高效液相色谱法测定碘海醇原料药中的杂质含量_熊先水.pdf

202312本刊特稿1Modern Chemical Research当代化工研究高效液相色谱法测定碘海醇原料药中的杂质含量熊先水1,2 江丹丹1 邢乐2 廖蓉蓉2 肖晶晶2 刘昆明1*（1.江西理工大学材料冶金化学学部 江西 3410002.江西兄弟医药有限公司 江西 332700）摘要：建立了碘海醇API中杂质G和杂质S（同分异构体杂质）的HPLC分析方法。方法：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-Aq型C18柱（4.6250mm，5m），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（4:96），柱温为25，检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，进样量为10L，进样时间为60min。结果：碘海醇杂质G在0.06922.799g/mL的范围内呈线性，碘海醇杂质S在0.01883.852g/mL的范围内呈线性，线性相关系数均大于0.995，检测下限均不高于0.05g/mL。准确度实验表明，两种杂质的平均回收率分别为98.4%和116.4%。供试品溶液在室温放置49h内，两种杂质均十分稳定。不同柱温、流动相、流速及色谱柱条件下，测定结果未见明显差异。结论：本文所建立的高效液相色谱测试方法简单准确、重复性好、灵敏度高，可用于碘海醇原料药中的杂质G和异构体杂质S含量测定。关键词：碘海醇；高效液相色谱；杂质；含量测定中图分类号：R917 文献标识码：ADOI：10.20087/ki.1672-8114.2023.12.001Determination of Impurities in Iohexol API by High Performance Liquid ChromatographyXiong Xianshui1,2,Jiang Dandan1,Xing Le2,Liao Rongrong2,Xiao Jingjing2,Liu Kunming1*(1.Faculty of Materials Metallurgy and Chemistry,Jiangxi University of Science and Technology,Jiangxi,341000 2.Jiangxi Brothers Pharmaceutical Co.,Ltd.,Jiangxi,332700)Abstract：To established a HPLC protocol for the determination of impurities G and S in iohexol.Method:Agilent ZORBAX SB-Aq C18 column(4.6250 mm,5 m)was adopted,with the mobile phase composed of acetonitrile-0.1%phosphoric acid(4:96),and the column temperature was 25.The detection wavelength was 254 nm,and the flow rate was 1.0 mL/min,setting the injection volume as 10 L and the injection time as 60 min.Results:the iohexol impurity G was linear in the range of 0.0692 g/mL to 2.799 g/mL,and the iohexol impurity S was linear in the range of 0.0188 g/mL to 3.852 g/mL,with the linear correlation coefficients were both larger than 0.995,and the limit of detection were all below 0.05 g/mL.The accuracy test showed that the average recoveries of the two impurities are 98.4%and 116.4%,respectively.The two impurities were stable when the test solution was placed at room temperature for 49 h.Changing the column temperature,mobile phase,flow rate,and replacing the chromatographic column exhibited no effect on the detection results of related impurities.Conclusion:The established HPLC method possesses simplicity,accuracy,reproducibility and sensitivity,is suitable for the content detection of impurities G and S in iohexol API.Key words：iohexol；HPLC；impurity；content determination作为一种非离子型X-CT造影剂，碘海醇（Iohexol）的毒性、渗透性和电性均较离子型造影剂更低1-2。这一特点促使碘海醇在临床上广泛用于脑部、胸部及心血管等人体关键部位的造影3-5。碘海醇于1988年 经FDA批准在美国上市。目前，尽管各国药典对碘海醇及其注射液中有关物质的检测方法和限度作出了规定，但由于质控原因导致的不良反应仍时有报 道6-7。近年来，人们尝试了多种分析方法对碘海醇原料药中的杂质含量进行了分析。钟玉莲等8报道了紫外分光光度法测定碘海醇注射液的含量；刘茜等9建立了基于折光率快速测定碘海醇注射液含量的方法；滕南雁等10采用高效液相色谱法测定了碘海醇注射液的含量。此外，Cavalier、Castaget、Faye、Nyssen等11-14也相继报道了人体血清中碘海醇含量的测定。上述报道多集中在体内外碘海醇药物主成分的含量测定，对碘海醇原料及其注射剂中相关杂质的研究尚不多见。王玉等15基于静电场轨道阱技术的质谱法，测定了碘海醇中的O-烷基化和N-烷基化化合物。本研究图1 碘海醇及杂质G、杂质S结构式202312本刊特稿2Modern Chemical Research当代化工研究建立了HPLC法测定碘海醇原料药中的2个有关物质，分别为杂质G和杂质S，结构如图1所示。该HPLC方法重复性高、专属性好，可为碘海醇原料药的质量控制提供参考。1.实验部分(1)仪器赛默飞公司ULIT MATE 3000高效液相色谱仪；安捷伦公司Agilent 1260型高效液相色谱仪；梅特勒公司MS105DU型十万分之一电子分析天平；Sartorius公司MSE3.6P-CE型百万分之一天平。(2)材料碘海醇原料药由江西兄弟医药有限公司提供；碘海醇对照品、杂质I、杂质II、杂质III由中国药品生物制品检定所提供；碘海醇杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质K、杂质R、杂质S购自上海博志研新药物技术有限公司。乙腈、磷酸均为色谱纯，水为去离子水，乙酸为分析纯。2.实验与结果(1)色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq（4.6250mm，5m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（4:96）；流速：1.0mL/min，保持60min：检测器波长：254nm；柱温：25；进样量：10L。(2)溶液配制空白溶液：乙腈-水（80:20）。供试品溶液：取碘海醇原料药约15mg，精密称定置于10mL容量瓶中，用乙腈-水（80:20）稀释至刻度。杂质定位溶液（专属性溶液）：取杂质G约7.5mg，精密称定置20mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度。准确量取上述溶液1mL置于250mL容量瓶，用乙腈-水（80:20）稀释至刻度，为杂质G定位溶液；取杂质S约5.625mg，精密称定置10mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度。准确量取上述溶液1mL置于250mL容量瓶，用乙腈-水（80:20）稀释至刻度，为杂质S定位溶液。杂质I、II、III、F、H、I、K、R定位溶液配制如下：取杂质适量，加乙腈-水（80:20）配制成每毫升含杂质对照品30g溶液，为定位储备溶液。精密量取1mL上述溶液，置20mL容量瓶中，用乙腈-水（80:20）稀释至刻度，为杂质定位溶液。对照品溶液：取杂质G约7.5mg，置20m容量瓶，用去离子水稀释至刻度（储备液1），取杂质S约5.625mg，置10mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度（储备液2）。取储备液1、2 各1mL置25mL容量瓶，用乙腈-水（80:20）稀释至刻度（储备液3）。取1mL储备液3置10mL容量瓶，用乙腈-水（80:20）稀释至刻度，为杂质对照品溶液。系统适用性溶液：取碘海醇对照品约15mg，置10mL容量瓶，加入1mL储备液3，用乙腈-水（80:20）稀释至刻度，为系统适用性溶液。(3)系统适用性实验为了验证HPLC分析系统是否满足测定要求，对碘海醇及两种杂质进行系统适用性实验。精密量取系统适用性溶液50L，连续进样5次。各杂质保留时间、分离度和拖尾因子如表1所示。可见碘海醇峰与杂质S、杂质G峰分离度，以及两种杂质之间分离度均大于1.2，拖尾因子在0.82.0之间。各杂质峰面积RSD（n=5）10.0%，保留时间RSD（n=5）2.0%，回收率在90.0%110%之间。以上结果表明，该测试方法的系统适用性符合要求。表1 系统适用性实验结果化合物峰号tR/min分离度拖尾因子碘海醇杂质G17.9-1.3碘海醇杂质S225.826.61.6碘海醇外异构体328.32.41.2碘海醇内异构体431.02.50.9图2 系统适用性实验图谱(4)专属性实验图3 专属性实验图谱表2 专属性实验结果化合物峰号tR/min分离度乙酸11.4NA碘海醇杂质K21.8NA碘海醇杂质R32.7NA碘海醇杂质G47.426.6/3.7杂质I58.4NA杂质III69.6NA碘海醇杂质H710.7NA202312本刊特稿3Modern Chemical Research当代化工研究化合物峰号tR/min分离度碘海醇杂质F810.7NAO-烷基化合物910.7、11.3、12.3NA杂质II1013.2NA碘海醇杂质I1115.8NA碘海醇杂质S1222.23.9/2.1碘海醇外异构体1324.2NA碘海醇内异构体1426.8NA在碘海醇生产过程中，还可能存在其它杂质如杂质F杂质R。为了考察多种杂质共存下，该HPLC方法能否准确检测杂质G和杂质S，进行了专属性实验。分别取乙腈-水（80:20）、供试品溶液、所有杂质定位溶液（专属性溶液）及系统适用性溶液进样，记录色谱图。专属性实验图谱如图3所示，相关数据见表2。结果表明，空白溶液对专属性溶液中杂质G、杂质S峰保留时间7.4min、22.2min处无干扰。专属性溶液中杂质G、杂质S与相邻峰之间分离度分别为26.6/3.7、3.9/2.1，均大于1.2，在可接受标准范围内。(5)精密度实验重复性按照系统适用性溶液配制方法，配制6份重复性溶液。根据供试品溶液中各杂质的量及供试加标溶液中加入各杂质的量计算回收率，要求6份供试加标溶液中杂质G、杂质S回收率RSD5%，以证实方法具有良好精密度。结果杂质G回收率为98.7%，RSD为4.6%；杂质S回收率为100.2%，RSD为0.0%，这说明测试方法具有良好精密度。中间精密度为了考察测试方法精密度受随机因素的影响情况，由另一名分析人员在不同日期（相隔5天）使用不同仪器（Agilent 1260型和ULIT MATE 3000型高效液相色谱仪），按重复性实验中溶液配制方法，平行配制2份对照品溶液，6份重复性溶液，进行考察。要求两种杂质精密度与重复性共