大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及肠道健康的影响_王岳松.pdf

doi:10.7541/2023.2022.0414大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及肠道健康的影响王岳松1 李 鸿2 矣林圆1 刘婧文1 沈志刚1 杨慧君1 袁勇超1(1.华中农业大学水产学院,农业农村部淡水生物繁育重点实验室,武汉 430070;2.湖南省水产科学研究所,长沙 410153)摘要:为探究大豆皂甙对杂交黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidracoPelteobagrus vachelli)生长、免疫及肠道健康的影响,在鱼粉、虾粉及玉米浓缩蛋白为蛋白源的基础饲料中分别添加0、0.20%、0.40%、0.80%、1.60%和4.00%的大豆皂甙,配制成6种等氮等脂的饲料饲喂初始质量为(1.00.17)g的杂交黄颡鱼,分别记为D0、D0.2、D0.4、D0.8、D1.6和D4.0等处理组,每组设3个重复,每个重复30尾鱼。60d饲养试验结束后测定生长指标、体组成、血清免疫、抗氧化酶活性和肠道炎症因子表达量等变化。结果显示:(1)与D0组相比,添加大豆皂甙的处理组增重率和特定生长率均显著性降低(P0.05),饲料系数显著性升高(P0.05)。试验鱼体蛋白含量和肌肉脂肪含量先降低后升高,体脂含量和肌肉蛋白含量先上升后下降。(2)随着饲料皂甙水平的提高,血清T-AOC持续降低,AKP、NO和CAT活性先升高后降低,ACP活性先降低后升高。(3)D0.8、D1.6和D4.0组试验鱼肝脏ACP活性显著高于其他组(P0.05);D0和D4.0组试验鱼肝脏CAT活性显著低于其他组(P0.05);肝脏T-AOC活性表现出先升高后降低的趋势;肝脏MDA含量随皂甙水平升高逐渐降低,添加皂甙的处理组均显著低于D0组(P0.05);肝脏T-SOD表现出先降低后升高的趋势。(4)随着日粮皂甙水平的不断提高,远端肠道TGF-和IL-10 mRNA表达不断下调,IL-1、IL-8、IL-15和TNF-mRNA表达先上调后下调。综上所述,在饲料中添加一定水平的大豆皂甙对杂交黄颡鱼的生长性能、免疫及抗氧化能力和肠道健康产生了明显的负面影响,当大豆皂甙水平超过0.40%后,杂交黄颡鱼生长和免疫均受到抑制,出现了典型的肠炎现象。因此在黄颡鱼商业养殖中选择饲料需要控制皂甙含量不超过0.40%。关键词:大豆皂甙;生长;免疫;肠道健康;杂交黄颡鱼中图分类号:S965.1 文献标识码:A 文章编号:1000-3207(2023)09-1386-10 蛋白质是水产动物生长过程中所需的重要营养与能源物质1,而鱼粉产量日益下降2,大豆蛋白成为鱼粉的主要替代原料之一。豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品,价格低廉,蛋白质含量高3,不过相较于鱼粉,豆粕中存在的抗营养因子会给鱼类带来危害,降低生长性能46,是影响大豆蛋白高效利用的主要原因。大豆蛋白源主要含有大豆抗原蛋白、大豆皂甙、植物凝集素、低聚糖和蛋白酶抑制因子等抗营养因子7。目前生产上已经可以运用热处理、生物发酵和膨化处理等技术大幅度降低各类抗营养因子含量,而大豆皂甙热稳定性好,有效的祛除方法为乙醇抽提,成本较高,不易达成。不经处理的豆粕中大豆皂甙占1.9%2.5%8,会使鱼类肠道黏膜上皮细胞渗透性增强,影响其肠道上皮细胞功能的正常发挥,阻碍物质运输9,从而导致被动摄取抗原类物质10,可引起牙鲆(Paralich-thys olivaceus)11、大西洋鲑(Salmo salar)12、大菱鲆(Scophthalmus maximus)13、虹鳟(Oncorhynchusmykiss)14、黄鳝(Monopterus albus)15和异育银鲫(Carassius auratus gibelio)16等鱼类出现肠炎病。黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)是我国一种优质的淡水养殖品种,其肉质鲜美,且无肌间刺,深受消费者的好评。杂交黄颡鱼新品种“黄优1号”(Pel-teobagrus fulvidracoPelteobagrus vachelli)是本团队历经多年培育而出,相比于普通黄颡鱼苗种,“黄优一号”成活率更高、生长更快、耐低氧能力第 47 卷 第 9 期水 生 生 物 学 报Vol.47,No.9 2023 年 9 月ACTA HYDROBIOLOGICA SINICAS e p.,2 0 2 3 收稿日期:2022-10-11;修订日期:2023-01-03基金项目:国家自然科学基金面上项目(32273167);湖北省大学生创新创业训练计划(S202210504191)资助 Supported by the NationalNatural Science Foundation of China(32273167);Provincial Innovation and Entrepreneurship Training Program for Undergraduate(S202210504191)作者简介:王岳松(1998),男,硕士研究生;研究方向为名特优水产种苗繁育与健康养殖。E-mail:通信作者:袁勇超,E-mail:更强17,逐渐成为养殖行业普遍接受的黄颡鱼品种之一,但其相关营养研究目前较少。本研究旨在探究饲料中不同水平的大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及抗氧化性能和肠道健康的影响,研究其抗营养性,为豆粕在杂交黄颡鱼饲料中的应用提供理论依据。1 1 材料与方法 1.11.1 试验饲料饲料以鱼粉、虾粉和玉米浓缩蛋白为蛋白质源,麦麸粉作为碳水化合物来源,鱼油作为脂肪源来源制备基础饲料。在不同组别饲料中分别添加0、0.20%、0.40%、0.80%、1.60%和4.00%的大豆皂甙(纯度80%),记为D0、D0.2、D0.4、D0.8、D1.6和D4.0等处理组。所有原料过60目筛,按照逐级预混原则将维生素和矿物质预混料与鱼粉等原材料混合在一起。加入鱼油后混合均匀,油状颗粒物手工搓散,添加适量蒸馏水混匀,倒入制粒机中制成粒径为2 mm的小颗粒。经过65烘箱烘干,称得初始重量,于20下保存。饲料配方及营养组成见表 1。1.21.2 养殖试验实验鱼为湖北黄优源渔业发展有限公司提供的杂交黄颡鱼“黄优1号”(Pelteobagrus fulvidracoPelteobagrus vachelli)苗种,养殖于华中农业大学水产学院实验基地室内循环养殖系统。驯养14d后,选取体格健康,无畸形、平均体重约为1 g的幼鱼540尾,随机投放于18个实验缸中,每个实验缸30尾。日投喂量为鱼体重的2.0%5.0%,具体投喂量根据摄食情况、气温及天气情况调整,每天投喂两次,投喂时间分别为08:00和18:00。每次投饵2h后清理食物残渣和粪便,将未摄食完的饲料烘干至恒重,用于记录饲料消耗量,在实验过程中记录试验鱼存活情况,有试验鱼死亡及时捞出,养殖试验周期为60d。1.31.3 样品采集在养殖试验结束后,停食24h,用MS-222麻醉。称取每条黄颡鱼体重,每个平行取3条10 g左右实验鱼测量体长,称量内脏团、肝脏和肠系膜脂肪。每个平行取15尾实验鱼从尾静脉处取血液,表 1 饲料配方及营养组成(%干物质)Tab.1 Formulation and proximate composition of the experimental diets(%dry matter)成分Ingredient不同饲料皂甙含量的处理组Different dietary soyasaponins treectments(%)D0D0.2D0.4D0.8D1.6D4.0白鱼粉White fish meal35.0035.0035.0035.0035.0035.00虾壳粉Shrimp shell meal18.0018.0018.0018.0018.0018.00玉米浓缩蛋白Corn gluten meal15.0015.0015.0015.0015.0015.00鱼油Fish oil4.004.004.004.004.004.00麦麸粉Wheat bran powder19.3019.1018.9018.5017.7015.30大豆皂甙Soyasaponins0.000.200.400.801.604.00维生素预混物Vitamin premix12.002.002.002.002.002.00矿物质预混物Mineral premix22.002.002.002.002.002.00磷酸二氢钙Ca(H2PO4)20.500.500.500.500.500.50食盐Sodium chloride1.001.001.001.001.001.00羟甲基纤维素钠CMC3.003.003.003.003.003.00甜菜碱Betaine0.200.200.200.200.200.20营养水平Nutrient level粗脂肪Crude lipid6.736.606.856.486.276.13粗蛋白Crude protein41.4841.5540.9040.8640.2140.19灰分Ash11.9512.1812.0311.7812.0411.86注:1维生素预混料(mg或g/kg):维生素B1,15 g;维生素B2,25 g;维生素B6,20 g;维生素B12,50 mg;纤维糖,180 g;维生素B3,30 g;维生素B5,40 g;叶酸,5 g;维生素B7,1 mg;维生素A,5 million IU;维生素D3,3 million IU;维生素K3,10 g;维生素C,150 g;维生素E,60 g;纤维素,415 g;2矿物质预混料(g/kg):NaF,1.5 g;KI,2.5 g;CoCl26H2O,0.1 g;CuSO45H2O,10 g;FeSO47H2O,40 g;ZnSO47H2O,6.0 g;MnSO4H2O,2 g;MgSO47H2O,25 g;Ca(H2PO4)2H2O,12.5 g;NaCl,2.5 g;CaCO3,27.8 g;沸石粉,870.1 gNote:1The vitamin premix(mg or g/kg):Vitamin B1,15 g;Vitamin B2,25 g;Vitamin B6,20 g;Vitamin B12,50 mg;Inositol,180 g;Vitamin B3,30 g;Vitamin B5,40 g;Folic acid,5 g;Vitamin B7,1 mg;Vitamin A,5 million IU;Vitamin D3,3 million IU;Vitamin K3,10 g;Vitamin C,150 g;Vitamin E,60 g;Cellulose,415 g;2The mineral premix(g/kg):NaF,1.5 g;KI,2.5 g;CoCl26H2O,0.1 g;CuSO45H2O,10 g;FeSO47H2O,40 g;ZnSO47H2O,6.0 g;MnSO4H2O,2 g;MgSO47H2O,25 g;Ca(H2PO4)2H2O,12.5 g;NaCl,2.5 g;CaCO3,27.8 g;Zeolite powder,870.1 g9 期王岳松等:大豆皂甙对杂交黄颡鱼生长、免疫及肠道健康的影响13873500 r/min,4恒温离心取上清液,用于测定血清酶活性;用医用剪刀剪开腹腔,暴露肝脏,用镊子取出肝脏,用生理盐水冲洗,用滤纸吸去多余水分称重;每个平行取5尾鱼,取远端肠道(肠道“U”形底部,约中间1/3段),用于实时荧光定量PCR(qPCR);每个平行留存约50 g全鱼样品,采集约35 g肌肉,用于营养成分测定;以上所得样品置于80条件下保存。1.41.4 生长指标计算存活率(SR,%)=100末期鱼存活数/初期鱼存活数增重率(WGR,%)=100(末期鱼体重初期鱼体重)/初期鱼体重特定生长率(SGR,%/d)=100(ln末期鱼体重ln初期鱼体重)/实验周期饲料系数(FCR)=100摄食量/(末期鱼体重