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齐墩果酸脂质体对顺铂所致小鼠少弱精子症的保护作用研究_赵峻秀.pdf
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果酸 脂质体 所致 小鼠 精子 保护 作用 研究 赵峻秀
NJA中华男科学杂志National Journal of AndrologyZhonghua Nan Ke Xue Za Zhi2022,28(11):970 975http:/www androl cn论著Basic esearch(基础研究)齐墩果酸脂质体对顺铂所致小鼠少弱精子症的保护作用研究赵峻秀1,陈振宇1,谭振宇2,李艾津1,郗艳丽1(吉林医药学院,1 公共卫生学院,2 临床医学院,吉林 吉林 132013)【摘要】目的:研究齐墩果酸脂质体(OA-Lips)对顺铂所致小鼠少弱精子症的保护作用。方法:将 60 只IC 小鼠随机分为对照组,模型组,阳性对照组,OA-Lips 低、中、高剂量组,每组各 10 只。OA-Lips 低、中、高剂量组每天分别给予 25、50 和 100 mg/kg OA-Lips 水溶液灌胃,阳性对照组每天给予 50 mg/kg 维生素 E 水溶液灌胃。第28 天,除对照组外,其余各组小鼠均给予 1 次 10 mg/kg 顺铂溶液腹腔注射,对照组小鼠则给予相同剂量生理盐水腹腔注射。给药 3 d 后处死小鼠并取材,检测小鼠精子浓度和运动学参数、睾丸组织经 HE 染色检测,酶联免疫试剂盒测定睾酮水平。结果:与模型组相比,OA-Lips 高剂量组活动精子百分率以及精子浓度显著升高(P 0 05)。睾丸组织经 HE 染色后,相较于模型组,OA-Lips 可以显著改善睾丸组织的损伤(P 0 05),对生精小管和间质细胞有一定的保护作用。随着 OA-Lips 的使用剂量增加,各组小鼠前向运动的精子数量逐渐升高,各剂量组小鼠精子的 VCL、VSL、VAP、LIN、ST、WOB、ALH 和 BCF 逐渐升高。OA-Lips 各剂量组小鼠血清中睾酮水平显著高于模型组(P 0 05)。OA-Lips 高剂量组小鼠精子畸形率显著低于模型组、阳性对照组和 OA-Lips 低剂量组(P 0 05);给予 OA-Lips 后,精子畸形率水平下降,精子畸形得到显著改善(P 0 05)。结论:OA-Lips 能够改善小鼠的少弱精子症,提高小鼠的生殖能力。【关键词】齐墩果酸;脂质体;顺铂;少弱精子症;小鼠中图分类号:285文献标志码:Adoi:10 13263/j cnki nja 2022 11 002Protective effect of oleanolic acid liposomes on cisplatin-induced oligoasthenospermia in miceZHAO Jun-xiu1,CHEN Zhen-yu1,TAN Zhen-yu2,LI Ai-jin1,XI Yan-li11 School of Public Health,2 School of Clinical Medicine,Jilin Medical College,Jilin,Jilin 132013,China【Abstract】Objective:To study the protective effect of oleanolic acid liposomes(OA-Lips)on cisplatin-induced oligoastheno-spermia(COAS)in miceMethods:Sixty IC mice were randomly divided into a normal control,a COAS model control,a positivecontrol and a low-,a medium-and a high-dose OA-Lips group The animals in the low-,medium-and high-dose OA-Lips and positivecontrol groups were given intragastrically OA-Lips solution at 25,50,and 100 mg/kg/d and vitamin E at 50 mg/kg/d,respectivelyOn the 28th day,the mice in the COAS model control,positive control and OA-Lips groups were injected intraperitoneally with cispla-tin solution at 10 mg/kg,while those in the normal control group with the same dose of normal saline Three days after administration,all the mice were sacrificed and their testis tissues collected for detection of the semen parameters and observation of the testicular mor-phologyesults:Both the percentage of motile sperm and sperm concentration were significantly increased in the high-dose OA-Lipsgroup(P 0 05)HE staining showed that OA-Lips remarkably improved the damaged testis tissue(P 0 05)and protected theseminiferous tubules and interstitial cells The percentage of progressively motile sperm(PMS)and the curvilinear velocity(VCL),straight line velocity(VSL),average path velocity(VAP),linearity(LIN),straightness(ST),wobble(WOB),amplitude of lat-079基金项目:吉林省科技发展计划基金(20170623093-11TC)作者简介:赵峻秀(1998-),女,吉林吉林市人,在读本科生,从事药物毒性研究。通讯作者:郗艳丽,Email:jilin2534126163 comeral head displacement(ALH)and beat-cross frequency(BCF)of sperm were gradually increased in a dose-dependent manner in theOA-Lips groups The serum T level was significantly higher(P 0 05)in the OA-Lips-treated mice than in the COAS model controlswhile the percentage of morphologically abnormal sperm(MAS)markedly lower in the high-dose OA-Lips group than in the model con-trol,positive control and low-dose OA-Lips groups(P 0 05)Conclusion:OA-Lips can relieve oligoaspermia and improve theproductive ability of mice【Key words】oleanolic aicd;liposome;cisplatin;oligoasthenospermia;mouseSupported by Sci-Tech Development Program of Jilin Province(20170623093-11TC)Correspondence to:XI Yan-li,email:jilin2534126163 comeceived:April 22,2022;accepted:September 10,2022顺铂是首个投入肿瘤治疗的铂类药物,如今仍广泛用于多种实体瘤的治疗。顺铂约有 40 种组织特异性毒性1,其中生殖毒性是主要的毒副反应之一2。近年来对顺铂所致生殖毒性方面已有相关研究,顺铂所引起的氧化损伤是引起生殖毒性的重要机制之一3。齐墩果酸为天然植物化学物,毒性低,抗氧化能力强4,其可以成为缓解顺铂所致生殖毒性的重要候选药物之一。但关于利用齐墩果酸防治顺铂所致生殖毒性的研究较少,而齐墩果酸的水溶性差,这一特性使其生物利用度低5。因此,本研究拟将其制成脂质体以提高其水溶性,并利用齐墩果酸脂质体防治顺铂所致生殖毒性,以期为齐墩果酸的应用奠定实验基础。1材料与方法1 1实验动物、主要试剂和仪器SPF 级成年雄性IC 小鼠,体质量(20 2)g(长春亿斯实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK(吉)20180007)。实验前小鼠适应性饲养5 d。饲养条件:温度(20 2),湿度 45%65%,12 h 明暗交替,自由饮水摄食。齐墩果酸(西安通泽生物科技公司),大豆卵磷脂(美亚斯公司),胆固醇(天津化学试剂厂),顺铂(齐鲁制药有限公司),睾酮酶联免疫测定试剂盒(北京博奥拓达)。Syn-ergyH1M 酶标仪(美国 BioTek),EV311 旋转蒸发仪(北京莱伯泰科),SCA-H-01P 精液分析自动检测系统(西班牙 SCA);Zeta 粒度分析仪(英国马尔文);1260 Infin-ity 高效液相色谱仪(美国安捷伦)。1 2齐墩果酸脂质体(OA-Lips)的制备通过乙醇注入法制备 OA-Lips,参照文献准确称取定量齐墩果酸、大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇为脂相溶液,Tween-80 溶于 PBS 为水相溶液,于磁力搅拌器上将脂相溶液缓慢注射到水相溶液中,待两者充分混匀后,于旋转蒸发仪上挥尽乙醇,可得乳白色 OA-Lips 悬浮液,向其中加入适量超纯水后,超声分散后过 0 45 m 滤膜6。1 3动物分组及给药小鼠随机分为对照组,模型组,阳性对照组,OA-Lips 低、中、高剂量组,每组10 只。OA-Lips 低、中和高剂量组每天分别给予25、50、100 mg/kg OA-Lips 水溶液灌胃,阳性对照组每天给予50 mg/kg 维生素 E 水溶液灌胃。OA-Lips 各剂量组和阳性对照组均连续灌胃28 d。第28 天,除对照组外,其余各组小鼠均给予1 次10 mg/kg 顺铂溶液腹腔注射。1 4睾丸组织病理学检测给药3 d 后,眼球取血处死小鼠,摘取睾丸组织固定,浸蜡、包埋、修块,切片,用苏木素-伊红染色法进行染色、封片,显微镜下观察比较睾丸组织的变化。1 5精子浓度、精子活力及畸形率测定依照文献 7 方法摘取附睾组织并制备精子悬液,取 10 l 加入精子计数板,于光镜下观察并拍照,遵循记头不记尾原则,SCA 软件自动统计精子浓度及活力参数。取 5 l 精子悬液涂片,依照文献 7 方法进行精子畸形率测定。1 6生殖激素测定将全血 3 000 r/min 离心10 min,取上清,利用酶联免疫试剂盒测定睾酮水平。1 7统计学分析用 SPSS 26 0 软件进行数据处理,所有计量资料均用 x s 表示,各组间均数比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),组间两两比较采用最小显著差法(LSD)检验,检验水准 =005。2结果2 1涂片观察 OA-Lips 对各组小鼠精液品质的影响精液涂片后显微镜观察发现,与对照组比较,模型组小鼠活动精子百分率以及精子浓度显著下降(P 0 05)。阳性对照组和 OA-Lips 高剂量组活动精子百分率以及精子浓度显著升高(P 0 05)。2 2睾丸组织病

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