转基因植物及其产品检测 DNA提取和纯化 NYT 674-2003.pdf

ICS65.020.99B20NY中华人民共和国农业行业标准NY/T674-2003转基因植物及其产品检测DNA提取和纯化Detection of genetically modified plant organisms andderived products-DNA extraction and purification2003-04-01发布2003-05-15实施中华人民共和国农业部发布NY/T674-2003转基因植物及其产品检测DNA提取和纯化1范围本标准规定了转基因植物及其产品中DNA提取和纯化的方法和技术要求。本标准适用于转基因植物及其产品中DNA的提取和纯化。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求NY/T673转基因植物及其产品检测样3原理通过物理和化学方法使DNA从样品的不同组分中分离出来。利用不同的纯化方法，弃除样品中的蛋白质、脂肪、多糖及其他次生代谢物，及DNA提取过程中加入的三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、乙醇和乙酸钠等，获得纯化的DNA。4试剂与溶液除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂；配制好的溶液经高温灭菌后使用。4.1溴代十六烷基三甲胺(cetyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)。4.2三甲基氨基甲烷tris(hydroxymethyl)aminomethane,Tris4.3 二乙二胺四乙酸二钠(ethylenediamine tetraacetic acid,disodium salt,dihydrate,EDTA-Na2H2O)。4.4 E-基乙醇(E-mercaptoethanol)。4.5三氯甲烷(chloroform)。4.6异(isoamyl alcohol)。4.7(isopropyl alcohol)。4.8三氯甲烷十异戊醇=24+1（体积比）。4.976%乙醇溶液：取760mL无水乙醇，加水定容至1L。4.1070%乙醇溶液：取700mL无水乙醇，加水定容至1L。4.11CTAB提取缓冲液I:配制每升CTAB提取缓冲液I,应在800mL去离子水中加入46.75g氯化钠，摇动容器使溶质完全溶解，然后加入50mL1mol/L Tris-HCl(pH8.0)在800mL去离子水中溶解121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tris),冷却至室温后用浓盐酸调节溶液的pH值至8.0（约需42mL浓盐酸)，加水定容至1L,分装后高压灭菌，20 mL0.5 mol/L EDTA(pH8.0)在800mL水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用氢氧化钠(NaOH)1