牛口蹄疫诊断方法和预防措施_余兴富.pdf

http:/2023年1月 第14卷 第2期牛口蹄疫诊断方法和预防措施余兴富寻甸回族彝族自治县鸡街镇农业综合服务中心，云南寻甸655213摘要：牛口蹄疫属于一类动物传染病，牛只患病后生长发育速度减缓，给养殖场带来严重的经济损失。基于此，从病原学诊断、血清学诊断、抗体检测及 PCR 技术检测等方面概述牛口蹄疫诊断方法，提出做好日常消毒、严格饲料供给、定期免疫接种、规范引种流程等牛口蹄疫防治措施。关键词：牛；口蹄疫；疾病诊断；预防措施中图分类号：S858.23文献标志码：B文章编号：1674-7909（2023）02-98-30引言牛只感染口蹄疫病毒后会出现体温升高、口腔发热、口腔黏膜潮红，蹄部、舌头上和唇部会出现大量水疱等症状。病牛的病情因年龄不同而存在一定差异，年龄越小，病情越重、病死率越高。因此，养殖户应加强对牛口蹄疫的预防、诊断和治疗。1牛口蹄疫概述1.1病原口蹄疫病毒属于RNA朊病毒，具有急性、热性、接触性等特点，且其变异程度较高。牛口蹄疫在全球范围内均属于重大传染性疫病，目前已经发现7个血清型和60多个亚型，血清型为O型的口蹄疫病毒的感染范围最广。该病毒对环境的耐受力较强，尤其是耐寒性较强，在低温的血液、粪便中存活时间可超过4个月，但是在阳光照射下1 h就会失活。使用氢氧化钠、碳酸氢钠、甲醛、过氧乙酸等消毒剂可以灭活此病毒1。1.2传播途径此病的传染源是患病牛及携带病毒的牛只。健康牛只与含有病原微生物的唾液、乳汁、粪便等接触之后被感染，或者与患病牛污染的饲草料、用具、饮水等接触后也会被感染。各年龄阶段的牛只均可被该病感染，但是犊牛感染此病毒后的发病率及病死率显著高于其他年龄段的牛只2。1.3临床表现此病在牛羊等草食动物中的传播速度很快，但是由于其具有一定的潜伏期（25 d），因此其临床表现是逐步加重的。患病牛会出现食欲不振甚至废退但饮水增加，精神低沉萎靡，体温逐渐升高到 41 C 等症状。牛患病后停止反刍，面部、舌根、牙龈、乳头、趾间等多个部位出现形状不规则、大小不一的水疱，水疱破裂后会有黏液流出。同时，患病牛会出现一系列的并发症，如局部组织出现坏死现象，妊娠母牛出现早产、流产等情况，进而诱发心肌炎、胃溃疡、肠炎等3。2牛口蹄疫诊断方法口蹄疫对牛只的危害较大，因此，及时准确地对该病做出诊断，把握最佳治疗时机尤为重要。兽医根据临床表现只能做初步判断，还需要根据专业的实验室检测进行确诊。常见的牛口蹄疫诊断方法有病原学诊断、血清学诊断、抗体检测、PCR技术检测4种。2.1病原学诊断此诊断方法主要是运用病毒分离技术对牛口蹄疫病毒进行确定，一般包括动物接种和细胞培养 2种。动物接种就是将从患病牛身上采集的原始病料对乳鼠、豚鼠、牛等动物进行腹腔接种。若在接种病料后的几天内，乳鼠、豚鼠、牛等动物死亡，则说明存在牛口蹄疫病毒。需要注意的是，由于乳鼠、豚鼠等实验动物较小、投资较少等，检测人员一般会选择将其作为病料接种动物。但若发现致病毒株比较重要，则可以选择牛等本体动物进行接种。目前，常用BHK-21和IB-RS-2传代细胞检测口蹄疫病毒。2.2血清学诊断常用的血清学诊断方法包括补体结合试验和反向作者简介：余兴富（1977），男，本科，高级兽医师，研究方向：畜牧兽医、畜牧科技推广。98DOI:10.19345/ki.1674-7909.2023.02.041http:/间接血凝集试验，其中补体结合试验是国际通用的、经典的口蹄疫病毒检测和定型方法。补体结合试验（CFT）的测定原理：补体均参与抗原-抗体、溶血系统（其作为指示剂）的反应，若待检测的病料中含有病毒的抗原，则抗原与血清中的抗体会发生特异性反应形成复合物，这就会导致补体与抗原-抗体形成的复合物进行完全结合，导致溶血系统再无游离的补体可以结合，不会出现溶血现象，此时说明待测的病料中含有口蹄疫病毒，即检测结果为阳性。反向间接血凝集试验作为检测行业认可的、重要的检测口蹄疫病毒的方法之一，具有操作简单、方便等优势，临床应用较普遍。其测定原理是在进行了醛化脱敏处理的绵羊红细胞上偶联口蹄疫病毒的抗体，红细胞的表面被抗体吸附，再和游离的抗原进行特异性结合，进而形成抗原-抗体凝集网，此时肉眼就可以观察到红细胞发生了凝集现象，此现象表明检测结果为阳性。2.3抗体检测病毒中和试验和酶联免疫吸附试验是常用的检测牛口蹄疫病毒的抗体检测方法。病毒中和试验（VNT）可以对口蹄疫病毒的血清型、病毒中和指数进行鉴定。其检测原理是病毒可刺激机体产生中和抗体，中和抗体与病毒结合后使病毒失去吸附细胞的能力,从而丧失感染力。但此方法的使用要求较高，需要23 d的时间进行细胞培养，并且此方法中使用的活病毒存在一定的安全问题，故需要在安全系数较高、专业条件优良的P3实验室中进行操作，因此在养殖实践中有一定的应用局限性。酶联免疫吸附试验（ELISA）的检测原理是将含有抗原或者抗体的患病牛的血清吸附在固相载体上，然后在载体上进行免疫酶的相关反应，最终可以用肉眼或者分光光度计观察底物显色结果而进行判定。由于此方法具有操作简单、迅速、敏感性较强、检测结果准确等优点，且在一般的实验室即可进行操作，故被广泛应用于牛口蹄疫的检测4。2.4PCR技术检测此技术具有灵敏度较高、特异性较强、检测速度较快、检测结果较为准确等优势，可以应用于各种动物采集的各种病料的检测，且此技术不存在生物安全问题，常见的有 RT-PCR 技术、荧光定量 PCR（qPCR）技术等。RT-PCR技术的应用原理为将病原为RNA朊病毒的口蹄疫病毒进行反转录合成 cDNA，再以 cDNA 为模板扩增合成目的片段。采用此技术不仅可以进行定性检测，还可以进行定量检测。首先采集患病牛的病料（如牛奶、鼻黏液、唾液等）并放入灭菌锅中进行处理，再用PBS缓冲液进行冲洗并制成待检测的悬浊液；设计并合成关于口蹄疫病毒的引物，再使用自配试剂或者购买的专用试剂盒对样品中含有的总RNA进行提取，提取之后为了检测RNA的完整性需要在含有甲醛的凝胶上进行电泳；然后在确定RT-PCR所需要的最优的反应条件及试剂的最佳浓度后进行RT-PCR反应程序；最后对所得到的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，以100 bp DNA Ladder为参照物，在紫外线灯下观察PCR产物在凝胶中的位置。通用引物可扩增到 457 bp 大小的目的片段，即可判定为感染了口蹄疫5。荧光定量 PCR（qPCR）技术是根据标记基因的荧光共振能量转移原理而实现的。根据试验方法的不同，qPCR技术可以分为染料法（以SYBR Green法为代表）和探针法（以Taqman法为代表）。在检测牛口蹄疫病毒时，检测人员可应用Taqman qPCR 技术设计特异性引物和Taqman探针，并建立标准曲线，然后通过Ct值判断检测结果，Ct值小于35说明为阳性。这一检测方法比传统荧光定量PCR检测技术灵敏10倍以上，能够更加快速、准确地检测出O型口蹄疫病毒6。3牛口蹄疫防治措施3.1牛口蹄疫治疗方案虽然牛口蹄的发病率较高、传染性较强，但是其致死率不高，抵抗力和免疫力较强的牛只经过一段时间后可以自愈。但牛只患病后会出现食欲不振、生产性能下降等情况，因此，养殖户应根据患病牛的临床表现、患病部位等采取针对性治疗措施。针对口腔部位感染的病牛，养殖人员可用高锰酸钾溶液、食醋等彻底清洗患病部位，阴干之后将冰硼散涂抹在口腔中溃烂、有水疱的部位。针对蹄部患病的牛只，养殖人员可用超氧水将患病牛只的蹄部仔细清洗干净，自然阴干后再将适量的鱼石脂软膏涂抹在蹄部；对于病情较为严重的牛只，可以用绷带缠绕病牛蹄部。针对乳房部位患病的牛只，养殖人员可用肥皂水彻底清洗病部并用酒精消毒，风干之后在乳房上涂抹青霉素软膏。为防止出现乳腺炎，养殖户可以及时将病牛乳房内积蓄的乳汁挤出。3.2牛口蹄疫预防策略养殖户在畜禽养殖过程中，一定要遵循“预防为主、治疗为辅”的原则，认识到预防的重要性要远远大于治疗。3.2.1做好日常消毒。做好日常消毒工作、提供余兴富.牛口蹄疫诊断方法和预防措施99http:/2023年1月 第14卷 第2期干净卫生的牛舍是保证牛只健康、有效预防疫病发生的第一道防线。因此，养殖户一定要提高重视程度，具体可采取如下措施。首先，要认识到圈舍环境对牛只健康的重要性，制订符合实际情况的消毒制度，定期对圈舍内的墙面、地面、用具等进行全面彻底的消毒，及时清扫牛只排泄的粪便、尿液等污物。其次，在疫病高发季节要增加消毒频次，并交替使用不同的消毒剂，避免病原微生物产生耐药性，降低消毒效果。最后，由于口蹄疫病毒对高温不耐受，但是一般的消毒液又对其起不到很好的作用，因此，为了破坏病原体结构，养殖户可以适当使用一些强酸、强碱溶液进行消毒。此外，即使是未发生疫病的时期，养殖户也要严格执行消毒制度，可以适当调整消毒的时间、频次、消毒剂使用量等。3.2.2严格饲料供给。科学饲养是有效提高牛只抵抗力和免疫力的有效举措之一。养殖户在日常饲养过程中可以适当投喂一些药物，如益生菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌等，以提高牛只的免疫力和抵抗力，从而降低口蹄疫的发生率。这些药物通过改善牛只胃肠道对饲草料的消化吸收能力，提高牛只对疫病的抵抗能力。此外，养殖户还可以在饲料或者饮水中添加具有清热解毒、驱除风邪等功效的黄芪多糖、蒲公英、板蓝根等中草药制剂。养猪户要严格把控所提供饲草料的质量，避免饲喂发霉变质、冷冻的劣质饲料。同时，饲草料种类要丰富多样，既要有青贮、干草类粗饲料，又要有豆粕、玉米等精饲料。养殖户对每次购入的饲草料原料都要进行常规营养成分检测，根据检测结果及时调整饲料配方及饲喂量。3.2.3定期免疫接种。养殖户要严格按照免疫接种流程对适龄的全部牛只接种口蹄疫疫苗。口蹄疫弱病毒疫苗、口蹄疫亚单位苗是目前常用的疫苗种类，接种后15 d内即可产生相关抗体，而注射后的有效免疫时间为4个月左右。养殖户需要定期进行抗体水平监测工作，若发现牛只抗体水平下降，可以补充接种，以保证牛抗体水平处于较高水平，从而实现对口蹄疫的长效防控。3.2.4规范引种流程。为避免外来病原微生物进入养殖场区，养殖户最好坚持自繁自养，确需引种时一定要严格遵循引种流程。首先，严禁从有口蹄疫病原的地区引种。其次，养殖户要查阅所引入牛只的疫苗接种情况、疫病治疗情况等基本信息，确保牛引种之前已经接种了口蹄疫疫苗。最后，对于新引入的牛只，一定要在专门的隔离区域内隔离饲养15 d，并进行常见疫病的检测工作，确保其未携带任何病原之后再混群进行正常饲养。另外，养殖户在引种过程中，一定要对运输车辆、人员等进行全面彻底的消毒，避免引入病毒。为了避免运输途中牛产生应激，养殖户也可提前注射或者在饮水中添加一些抗应激的药物。4结语牛口蹄疫会对整个养牛产业及人类健康造成严重威胁。因此，养殖户必须认识到该疫病的危害和防控工作的重要性，及时采取切实可行的综合防控策略，从而有效降低牛口蹄疫的发生率，保证牛只健康，促进养牛业蓬勃发展。参考文献：1 郭玲.牛口蹄疫的流行病学、临床症状及防治措施 J.新农业，2022（19）：63-64.2 程亮.牛口蹄疫发生、诊断及防治对策 J.中国畜禽种业，2022（7）：135-136.3 常鸿，杨帆，陈少博，等.牛羊口蹄疫的诊断与防治 J.畜禽业，2022（9）：94-96.4 张亮.酶联免疫吸附法在口蹄疫诊断中的研究进展 J.猪业科学，2017（5）：37-39.5 娄高明，杜伟贤，杨傲冰，等.应用 RT-PCR技术检测动物组织中的口蹄疫病毒 J.微生物学通报，2002（4）：9-13.6 李波，蒋慧娴，杨瑾，等.荧光定量 PCR 检测技术在动物检疫中的应用进展 J.食品安全导刊，2021（26）：152-154.100