医疗器械免疫原性评价方法 第5部分：用M86抗体测定动物源性医疗器械中α-Gal抗原清除率 YYT 1465.5-2016.pdf

YY/T1465.5-2016前言YY/T1465医疗器械免疫原性评价方法，分为以下部分：一第1部分：体外T淋巴细胞转化试验：一第2部分：血清免疫球蛋白和补体成分测定ELISA法；一第3部分：空斑形成细胞测定琼脂固相法，一第4部分：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验半体内法：一第5部分：用M86抗体测定动物源性医疗器械中a-Gl抗原清除率。本部分为YY/T1465的第5部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家食品药品监督管理总局提出。本部分由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会(SAC/TC248)归口，本部分起草单位：山东省医疗器械产品质量检验中心、四川医疗器械生物材料和制品检验中心、军事医学科学院野战输血研究所、烟台正海生物技术有限公司。本部分起草人：孙晓霞、刘成虎、袁瞰、杨晓琴、高红伟、宫锋、陆美娇、张东刚。YY/T1465.5-20165.1.3包被液（碳酸盐缓冲液，pH9,6),5.1.4市售小鼠M86抗体。5.1.5抗小鼠标记二抗。5.1.6市售a-Ga-BSA。5.2仪器和设备5.2.1酶标仪。5.2.2低温高心机。5.2.3震荡器。5.2.4高精度天平(0.0001g)。6试验步骤6.1试验样品处理样品处理方法宜确保-Gl抗原充分茶露，同时避免其被过度破坏。推荐经处理后的样品粒径分布范围为(0m90m)。附录B中给出了不同类型样品处理的实例。注1：动物源性生物材料以胶原纤维等结构蛋白为主要组成成分，试验者宜采用适宜的样品制备方法以确保试验样品中的Ga抗原充分暴露，注2：每份样品设平行样3份，最终测定结果取其平均值，注3：可以根据委托方的要求，取不同批号或同一北号的样品3份，用以评价不同批次或同一批次内的工艺稳定性。6.2试验系统对照品制备6.2.1总则考虑到本标准中的方法受多种因素的影响，试验前宜采用适当的对照品对试验体系的合理性进行验证，推荐使用小鼠骨髓馏(SP2/0)细胞或兔红细胞(RRBC)。如选用其他对照品，宜对其有效性进行确认。6.2.2SP2/0细胞SP2/0(ATCCCRL-1581T)是由绵羊红细胞免疫的BALB/c小鼠的脾脏B细胞和小鼠骨髓瘤细胞逊合得到，不分泌免疫球蛋白。用RPM1640完全培养基培养至生长状态良好，调整细胞浓度至110个/mL备用。6.2.3 RRBC6.2.3.1推荐使用未进行过试验的健康新西兰家兔，SPF级。如选用其他品系家兔，宜对其适宜性进行说明。取血前应将动物至少饲养5d以适应实险室环境。所有的动物试验应在经国家认可机构批准并符合实验室动物福利全部适用法规的实验室内进行，并且还应符合GB/T16886.2的要求。6.2.3.2取新鲜家兔全血20mL,加入含玻璃珠的锥形瓶中振摇10min,除去纤维蛋白。加入0.9%氯化纳溶液约10倍量，摇匀，2000r/min高心5min,除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成110？个/mL,4保存备用。