弓形虫病诊断技术 NYT 573-2002.pdf

NY/T573-20023间接血凝试验(IHA试验)3.1材料准备3.1.196(128)孔110V形有机玻璃反应板，100L微量加样器，振荡器，医用离心机，移液管等。3.1.2弓形虫诊断制剂(IHA抗原)，稀释液，阳性、阴性血清。3.2操作方法3.2.1弓形虫诊断制剂按瓶上标示毫升数加人灭菌蒸馏水稀释摇匀，1500r/min2000r/min离心5min10min,弃上清液，加等量稀释液摇匀，置4下静置24h后使用。3.2.2采被检疫动物或人的血液2mL2.5mL,分离血清（应无血球）。3.2.3用微量加样器往96孔有机玻璃反应板每孔加75L稀释液。每个样品加4孔。每块板设阳性、阴性血清对照。对照均加8孔。3.2.4往各组第1孔加25L的被检血清，或阳性血清，或阴性血清。3.2.5用加样器对每组进行1：4系列稀释，被检血清组稀释至第3孔，阳、阴性对照组稀释至第7孔。被检血清组第4孔，阳、阴性对照组第8孔为稀释液（见表1）。表1各组各孔的稀释度孔号12346(第一组)(另一组)被检血清组1664稀释液对照16644阴性对照组16642561024409616384稀释液对照阳性对照组16642561024409616384稀释液对照3.2.6将准备好的诊断液摇匀，用移液管加25L诊断液于每孔中。加完后将反应板置微型振荡器上振荡1min2min,直至诊断液中的血球分布均匀，从振荡器上取下反应板，用干净的玻璃板或纸板盖住反应板，以防灰尘落人，置2237C静置2h3h后观察结果3.3判定在阳性对照血清滴度不低于1：1024（第5孔）：阴性对照血清除第1孔允许存在前滞现象(+)外，其余各孔均为（一）：稀释液对照为（一）的前提下，对被检血清进行判定，否则应重做。间接血凝试验的判定标准如下：“十十十+”：100%红细胞在孔壁下部呈均质的膜样凝集。边缘整齐，致密。因重力关系，膜样凝集的红细胞有时出现下滑现象。“+十十”：75%的红细胞在孔壁下部呈膜样凝集，不凝集的红细胞在孔底中央集中成很小的圆点。“+十”：50%的红细胞在孔壁更下部呈稀疏的凝集，不凝集的红细胞在孔底中央集中成较大的圆点。“十”：25%的红细胞在孔底凝集，其余不凝集的红细胞在孔底中央集中成大的圆点。“一”：所有的红细胞均不凝集，并集中于孔底中央呈规则的最大的圆点。被检血清第3孔(1：64稀释)达到“+十”或以上，将被检样品判为阳性。被检血清第3孔(1：64稀释)为“十”或“一”，将被检样品判为阴性。2