骆驼乳清蛋白对对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的保护作用_高天.pdf

第 44 卷 第 1 期2023 年1 月Vol.44 No.1Jan.2023骆驼乳清蛋白对对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的保护作用高天1，景晓霞1，占登1，哈斯苏荣1，2，*（1.内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病诊疗技术重点实验室，呼和浩特 010018；2.内蒙古中哈骆驼研究院，阿拉善右旗 750300）摘要：本试验旨在研究骆驼乳清蛋白（CWP）对对乙酰氨基酚（APAP）所致小鼠肝损伤的保护作用。选取6周龄KM小鼠，适应性饲养1周后，随机分成6组，每组8只。正常对照组（NC）和APAP致肝损伤模型组（LD）的小鼠饲喂基础日粮并每天灌胃生理盐水，连续处理8 d后，LD组小鼠经腹腔注射APAP（325 mg/kg）；N-乙酰半胱氨酸阳性药物对照组（NAC）的小鼠，每天腹腔注射N-乙酰半胱氨酸（150 mg/kg），连续处理8 d后，经腹腔注射APAP（325 mg/kg）；CWP低、中、高剂量组（LCWP、MCWP和HCWP）的小鼠，每天分别灌胃100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg CWP，连续处理8 d后经腹腔注射APAP（325 mg/kg），造成小鼠急性肝损伤。注射APAP后12 h，各组小鼠经眼球采血并分离血清后处死。采集肝组织经H&E染色后观察组织学变化；检测小鼠血清中肝功能生物标志物水平、氧化应激标志物水平及肝脏中的抗氧化酶活性。结果表明：与LD组相比，低、中、高剂量CWP干预均能显著降低小鼠血清丙氨酸氨基转移酶活力、天冬氨酸氨基转移酶活力和肿瘤坏死因子-含量（P0.05），显著增强超氧化物歧化酶活性（P0.05）；中、高剂量CWP可显著降低小鼠血清丙二醛和白介素-6含量（P0.05）；高剂量CWP可有效缓解APAP所致的小鼠肝组织病理学改变，显著提高血清谷胱甘肽水平（P0.05）。由此可见，CWP可增强小鼠肝脏的抗氧化能力，并抑制炎症反应，最终缓解了APAP诱导的肝损伤。关键词：骆驼乳清蛋白；肝损伤；对乙酰氨基酚；氧化应激；炎症中图分类号：S872 文献标识码：A 文章编号：1009-3575（2023）01-0001-06Protective Effect of Camel Whey Protein on Liver Injury Induced by Acetaminophen in MiceGAO Tian1，JING Xiaoxia1，Zhan deng1，HASI Surong1，2，*（1.Key Laboratory of Clinical Diagnosis and Treatment Technology in Animal Disease，Ministry of Agriculture and Rural Affairs，College of Veterinary Medicine，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China；2.CHN-KAZ Camel Research Institute of Inner Mongolia，Alagxa Right Banner 750300，China）Abstract：This paper aimed to investigate the protective effect of camel whey protein on acetaminophen-induced liver injury in mice.Six-week-old KM mice were selected and randomly divided into 6 groups after adaptive feeding for one week，with eight mice in each group.Mice in the normal control group（NC）and APAP-induced liver injury model group（LD）were fed the basal diet and given normal saline daily by the gavage method.After continuous treatment for eight days，mice in the LD group were treated with APAP（325 mg/kg）intraperitoneally.Mice in the N-acetylcysteine-positive drug control group（NAC）were treated daily with N-acetylcyste-ine（150 mg/kg）intraperitoneal injection for eight days，followed by the APAP administration.Mice in the CWP low-，medium-，and high-dose groups（LCWP，MCWP and HCWP）were treated daily with 100 mg/kg，200 mg/kg，and 400 mg/kg CWP by intraperitoneal injections of APAP after continuous treatment for eight days.At twelves hours after APAP administration，the serum was separated from eyeball blood of mice in each group and sacrificed.The liver tissue was quickly collected and fixed，and the histological changes were observed after H&E staining.The contents of liver function biomarkers and oxidative stress markers in mice serum，including the activities of antioxidant enzymes in the liver，were detected.The results showed that three doses of CWP could significantly re-duce the activity of alanine aminotransferase，aspartate aminotransferase and the content of tumor necrosis factor-in the serum of mice with liver injury（P0.05），and significantly enhance the activity of superoxide dismutase（P0.05）.Medium and high doses of CWP significantly reduced serum malondialdehyde and interleukin-6 levels in mice（P0.05）.High-dose CWP could effectively alleviate APAP-induced liver histopathological changes in mice and significantly increase serum glutathione levels（P0.05）.It was observed that CWP intervention can alleviate the pathological changes of liver tissue in mice in a dose-dependent manner，enhance the antioxidant defense ability of mice and inhibit the production of major inflammatory factors，thereby alleviating APAP-induced liv-er injury in mice.Thus，CWP may enhance the antioxidant capacity and inhibit the inflammatory response in mouse liver，ultimately alleviating APAP-induced liver injury.Key words：Camel whey protein；Liver injury；Acetaminophen；Oxidative stress；Inflammation随着传统药物的广泛使用及新药的不断开发和应用，用药安全受到医务工作者和患者的广泛关注。药物性肝损伤（DILI）不仅给用药者造成潜在威胁，而且迫使许多已上市药物因此类问题而下架，DOI：10.16853/ki.1009-3575.2023.01.001内 蒙 古 农 业 大 学 学 报（自 然 科 学 版）Journal of Inner Mongolia Agricultural University（Natural Science Edition）收稿日期：2022-12-06基金项目：内蒙古自治区自然科学基金项目（2020MS03011）；国家自然科学基金项目（32060815）作者简介：高天（1996），男，硕士研究生，主要从事兽医药理与毒理学方面的研究；*为通信作者，哈斯苏荣E-mail：2023 年内 蒙 古 农 业 大 学 学 报（自 然 科 学 版）给国家和许多药物研发单位造成重大经济损失1。随着肝损伤病理机制的深入研究和技术的快速发展，出现许多新兴疗法，如基因疗法、纳米疗法和有毒药物的结构修饰等。例如，最近报道了C-X-C基序趋化因子 ligand-9（CXCL9）在 APAP 诱导的肝损伤中的作用2。对乙酰氨基酚（APAP）又称为扑热息痛，因其药效安全稳定，所以作为活性成分出现在600多种解热镇痛药物中。但是不合理使用APAP不仅会引起DILI，还会增加神经系统和泌尿生殖系统疾病的风险3；若在孕期使用，还可能会影响胎儿发育。正常情况下，治疗剂量的APAP进入机体，主要通过葡萄糖醛酸化和硫酸化代谢，仅有少量被CYP450亚型（主要是CYP2E1）氧化，产生N-乙酰基-对苯醌亚胺（NAPQI）的细胞毒性化合物4。肝脏中的GSH通常可以解毒微量的NAPQI，防止组织损伤4-5。而当过量使用 APAP 时，无毒代谢途径达到饱和，通过CYP2E1途径会产生更多有毒的代谢物质，并消耗肝脏中的GSH，直至耗尽；剩余的NAPQI与细胞内蛋白质和核酸共价结合，会产生APAP加合物，导致氧化应激和线粒体功能障碍，最终导致肝细胞损伤5。NAPQI导致肝细胞损伤后会促进TNF-、IL-1、IL-6等促炎细胞因子分泌，这又会导致巨噬细胞和中性粒细胞被招募到肝脏血管系统加重炎症反应，最终加剧APAP引起的肝损伤6。N-乙酰半胱氨酸（NAC）是APAP毒性的主要防治药物。NAC除了通过提供半胱氨酸来补充谷胱甘肽储备，本身也与有毒代谢物结合并清除自由基5。研究显示，NAC可通过抑制酶穿过细胞膜来预防四氯化碳肝损伤，恢复肝细胞中抗氧化酶的活性，降低肝纤维化百分比7，又可通过调节肠道屏障功能、恢复肠道菌群组成、促进肠道功能性短链脂肪酸的产生而减轻小鼠酒精性肝损伤8。NAC虽然有治疗效果，但其作用仅限于发病早期，且口服治疗剂量的NAC可能引起恶心、呕吐、腹泻、肠胃胀气等不良反应，静脉注射NAC又会较大概率引发过敏反应5。因此，寻求新的、安全的天然抗氧化剂具有重要意义9