消毒灭菌、噬菌体.ppt

第第3 3章章 消毒灭菌与消毒灭菌与 病原微生物实验室生物安全病原微生物实验室生物安全 目目 的的 要要 求求 掌握掌握：消毒、灭菌、抑菌、无菌、防腐、消毒、灭菌、抑菌、无菌、防腐、无菌操作的概念；无菌操作的概念；熟悉熟悉：高压灭菌、紫外线及滤过除菌法高压灭菌、紫外线及滤过除菌法的应用范围的应用范围。1 1、灭菌（灭菌（sterilizationsterilization）：杀死）：杀死物体上物体上所有微生物所有微生物（包括芽胞包括芽胞）的方法。）的方法。2 2、消毒消毒（disinfectiondisinfection）：）：杀死杀死物体上或物体上或环境中的环境中的病原微生物病原微生物的方法。的方法。消毒剂：用于消毒的化学药品。常用浓消毒剂：用于消毒的化学药品。常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。度下，只对细菌繁殖体有效。3 3、防腐防腐（antisepsisantisepsis）：防止或抑制微生防止或抑制微生物的生长物的生长的方法。的方法。防腐剂：用于防腐的化学药品。防腐剂：用于防腐的化学药品。第一节第一节 消毒灭菌常用术语消毒灭菌常用术语 4 4、清洁清洁（cleaningcleaning）：是指通过除去尘埃是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程和一切污秽以减少微生物数量的过程。5 5、无菌无菌（asepsisasepsis）和和无菌操作无菌操作：无菌是无菌是无无活的活的M M存在存在，多是灭菌的结果多是灭菌的结果。防止细防止细菌进入人体或其它物品的操作技术菌进入人体或其它物品的操作技术，称称为无菌操作为无菌操作。第二节第二节 消毒灭菌的方法消毒灭菌的方法 一、一、物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法 （一）热力灭菌法（一）热力灭菌法 高温对细菌有明显的致死作用：蛋白质变高温对细菌有明显的致死作用：蛋白质变性；核酸断裂。性；核酸断裂。1、干热灭菌法、干热灭菌法 杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性。杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性。（1）焚烧）焚烧 废弃物品或动物尸体等。废弃物品或动物尸体等。（2）烧灼）烧灼 接种环、试管口等的灭菌。接种环、试管口等的灭菌。（3）干烤干烤 利用干烤箱灭菌利用干烤箱灭菌（160170 C，2h），适用于高温下），适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品不变质、不损坏、不蒸发的物品（4）红外线红外线 是一种是一种0.771000m波波长的电磁波，尤以长的电磁波，尤以110m波长的热效波长的热效应最强。热效应只能在照射到的表面产应最强。热效应只能在照射到的表面产生。与干烤相似，多用于医疗器械的灭生。与干烤相似，多用于医疗器械的灭菌。菌。2、湿热灭菌法、湿热灭菌法 最常用，效果优于干热灭菌法。最常用，效果优于干热灭菌法。同样条件下湿热效果强于干热的原因：同样条件下湿热效果强于干热的原因：湿热的穿透力强湿热的穿透力强 热蒸汽有潜能热蒸汽有潜能 蛋白质含水量越多越容易变性蛋白质含水量越多越容易变性 1、高压蒸汽灭高压蒸汽灭菌法菌法：103.42Kpa经经121.3，维持维持1530分钟，适用于分钟，适用于耐高压和湿热耐高压和湿热的物品的物品，如培，如培养基、手术衣、养基、手术衣、手术器械等。手术器械等。高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器 2、巴氏消毒法：巴氏消毒法：61.162.8持续持续30分分钟或钟或71.7持续持续30秒秒，用于酒类和乳制用于酒类和乳制品的消毒。品的消毒。3、流通蒸汽消毒法：利用一个大气压下、流通蒸汽消毒法：利用一个大气压下100的水蒸气进行消毒。的水蒸气进行消毒。细菌繁殖体细菌繁殖体1530min可被杀灭。可被杀灭。4、间歇蒸气灭菌法、间歇蒸气灭菌法 利用反复多次的流动利用反复多次的流动蒸汽间歇加热以达到灭菌的目的。适用蒸汽间歇加热以达到灭菌的目的。适用于不耐高热的含糖、牛奶等培养基。于不耐高热的含糖、牛奶等培养基。5、煮沸法：、煮沸法：100持续持续510分钟，可用于分钟，可用于手术器械、食具的消毒。手术器械、食具的消毒。水中加入水中加入2%碳酸氢钠，既可提高沸点达碳酸氢钠，既可提高沸点达105 C，促，促进杀灭细菌的芽胞，又可防止金属器皿进杀灭细菌的芽胞，又可防止金属器皿生锈。生锈。（二）辐射杀菌法（二）辐射杀菌法 1、紫外线：紫外线：（1）原理原理：干扰干扰DNA复制复制（使细菌（使细菌DNA形形成胸腺嘧啶二聚体），从而导致细菌死亡。成胸腺嘧啶二聚体），从而导致细菌死亡。（2）杀菌特点杀菌特点：265nm波长的紫外线杀菌波长的紫外线杀菌力最强，但是力最强，但是穿透力较弱穿透力较弱。（3）应用应用：物体表面和空气的消毒物体表面和空气的消毒。（4）紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用。）紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用。2、电离辐射：、电离辐射：（1）原理：原理：x射线、射线、射线、高速电子等射线、高速电子等产生游离基，破坏产生游离基，破坏DNA。（2）应用：用于不耐热塑料、橡胶制品、应用：用于不耐热塑料、橡胶制品、中草药及食品的灭菌。中草药及食品的灭菌。3微波微波 波长为波长为11000mm的电磁波。的电磁波。可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物质，但可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物质，但不能穿透金属表面。主要用于食品、非不能穿透金属表面。主要用于食品、非金属器械、检验室用品、无菌室和病室金属器械、检验室用品、无菌室和病室中食品用具、药杯及其他用品的消毒。中食品用具、药杯及其他用品的消毒。（三三）滤过除菌法滤过除菌法 用物理阻流的方法除去液体或空气中的用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌，达到无菌的目的。细菌，达到无菌的目的。所用的器具是滤菌器（薄膜滤菌器、玻所用的器具是滤菌器（薄膜滤菌器、玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器）。器）。主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。素、抗生素以及空气等的除菌。滤器和生物洁净室滤器和生物洁净室（四）超声波消毒法（四）超声波消毒法 不被人耳感受的高于不被人耳感受的高于20kHz/s的声波，的声波，称为超声波。超声波可裂解多数细菌，称为超声波。超声波可裂解多数细菌，尤其是尤其是G-菌。菌。主要用于粉碎细胞，以提取细胞组分或主要用于粉碎细胞，以提取细胞组分或制备抗原等。制备抗原等。如超声振荡仪如超声振荡仪（五）干燥和低温抑菌法（五）干燥和低温抑菌法 低温：保存菌种。低温：保存菌种。1、冰箱、冰箱 2、液氮罐、液氮罐 3、冷冻真空干燥法：为目前最好的保存冷冻真空干燥法：为目前最好的保存菌种的方法，可保存数年至数十年。菌种的方法，可保存数年至数十年。二、化学消毒灭菌法二、化学消毒灭菌法（一）常用消毒剂的杀菌机制：（一）常用消毒剂的杀菌机制：1、促进菌体蛋白质变性或凝固。、促进菌体蛋白质变性或凝固。2、使微生物细胞成分氧化、水解。使微生物细胞成分氧化、水解。3、干扰和破坏细菌酶的活性。干扰和破坏细菌酶的活性。4、损伤细菌的细胞膜、损伤细菌的细胞膜。常用消毒剂的种类、浓度和用途常用消毒剂的种类、浓度和用途1 类类 型型 名名 称称 浓浓 度度 用用 途途 消毒剂消毒剂 氧化剂氧化剂 高锰酸钾高锰酸钾 0.10.5%皮肤粘膜消毒皮肤粘膜消毒 过氧化氢过氧化氢 325 创口皮肤消毒创口皮肤消毒 过氧乙酸过氧乙酸 0.12 塑料玻璃器材塑料玻璃器材 醇醇 类类 乙醇乙醇 70%80 皮肤消毒皮肤消毒 酚酚 类类 石炭酸石炭酸 25 地面器械地面器械 来苏来苏 25 表面表面 醛醛 类类 甲醛甲醛 38 室内空气熏蒸室内空气熏蒸 戊二醛戊二醛 2 内镜消毒内镜消毒 常用消毒剂的种类、浓度和用途常用消毒剂的种类、浓度和用途2 类类 型型 名名 称称 浓浓 度度 用用 途途 卤卤 素素 氯化合物氯化合物 1001000ppm 饮水、游泳池饮水、游泳池 自由氯自由氯/L 碘化物碘化物 3050ppm 皮肤消毒皮肤消毒 烷烷 基基 环氧乙烷环氧乙烷 4501200mg/L 手术器械敷料手术器械敷料 双氯苯双胍双氯苯双胍 0.54 皮肤粘膜皮肤粘膜 己烷己烷洗必泰洗必泰 表表 面面 新洁尔灭新洁尔灭 0.050.1 皮肤粘膜器械皮肤粘膜器械 活性剂活性剂 杜灭酚杜灭酚 0.050.1 皮肤创口器械皮肤创口器械（二）化学消毒按杀菌能力剂分三类：（二）化学消毒按杀菌能力剂分三类：1 1、高效消毒剂高效消毒剂（highhigh-level disinfectantslevel disinfectants）（1 1）含氯消毒剂含氯消毒剂；（；（2 2）过氧化物消毒剂过氧化物消毒剂；（3 3）醛类消毒剂醛类消毒剂；（；（4 4）环氧乙烷环氧乙烷 2 2、中效消毒剂中效消毒剂（intermediateintermediate-levellevel disinfectantsdisinfectants）（1 1）含碘消毒剂含碘消毒剂；（；（2 2）醇类消毒剂醇类消毒剂 3 3、低效消毒剂低效消毒剂（lowlow-level disinfectantslevel disinfectants）（1 1）季铵盐类季铵盐类；（；（2 2）氯已定氯已定；（；（3 3）高锰酸钾高锰酸钾 固体二氧化氯消毒剂固体二氧化氯消毒剂 第二节第二节 消毒灭菌的运用消毒灭菌的运用 一一、医疗器械物品的消毒灭菌医疗器械物品的消毒灭菌 （一一）高危器械物品高危器械物品 用时需进入无菌组织的物用时需进入无菌组织的物品品。所有这些物品都应该灭菌所有这些物品都应该灭菌。（二二）中危器械物品中危器械物品 用时不进入无菌组织但接用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械触黏膜的器械。采用消毒即可采用消毒即可。（三三）低危器械物品低危器械物品 只接触未损伤皮肤只接触未损伤皮肤但但不进不进入无菌组织和不接触黏膜的物品入无菌组织和不接触黏膜的物品。一般用后清一般用后清洗洗、消毒即可消毒即可。（四四）快速周转的医疗器械快速周转的医疗器械 （四四）黏膜黏膜的消毒的消毒 （五五）病人排泄物与分泌物的消毒灭菌病人排泄物与分泌物的消毒灭菌 （六六）病人污染物品的消毒病人污染物品的消毒 （七七）饮水的消毒饮水的消毒 （八八）环境的消毒环境的消毒 微生物的种类、物理状态、数量微生物的种类、物理状态、数量 消毒剂的性质、浓度与作用时间消毒剂的性质、浓度与作用时间 温度温度 酸碱度酸碱度 有机物有机物 第四节第四节 影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素 第五节第五节 病原微生物实验室生物安全病原微生物实验室生物安全 生物安全生物安全（biosafetybiosafety）是生物技术安全是生物技术安全（safetysafety ofof biotechnologybiotechnology）的简称的简称。狭义狭义地地指现代生物技术的研究指现代生物技术的研究、开发开发、应应用及转基因生物可能对生物多样性用及转基因生物可能对生物多样性、生态环境生态环境和人类健康产生潜在的危害和人类健康产生潜在的危害。广义广义地地指与生物有关的各种因素对社会指与生物有关的各种因素对社会、经济经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜人类健康及生态环境所产生的危害或潜在风险在风险。病原微生物所致的安全问题病原微生物所致的安全问题，如病原微生如病原微生物实验室的安全隐患物实验室的安全隐患、生物武器生物武器、生物恐怖生物恐怖、重大传染病的暴发流行等重大传染病的暴发流行等，也是人类社会所面也是人类社会所面临的最现实的生物安全问题临的最现实的生物安全问题。病原微生物实验室生物安全的核心是病原微生物实验室生物安全的核心是防扩防扩散散和和防感染防感染。关于关于病原微生物实验室生物安全病原微生物实验室生物安全，我国法我国法令包括对令包括对病原微生物病原微生物的的分类管理分类管理，对对实验室实验室的的分级管理分级管理，实验室感染的控制以及监督和法律实验室感染的控制以及监督和法律责任等责任等。一一、病原微生物的分类病原微生物的分类 根据传染性根据传染性、感染后对个体或者群体的危害感染后对个体或者群体的