饲料中盐酸克仑特罗的测定 NY 438-2001.pdf

1Cs65.120B40NY中华人民共和国农业行业标准NY438-2001饲料中盐酸克仑特罗的测定Determination of clenbuterol hydrochloride in feed2001-02-12发布2001-05-01实施中华人民共和国农业部发布NY438-20013.2.8.2SPE淋洗液3.2.8.2.1淋洗液-1：含2%氨水的5%甲醇水溶液。3.2.8.2.2淋洗液-2：含2%氨水的30%甲醇水溶液。3.2.9HPLC专用试剂3.2.9.1HPLC流动相：1mL1：1膦酸（优级纯）用实验室二级水稀释至1L,并按100：12的比例和乙腈(3.2.2)混合，用前超声脱气5min。3.2.9.2盐酸克仑特罗标准溶液3.2.9.2.1储备液：200g/mL:10.00mg盐酸克仑特罗（含C1zH1Cl2N,0HCl不少于98.5%）溶于0.02mol/L盐酸溶液并定容至50mL,储于冰箱中。有效期1个月。3.2.9.2.2工作液，2.00g/mL:用微量移液器移取储备液500L,以0.02mol/L盐酸溶液稀至50mL,储于冰箱中。3.2.9.2.3标准系列：用微量移液器移取工作液(3.2.9.2.2)25、50、100、500、1000L,以0.02mol/mL盐酸溶液稀释至2mL,该标准系列中盐酸克仑特罗的相应浓度分别为：0,025、0.050、0.100、0.500、1.00g/mL,储于冰箱中。3.3仪器、设备3.3.1实验室常用仪器、设备。3.3.2分析天平：感量0.0001g:感量0.00001g:3.3.3超声水浴。3.3.4离心机：能达4000r/min,3.3.5分液漏斗：150mL。3.3.6电热块或沙浴：可控制温度在(50土5)。3.3.7烘箱：温度可控制在(70士5)。3.3.8高效液相色谱仪：具有Cw柱4um(如150mm3.9mmD)或类似的分析柱和UV检测器或二极管阵列检测器。3.4样品的制备取具代表性的饲料样品，用四分法缩诚分取200g左右，粉碎过0.45mm孔径的筛，充分混匀，装人磨口瓶中备用。3.5分析步骤3.5.1提取：称取适量试样（配合饲料5g,预混料和浓缩料2g)精确至0.0001g,置于100mL三角瓶中，准确加入提取液(3.2.3)50mL,振摇使全部润湿，放在超声水浴中超声提取15min,每5min取出用手振摇一次。超声结束后，手摇至少10s,并取上层液于离心机上4000r/min下离心10min。3.5.2净化：准确吸取上清液10.00mL,置150mL分液漏斗中滴加氢氧化钠溶液(3.2.4)，充分振摇，调pH至1112，该过程反应较慢，放置35min后，检查pH,如pH降低，需再加碱调节。溶液用30、25mL乙醚萃取两次，令醚层通过无水疏酸钠干燥，用少许乙醚淋洗分液漏斗和无水硫酸钠，并用乙醚定容至50mL.准确吸取25.00mL于50mL烧杯中，置通风橱内、低于50加热块或沙浴(3.3.6)上蒸干，残渣溶于2.00mL盐酸溶液(3.2.7)，取1.00mL置于预先已分别用1mL,甲醇和1mL去离子水处理过的SPE小柱上，用注射器稍稍加压，使其过柱速度不超过1mL/mi,再先后分别用1 mLSPE淋洗液-1(3.2.8.2.1)和淋洗液-2(3.2.8.2.2)淋洗，最后用甲醇洗脱，洗脱液置(70士5)加热块或沙浴上，用氨气吹干。3.5.3测定3.5.3.1于净化、吹干的样品残渣中准确加入1.002.00mL盐酸溶液(3.2.7)，充分振摇，超声，使残渣溶解，必要时过0.454m的滤膜，清液上机测定，用盐酸克仑特罗标准系列(3.2.9.2.3)进行单点或多点校准。2