动物炭疽诊断技术 NYT 561-2002.pdf

ICS 11.220B41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T561-2002动物炭疽诊断技术Diagnostic techniques for animal anthrax2002-08-27发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T561-2002动物炭疽诊断技术1范围本标准规定了动物炭疽杆菌分离培养鉴定及血清学试验方法。本标准适用于各种动物炭疽病的诊断及检疫。2新鲜疑似炭疽病料标本的细菌学检查2.1显微镜检查2.1.1材料准备2.1.1.1器材恒温箱、显微镜、高压灭菌器、煮沸消毒器、漏斗、15mm150mm试管、最小反应管、移液管、带胶乳头的毛细吸管（或血清加样器）、乳钵、中性石棉、5mL注射器、外科刀、镊、铂金耳、酒精灯等。2.1.1.2培养基戊烷脒多粘菌素血液琼脂平板、碳酸氢钠琼脂平板、快速增殖肉汤、普通营养肉汤、普通营养琼脂平板、2%绵羊血液琼脂平板、2%兔血清琼脂平板等，配制方法见附录A。2.1.1.3试剂炭疽沉淀素血清、阴性血清、标准炭疽杆菌抗原、炭疽荧光抗体、炭疽噬菌体。2.1.1.4溶液及染色液克氏固定液、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、缓冲甘油、0.5%苯酚（俗名石炭酸）溶液、福尔马林龙胆紫染色液、碱性美蓝染色液、革兰氏染色液，配方见附录B。2.1.1.5实验动物体重17g20g清洁级昆明系小鼠。2.1.2病料标本采集疑为炭疽动物，除慢性者外，其他不论是最急性者或急性者均于生前将耳部消毒后取血液，病变部取水肿液或渗出液等直接涂于载玻片上，自然干燥后，将玻片涂面相对叠好，中间用火柴杆隔开，以线捆扎，外用塑料纸包好。或用灭菌脱脂棉、滤纸、布片吸取血液等放于小试管中，待检。死后，自消毒的耳根部或四肢末端部采取血液滴于玻片上；或用细绳在耳根部紧扎两道，在两绳之间将耳割下，以5%苯酚溶液（见第B.8章）浸湿的棉布包好，放广口瓶中待检，耳切口处用烧红的烙铁烧灼止血。已经错剖的疑似炭疽动物尸体，可取肝、脾、肾等脏器置于试管中，待检。上述涂片自然干燥，火焰固定，如涂片较薄，也可用无水甲醇或乙醇固定，然后用下述染色法染色镜检。2.1.3雷比格尔(Rabiger)氏膜染色法2.1.3.1操作方法滴加0.5mL1.0mL福尔马林龙胆紫染色液（见第B.5章）于涂抹面上，染色2s5s,水洗（冲洗水用次氯酸盐溶液消毒，余同)、干燥、镜检。2.1.3.2结果观察粗大菌体呈竹节状排列，染成深紫色，菌体周围的荚膜染成淡紫色。l