deviation was 0.21%,and the recoveries were between 99.91%and 100.45%.Conclusions The method iseasy to operate,has good separating effect,precision and accuracy,and is suitable for quantitative analysis offluopimomide in formulationKey words:fluopimomide;FU;HPLC;analysis氟醚菌酰胺(fluopimomide)是一种新型杀菌剂，对卵菌纲病原真菌有特效。其作用机理新颖，属于细胞骨架和马达类蛋白抑制剂，主要作用于类血影蛋白(又称为收缩蛋白，是细胞膜和细胞骨架间的特异蛋白)，从而影响细胞的有丝分裂。氟醚菌酰胺具有良好的内吸传导性，能从叶片上表面向下渗透，从叶基向叶尖方向传导，对幼芽处理后能够保护叶片不受病原菌侵染1-3。烟剂又称为烟熏剂、烟雾剂，主要用于林业杀虫、农业中的棚室及仓库等，是防治棚室作物病虫害的一种优势剂型4-5。5%氟醚菌酰胺烟剂由山东省联合农药工业有限公司开发登记，防治对象为黄瓜靶斑病6。氟醚菌酰胺作为一种新型创制杀菌剂，促进了我国农药创制化合物的发展，但对其烟剂制剂分析的文献报道还较少，本文通过试验采用反相高效液相色谱法测定了5%氟醚菌酰胺烟剂的有效成分，方法简便易操作，准确度高，适用于该制剂的分析测定。1实验部分1.1仪器与试剂1.1.1仪器AUY120电子天平；Agilent 1260高效液相色谱仪，带可变波长紫外检测器和自动控温进样器；色谱柱ODS-3(250 mm4.6 mm i.d.，5 m)。1.1.2试剂甲醇(色谱纯)；水(二级水)；氟醚菌酰胺标样(98.8%)、5%氟醚菌酰胺烟剂，山东省联合农药工业有限公司。1.2高效液相色谱操作条件流动相：甲醇-水(体积比8020)；柱温：(252)；流速：0.8 mL/min；检测波长：230 nm；进样量：5 L；氟醚菌酰胺保留时间7.459 min。第62卷第7期2023年7月Vol.62,No.7Jul.2023第7期1.3测定步骤1.3.1标准溶液的配制在容量瓶中配制质量浓度为1000 mg/L的氟醚菌酰胺标样溶液(精确至0.2 mg)，用甲醇溶解并定容，经超声波振荡5 min，恢复至室温，用移液管准确移取上述溶液5 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，此时氟醚菌酰胺标样质量浓度为200 mg/L，用0.45 m孔径滤膜过滤，备用。1.3.2制剂试样溶液的配制准确称取1000 mg 5%氟醚菌酰胺烟剂试样(精确至0.2 mg)，在容量瓶中配制含有效成分质量浓度为1000 mg a.i./L的溶液，用甲醇溶解并定容，经超声波振荡5 min，恢复至室温，用移液管准确移取上述溶液5 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，此时有效成分的质量浓度为200 mg/L，用0.45 m孔径滤膜过滤，备用。1.3.3测定在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻2针氟醚菌酰胺峰面积的相对变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。1.3.4计算将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中氟醚菌酰胺的峰面积分别平均，氟醚菌酰胺的质量分数X(%)，按式(1)计算。X(%)=A2m1PA1m2(1)式中：X为样品中氟醚菌酰胺的质量分数(%)，A1为标样溶液中氟醚菌酰胺的峰面积的平均值，A2为试样溶液中氟醚菌酰胺的峰面积的平均值，m1为氟醚菌酰胺标样的质量(g)，m2为试样的质量(g)，P为标样中氟醚菌酰胺的纯度(%)。有效成分测得量计算公式：M=A4m1PA3100(2)式中：M为样品中实际测得氟醚菌酰胺的质量(mg)，A3为标样溶液中氟醚菌酰胺的峰面积的平均值，A4为试样溶液中氟醚菌酰胺的峰面积的平均值，m1为氟醚菌酰胺标样的质量(mg)，P为标样中氟醚菌酰胺的纯度(%)。M2=m298.6%(3)式中：M2为样品理论添加氟醚菌酰胺的质量(mg)，m2为氟醚菌酰胺原药实际添加称样量(mg)，98.6%为氟醚菌酰胺原药质量分数。回收率W(%)=MM2100(4)式中：M为样品中实际测得氟醚菌酰胺的质量(mg)，M2为样品理论添加氟醚菌酰胺的质量(mg)。2结果与讨论2.1特异性分析使用Agilent 1260的DAD检测器将单检测波长调整为波长扫描范围(190400 nm)进行3D谱图扫描，通过工作站计算得到，氟醚菌酰胺标样峰纯度因子为999.995，样品峰纯度因子为999.995，目标峰纯度阙值为990.000，说明该目标峰未包含其他杂质共洗脱物。从标样与试样的光谱图及色谱图中可知，标样与试样的光谱一致。标样中氟醚菌酰胺的保留时间为7.459 min，见图1，试样中氟醚菌酰胺的保留时间为7.441 min，见图2，试样与标样的保留时间一致。从液相色谱图中可以清晰看出，有效成分处无其他物质干扰，方法特异性符合要求。2.2线性关系配制质量浓度为1000 mg/L的氟醚菌酰胺标准品溶液，用甲醇相溶解，定容，摇匀。将标准品溶液再配制成质量浓度为43.71、131.13、218.55、305.96、393.38 mg/L 5个梯度水平溶液。待仪器稳定后进样，绘制出氟醚菌酰胺面积比对质量浓度的标准曲线，得出线性方程及其R2。以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，用SPSS软件拟合工作曲线。求得氟醚菌酰胺5种质量浓度标准溶液线性方程为y=9.6052x+18.515，R2=1。图1氟醚菌酰胺标样色谱图图2氟醚菌酰胺样品色谱图刘振邦，等：5%氟醚菌酰胺烟剂的HPLC分析493农 药 AGROCHEMICALS第卷62表25%氟醚菌酰胺FU准确度测定进样顺序称样量/mg峰面积标样峰面积平均值样品峰面积平均值理论加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%相对标准偏差/%标样53.12019.82018.32156.456.1056.0599.91100.20.24样品156.92158.8空白助剂1124892154.0标样53.12016.8标样53.12016.82018.52212.057.2957.49100.36样品258.12211.7空白助剂2110882212.3标样53.12020.2标样53.12020.22020.82234.957.7858.02100.42样品358.62233.1空白助剂3115872236.6标样53.12021.3标样53.12021.32019.82271.258.9658.99100.05样品459.82269.6空白助剂4115602272.7标样53.12018.3标样53.12018.32019.22271.858.7759.03100.45样品559.62271.8空白助剂5115892271.8标样53.12020.0表15%氟醚菌酰胺FU精密度测定进样顺序称样量/mg峰面积标样峰面积平均值样品峰面积平均值含量/%平均含量/%相对标准偏差/%标样53.12025.92024.62153.45.165.160.21样品1108062153.62153.3标样53.12023.3标样53.12023.32023.82271.35.16样品2114212271.12271.5标样53.12024.2标样53.12024.22025.22240.05.15样品3112582241.62238.4标样53.12026.2标样53.12026.22024.82280.85.18样品4114052288.82272.7标样53.12023.3标样53.12023.32024.12245.75.17样品5112682244.62246.8标样53.12024.92.3精密度测定在同样的色谱操作条件下，分5次平行称取5%氟醚菌酰胺烟剂样品，测定氟醚菌酰胺的质量分数，并计算其相对标准偏差。根据Horwitz方程计算得到氟醚菌酰胺精密度测定中的RSD(%)可接受范围：RSD0.672(1-0.5logC)=2.10，其中C为样品有效成分含量以小数计。5个平行样品测定后得出相应的氟醚菌酰胺含量为5.16%，该方法的相对标准偏差为0.21%，小于RSD(%)可接受范围2.10%，说明分析方法精密度良好，见表1。2.4准确度测定称取5份已知含量的5%氟醚菌酰胺FU，置于50 mL的容量瓶中，分别加入一定量氟醚菌酰胺标准溶液，在上述色谱操作条件下进行测定，采用单点外标法，按照公式(2)计算样品有效成分测得量M。按照公式(3)计算理论添加样品中氟醚菌酰胺有效成分量M2。按照公式(4)计算添加回收率W。经计算，氟醚菌酰胺的回收率范围为99.91%100.45%，见表2。494第7期28 LIU Qingming,KAZUAKI N,KENSUKE K,et al.Effects ofreaction on the preparation of submicron Cu particles by liquidphase reduction method and the study of react