LC-MS_MS法测定改善...1种非法添加药物的方法验证_吕小丽.pdf

562023 年第 3 期（总第 167 期）LC-MS/MS 法测定改善睡眠类保健品中 21 种非法添加药物的方法验证吕小丽，赵淑娟，周晓晴，熊增星，曾林晖，陈林，蓝伟，唐丽君*（江西省检验检测认证总院食品检验检测研究院，江西南昌，330001）摘 要：目的：根据 GB/T274042008 的评价要求，对 BJS201710 保健食品中 75 种非法添加化学药物的检测中地西泮、硝西泮、氯硝西泮、氯氮卓、奥沙西泮、马来酸咪哒唑仑等 21 种非法添加药物的检测进行方法验证。方法：以改善睡眠类保健品（阿胶远志口服液）基质为例，以 GB/T274042008 为评价依据，主要从线性范围、检出限、定量限、精密度、回收率、基质效应及特异性方面进行方法验证。结果方法选择性良好，线性范围为 0.2ng/mL500ng/mL，检出限范围为 0.017mg/kg0.67mg/kg，定量限范围为0.05mg/kg2.0mg/kg，回收率范围为 86.96%109.13%，精密度范围为 0.53%11.62%，各验证指标均满足 GB/T274042008 中的要求。结论：经验证，其线性范围、检出限、定量限、精密度及回收率均满足该标准的要求，可以利用该方法进行改善睡眠类保健品中 21 种非法添加药物的检测。关键词：LC-MS/MS；改善睡眠类保健品；非法添加药物；方法验证中图分类号：O657.63；TS218 文献标志码：A 文章编号：1008-3103（2023）03-0056-08Method Validation of Determination of 21 Illegally Added Drugs in Sleep-improving Health Products by High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry LvXiao-li，ZhaoShu-juan，ZhouXiao-qing，XiongZeng-xing，ZengLin-hui，ChenLin，LanWei，TangLi-jun*（FoodInspectionandTestingInstituteofJiangxiGeneralInstituteforInspection，TestingandCertification，NanchangJiangxi330001，China）Abstract：Objective:AccordingtotheevaluationrequirementsofGB/T274042008，thedeterminationof21illegallyaddeddrugsincludingDiazepam，Nitrazepam，Clonazepam，Chlordiazepoxide，Oxazepam，Midazolaminthemethodof“BJS201710Detectionof75illegallyaddedchemicaldrugsinhealthfoods”weretestedformethodverification.Methods:Thisarticletakedthematrixofsleep-improvinghealthcareproducts（EjiaoYuanzhiOralLiquid）asanexample，basedonGB/T274042008，themethodwasvalidatedmainlyintermsoflinearrange，detectionlimit，quantificationlimit，precision，recoveryrate，matrixeffectandspecificity.ResultsThemethodhasgoodselectivity，linearrangewas0.2ng/mL500ng/mL，detectionlimitrangewas0.017mg/kg0.67mg/kg，quantificationlimitrangewas0.05mg/kg2.0mg/kg，recoveryrangewas86.96%109.13%，precisionrangewas0.53%11.62%，allverificationindicatorsmeettherequirementsofGB/T274042008.Conclusion:Throughthetest，itwasfoundthatthelinearrange，detectionlimit，quantificationlimit，recoveryrateandprecisionmeettherequirementsofthestandard.Themethodcanbeusedtodetect21kindsofillegallyaddeddrugsinsleep-improvinghealthproducts.Keyword：LC-MS/MS；sleep-improvinghealthcarefoods；illegallyaddeddrugs；methodvalidation作者简介：吕小丽（1985），女，江西上饶，硕士，工程师，主要研究方向为食品安全检测；通讯作者：唐丽君（1981），女，高级工程师，主要研究方向为食品安全检测管理。DOI:10.14127/ki.jiangxihuagong.2023.03.026572023 年 6 月LC-MS/MS 法测定改善睡眠类保健品中 21 种非法添加药物的方法验证0 引言随着现代生活节奏的不断加快，生活压力的不断增大，失眠人群逐年增加，有些人为了追求好的睡眠质量往往会选择一些催眠类药物，但是长期服用催眠类药物，会产生很多副作用4，5。因此，人们往往会退而求其次选择改善睡眠的保健品。但是，有些不法分子在高利润的驱使下向保健品中添加安眠类的药物来增加效用，因此近年来国家加大了对保健食品的监管力度，增大了保健食品的监督抽查比例6。目前针对保健品非法添加的检测方法主要有液相色谱法7，8、HPLC-MS/MS 法9，10、高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法11，12、离子迁移谱技术13，14等，已经发布的标准方法主要有原国家食药局相继出台的对应的补充检验方法和检验项目的批准件，分别为 2013002、2012004和 200902415-17，以及食品补充检验方法保健食品中75 种非法添加化学药物的检测（BJS201710）18中涵盖的改善睡眠类保健食品中需要检测的非法添加化学物质，本实验室对保健食品中 75 种非法添加化学药物的检测（BJS201710）中改善睡眠类保健食品的 21 种非法添加化学物质进行方法验证。本文以改善睡眠类保健品（阿胶远志口服液）基质为例，以实验室质量控制规范 食品理化检测（GB/T274042008）19为评价依据，主要从线性范围、检出限、定量限、精密度、回收率、基质效应及特异性方面进行方法验证，通过具体例子给出方法验证的操作步骤及各指标的评价方法，有助于实验人员更好地理解和认识方法验证，并为其开展方法验证工作提供一些参考。为了保障实验结果的准确性和有效性，实验室在进行检测活动时，有很多需要控制的关键要素，其中检验方法的控制是其中的关键环节。检测和校准实验室能力认可准则（CNASCL012018）中提到，验证是指提供客观证据，证明给定项目满足规定要求。同时提出实验室应在新方法引入前，验证本实验室能够正确运用该方法，同时确保实现所需的方法性能1。同样检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求（RB/T2142017）、合格评定化学分析方法确认和验证指南（GB/T 274172017）等多个标准都对实验室在新方法引入前需要进行方法验证提出了要求2-3。因此，实验室在使用标准方法前，需要对本实验室使用标准方法的技术能力是否达标进行验证。1 材料与方法1.1 材料与试剂地西泮等 21 种标准物质信息见表 1 所示。甲醇、乙腈（色谱纯，西班牙Scharlau公司）；甲酸、乙酸铵（色谱纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；实验用水为超纯水。表 1 21 种标准品信息序号标准品名称生产商浓度/纯度批号1地西泮StanfordChemicals1000g/mLLY180115-082硝西泮LGCStandards0.1mg/mL94353氯硝西泮StanfordChemicals1000g/mLLT180110-104氯氮卓StanfordChemicals1000g/mLCL160724-185奥沙西泮StanfordChemicals1000g/mLCL160628-066马来酸咪哒唑仑StanfordChemicals1000g/mLCE160429-117劳拉西泮StanfordChemicals1000g/mLCL161006-168艾司唑仑StanfordChemicals1000g/mLLT181112-069阿普唑仑StanfordChemicals1000g/mLCL160711-0810三唑仑StanfordChemicals1000g/mLCR160829-0311巴比妥StanfordChemicals98.5%XY161015-1312苯巴比妥Firststandard100g/mLALT02900513异戊巴比妥Firststandard100g/mLALT02900714司可巴比妥StanfordChemicals1000g/mLSL160928-1615氯美扎酮StanfordChemicals99.92%TC160316-0916佐匹克隆StanfordChemicals99.48%ML180402-0817氯苯那敏StanfordChemicals99.7%ML170906-1718扎来普隆中国食品药品检定研究院99.8%100670-0160219文法拉辛StanfordChemicals99.76%AL180422-0720青藤碱中国食品药品检定研究院98.89%110774-0050721罗通定StanfordChemicals99.53%ML191107-11582023 年第 3 期（总第 167 期）1.2 仪器和设备液相色谱-质谱/质谱仪，配备电喷雾离子（ESI）源（Agilent6470，Agilent 公司）；G-16 离心机（德国Sartorius 公司）；VortexWizard 涡旋仪（意大利 VELP 公司）；超声波清洗器（上海昆山超声仪器有限公司）；电子天平，感量为 0.0001g（德国赛多利斯公司）；超纯水系统（美国 Millipore 公司）。1.3 标准溶液1.3.1 标准储备液的配制分别称取表 1 中的标准品约 10.00mg，于 10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀后作为标准储备液。1.3.2 混合标准溶液的配制取上述标准储备液适量，用流动相稀释至地西泮、硝西泮、氯硝西泮、氯氮卓、奥沙西泮、马来酸咪哒唑仑、劳拉西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑、佐匹克隆、氯苯那敏、扎来普隆、文法拉辛、青藤碱和罗通定浓度为 1g/mL 的混合标准溶液 A，巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥浓度为 100g/mL，氯美扎酮浓度为 10g/mL 的混合标准溶液 B。1.4实验方法1.4.1 样品处理准确称取样品 1g（精确至 0.0001g），于 100mL 容量瓶中，加入 6070mL 甲醇，超声提取 15min，冷却至室温后用甲醇定容至刻度，5000r/min 离心 5min，上清液经 0.22m 有机微孔滤膜过滤，取续滤液作为待测液。1.4.2 液相条件色谱柱：AgilentEclipsePlusC18 柱，1.8m，2.1100mm；流动相：A 相为 0.1%甲酸-10mmol/L 乙酸铵，B相为乙腈，梯度洗脱程序如表2所示；柱温：40；流速：0.3mL/min；进样量：5L。表 2 参考梯度洗脱程序