粮油检验 小麦粉多酚氧化酶活力的测定 分光光度法 LST 6124-2017.pdf

ICS67.060X11LS中华人民共和国粮食行业标准LS/T6124-2017粮油检验小麦粉多酚氧化酶活力的测定分光光度法Inspection of grain and oils-Determination of polyphenol oxidase activityin wheat flour-Spectro-photometric method2017-10-27发布2017-12-20实施国家粮食局发布LS/T6124-2017粮油检验小麦粉多酚氧化酶活力的测定分光光度法1范围本标准规定了分光光度法测定小麦粉多酚氧化酶活力的原理、试剂、仪器与设备、分析步骤，结果计算和精密度。本标准适用于小麦粉多酚氧化酶活力的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试脸方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件，3.1多酚氧化酶polyphenol oxidase一类含铜的氧化还原酶，催化邻-苯二酚氧化成邻-苯二酿，也能作用于单酚单加氧酶的底物。3.2多酚氧化酶的话力单位polyphenol oxidase activity unit在本标准规定的测定条件下，每克样品每分钟吸光度值变化0.001为1个多酚氧化碍活力单位，以U表示。4原理样品中多酚氧化酶与邻苯二酚氧化反应生成醌，用分光光度计测定410m波长处吸收强度，以此表示多酚氧化酶的活力。5试剂除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682中二级水的规格，5.1邻苯二酚溶液：准确称取1.300g邻苯二酚，用水溶解后，至100mL棕色容量瓶定容，现配现用。5.20.2mo1/1,pH6.0的碱酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液：称取31.2g二水磷酸二氢钠，溶于适量蒸馏水中，稀释至1000mL:称取71.6g十二水磷酸氢二钠，溶于适量蒸馏水中，稀释至1000mL:将87.7mL磷酸二氢纳溶液和12.3mL磷酸氢二纳溶液混合，得到0.2mol/LpH6.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二纳缓冲液。IS/T6124-20176仪器与设备6.1分析天平：感量为0.001g。6.2恒温振荡器。6.3冷冻离心机。6.4分光光度计。7分析步璟用分析天平(6.1)称取1.5g(精确到0.001g)样品，放入50mL锥形瓶中，用10.00mL磷酸二氢纳-磷酸氢二钠缓冲溶液(5.2)混合均匀，加2.00mL邻苯二酚溶液(5.1)，在37恒温振荡器(6.2)中氧化反应15min,迅速放入0冰水中，静置3min终止反应，样液倒入50mL离心管中，冷冻离心机(6.3)(4、10000r/min)离心10min,用定性滤纸过滤，滤液倒入1cm比色皿，用分光光度计(6.4)在410nm下测定其吸光度，以空白溶液调零。8结果计算样品中多酚氧化酶活力按式(1)计算。AX-0.001Xm Xt551n3515n(1）式中：X一样品中多酚氧化酶活力，单位为U:A一吸光度；0.001一活力单位换算系数：一样品质量，单位为克(g):一反应时间，单位为分(min)。测定结果为平行测定的平均值，保留小数点后2位。9精密度9.1重复性在重复条件下测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的5%。9.2再现性在再现条件下测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的10%。2