乙型肝炎标志物检测及质量控制.pptx

1,乙肝血清标志物检测及质量控制,关秀茹哈尔滨医科大学附属第一医院检验科 E-mail:guanxiuru0451sohu Tel:0451-85553849,第一页，共九十三页。,2,主要内容,乙型肝炎病毒标志物检测质量控制,室间质量评价EQA,室内质量控制IQC,第二页，共九十三页。,3,Dane particle,小球形颗粒,管状和线状颗粒,HBV ParticlesElectron micrograph,Hepatitis B Virus,第三页，共九十三页。,4,HBV为DNA病毒，球形颗粒，结构包括外壳蛋白HBsAg，前S1、前S2和核心颗粒HBeAg，HBcAg，DNA聚合酶。,乙型肝炎病毒标志物检测,第四页，共九十三页。,5,Geographic Distribution of Chronic HBV Infection,全球约有20亿人曾感染过乙肝其中3.5亿人为慢性HBV感染者每年约有100万人死于HBV感染所致得肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。,第五页，共九十三页。,6,Hepatitis B Virus,Sources:WHO/CSR/LYO/2002:Hepatitis B CDC,1992年流行病学调查结果我国HBV感染率为：57.6%HBsAg携带者：9.75%,1.2亿我国慢性乙肝病人：2000万,采取措施乙型肝炎疫苗是最有效的防止HBV感染的方式,2006年流行病学调查我国1-59岁人群HBsAg携带率为7.18%，5岁以下儿童的HBsAg仅为0.96%。,第六页，共九十三页。,7,人群HBsAg携带率下降,第七页，共九十三页。,8,血清标志物检测,经典乙肝“两对半乙肝外表抗原(HBsAg)：最早出现在血液中的病毒抗原乙肝外表抗体抗HBs：中和或保护抗体乙肝e抗原HBeAg：第二个出现在血液中的病毒抗原乙肝e抗体抗HBe乙肝核心抗体抗HBc、抗HBcIgM：最早出现在血液中的抗体IgM,乙肝病毒前S1、S2抗原及抗体乙肝病毒大蛋白,第八页，共九十三页。,9,第九页，共九十三页。,10,HBsAg的发现,1964年Blumberg39岁用琼脂扩散法immunodiffusion,ID，从1名澳大利亚土著输血患者血清中发现一种特殊抗原Bull NY Acad Med 1964;40:377-3861967年Blumberg42岁报告，从Down综合征、白血病和肝炎患者血清中也发现该抗原Ann Int Med 1967;66:924-931,第十页，共九十三页。,11,HBsAg的发现,1970年 Blumberg45岁报告澳大利亚抗原是肝炎病毒1972年正式命名为HBsAg1976年荣获诺贝尔生理学和医学奖51岁2022年逝世，享年86岁,Baruch Blumberg,第十一页，共九十三页。,12,HBV感染后绝大多数感染者外周血中可出现HBsAg，含 量在5ng600g/ml之间。最低含量为0.2 ng/ml以下，高者可达2000g/ml以上。HBV的前S/S基因编码HBsAg，构成病毒外膜，根据所 带亚型决定簇的不同分为adw、adr、ayw和ayr。我国绝 大多数地区以adr为主，adw次之。HBsAg不仅存在于血液中，而且还存在于许多体液和 分泌物中，如唾液、尿液、乳汁、精液等。,乙肝病毒外表抗原 HBsAg,第十二页，共九十三页。,13,鉴别乙型肝炎与其他病毒性肝炎,病毒性肝炎,HBsAg阴性,HBsAg阳性,其他病毒性肝炎,乙型肝炎,乙肝病毒外表抗原的应用,第十三页，共九十三页。,14,鉴别急性与慢性HBV感染,急性乙型肝炎感染6个月,Weeks after Exposure,Symptoms,HBeAg,anti-HBe,Total anti-HBc,IgM anti-HBc,anti-HBs,HBsAg,0,4,8,12,16,20,24,28,32,36,52,100,Titer,CDC,第十四页，共九十三页。,15,Weeks after Exposure,Relative Concentration of Reactants,IgM Anti-HBc,Total Anti-HBc,HBsAg,Acute(6 months),HBeAg,Chronic(Years),Anti-HBe,0,4,8,12,16,20,24,28,32,36,52,Years,HBV DNA,Limit of Detection,慢性乙肝感染6个月,第十五页，共九十三页。,16,HBsAg 检测方法进展,琼脂扩散 反向血凝 时间分辨 对流免疫电泳 放射免疫 酶联免疫 或化学发光,第十六页，共九十三页。,17,HBV自然感染史,第十七页，共九十三页。,18,感染乙肝病毒2-11周后血清开始出现HBsAg，之后出现转氨酶异常和临床病症。1HBsAg定性检测阳性：见于急性乙肝患者，慢性乙肝患者，无病症乙肝病毒携带者。,HBsAg的临床意义,第十八页，共九十三页。,19,2 HBsAg定量检测-老指标新意义 参考值：0-0.05IU/mL 临床意义：可作为HBV携带者乙肝病毒复制的参考指标评价拉美呋定的治疗效果监测应用-干扰素治疗病人的乙肝病毒复制确定肝移植病人免疫球蛋白的使用剂量对患者的应答情况进行预测对接受治疗患者的免疫控制 HBsAg 转阴结局进行预测。,第十九页，共九十三页。,20,HBsAg定量检测的临床应用-作为HBV携带者乙肝病毒复制的参考指标,HBeAg 是反映病毒复制的指标,并且HBeAg转阴通常是预示着HBV DNA水平降低到低于105 copies/ml的标志。然而，一局部HBeAg阴性但是HBV DNA仍然保持较高的滴度(106copies/ml)。HBsAg and HBV DNA 水平有较高的显著性相关.作为一种替代检测，HBsAg的定量检测能够准确地预测HBV的复制。HBsAg高于15000IU/ml可能反响HBV DNA处于较高水平的滴度以及HBeAg处于阳性的状态。如果HBsAg 滴度在1600 至15000IU/ml之间，应该考虑检测HBV DNA。,第二十页，共九十三页。,21,HBsAg定量检测的临床应用-评价拉美呋定的治疗效果,当出现YMDD 突变出现的时候,通常在生化指标出现异常之前血清HBsAg 浓度和HBV DNA滴度增加。在YMDD突变出现之后，血清 HBV DNA 持续升高,然而HBsAg的增加是瞬时的,与ALT的升高相似。(A)在大局部病人中,血清HBsAg的增加是由于HBVDNA的增加.然而在某些病人中,血清HBsAg在HBV DNA增加几个月之前便增加。(B).除了监测HBV DNA 水平之外，同时监测血清HBsAg浓度或许能够有利于较早地发现在拉美呋定治疗中的耐药突变。,第二十一页，共九十三页。,22,HBsAg定量检测的临床应用-监测应用a-干扰素治疗病人的乙肝病毒复制,量化评估乙肝病毒外表抗原的出现是大有应用前景的，因为该方法是一简单而廉价的方法，可以用于慢性乙型肝炎患者接受干扰素治疗时监测病毒复制的指标。,第二十二页，共九十三页。,23,乙肝病人肝移植后使用乙肝免疫球蛋白可以有效地防止再感染的发生。HBsAg降低至1IU/ml以下时，HBsAg和HBIG的呈高度相关r=0.97,r=1.00；Anti-HBs升高至大于1000IU/L时，HBsAg和HBIG的呈高度相关r=0.94,r=1.00。在移植期间，用于降低HBsAg 增加anti-HBs 的HBIG 的剂量取决于HBsAg的水平而不是HBV DNA 水平。,HBsAg定量检测的临床应用-确定肝移植病人免疫球蛋白的使用剂量,第二十三页，共九十三页。,24,对患者的应答情况进行预测,2022年，Sonneveld等研究结果说明：HBeAg+患者，用干扰素治疗12周时HBsAg未下降的患者中97%为无应答，且最终无一例获得HBsAg转阴。因此认为治疗12周时HBsAg无下降的患者获得持续病毒应答SVR的几率非常小，同时不大有HBsAg转阴的时机，所以临床医生可以根据12周时患者的HBsAg降低情况来决定是否继续接受治疗。,第二十四页，共九十三页。,25,对患者的应答情况进行预测,干扰素治疗HBeAg+乙肝患者12周时HBsAg水平是今后HBsAg去除的预测指标治疗12周时HBsAg无下降20000IU/ML可预测低应答，可作为停药规那么。治疗过程中HBsAg无下降，复发率高。治疗12周时HBsAg明显下降20000IU/ML可预测高应答，治疗效果较好，继续用药，完成疗程。,第二十五页，共九十三页。,26,对患者的应答情况进行预测,干扰素治疗HBeAg-慢性乙肝患者，12周时无HBsAg下降、HBV-DNA下降2Log cp/mL，可作为停药指标治疗12周时HBsAg下降 1500IU/mL，HBV-DNA下降2Log cp/mL，血清型转换为0%，可作为停药规那么。,第二十六页，共九十三页。,27,用核苷类似物治疗慢性乙肝时HBsAg下降模式与HBsAg长期去除有关,HBsAg被去除的患者可能停药快速下降HBsAg1Log1年内下降，3年时HBsAg消失在25%。缓慢下降HBsAg1Log1年内下降，3年时HBsAg消失在1.4%。稳定，无变化，3年时HBsAg消失在0%。HBsAg消失患者的HBsAg 呈快速和持续下降。,第二十七页，共九十三页。,28,对接受治疗患者的免疫控制 HBsAg 转阴结局进行预测,2022年Heathcote等研究结果说明，与所有患者的总体水平相比，发生HBsAg转阴患者的HBsAg水平在治疗期间明显下降，而HBV DNA水平那么无明显差异。这说明通过HBsAg定量检测提前预测患者获得免疫去除的可能性，从而提高患者的治疗信心和疗效。Wursthorn等在2022年研究结果显示，口服抗病毒治疗中，HBsAg的水平下降尤其是迅速下降与HBsAg去除密切相关，认为HBsAg去除的患者可以考虑停止治疗。,第二十八页，共九十三页。,29,HBsAg去除和血清学转换是理想的治疗终点,持久免疫控制是到达HBsAg去除的重要条件,HBsAg下降HBVDNA抑制,治疗中,持久免疫控制,HBsAg去除,减少肝硬化和肝癌，提高存活率,第二十九页，共九十三页。,30,HBsAg去除和血清学转换是理想的治疗终点,HBsAg血清转换可作为持久免疫控制指标,即使使用高敏度试剂测不到HBVDNA并不表示无循环的HBV和/或HBV感染已去除,时点评价病毒载量可作为抗病毒治疗有效和持续应答,HBsAg定量检测可确定宿主免疫系统是否已有效控制HBV感染,第三十页，共九十三页。,31,HBsAg检测在个体化卫生保健中的作用,第三十一页，共九十三页。,32,HBsAg测定中可能存在的挑战：假阴性,HBsAg含量低于所用方法的测定下限之下。如感染的“窗口期、急性期后或恢复期、自限性感染末期的携带者等编码HBsAg的HBV-S基因的突变HCV/HDV重叠感染对HBV复制和/或HBsAg的表达的抑制作用 测定方法所用抗体对HBV不同基因型检测敏感性的不同钩状效应HOOK EFFECT,第三十二页，共九十三页。,33,HBsAg的变异所致的不常见的HBV标志物模式或不一致的结果,单独抗HBc阳性。HBsAg阴性但HBeAg阳性。HBsAgHBeAg和抗HBs大多为100IU/ml的低滴度同时存在。使用不同厂家的HBsAg试剂盒得到的不一致结果。,第三十三页，共九十三页。,34,抗-HBs是HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，是一种保护性抗体，能中和HBV，初感染2-6月出现。抗-HBs阳性见于HBV既往感染者，乙肝恢复期及乙肝疫苗免疫后。,乙肝病毒外表抗体HBsAb,第三十四页，共九十三页。,35,乙肝病毒外表抗体HBsAb 抗-HBs定量测定：1抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保护性，需要注射乙肝疫苗3针：0-1-6方案。2抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示