细胞生物学实验课件第一页，共六页。实验三植物细胞骨架的光学显微镜观察一.实验目的1.掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色的方法。2.通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。二.实验原理细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大局部蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。第二页，共六页。三.实验用品1.材料：洋葱2.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯药品：pH6.8的磷酸缓冲液；M-缓冲液：50mmolL-1(PH6.7)咪唑、50mmolL-1KCl、0.5mmolL-1MgC12、1mmolL-1EGTA、0.1mmolL-1EDTA、1mmolL-1巯基乙醇、4mmolL-1甘油、1mmolL-1HCl调pH至7.2；1%Triton-X100:用M-缓冲液配制；3%戊二醛：用pH6.8的磷酸缓冲配制；0.2%考马斯亮蓝R250染液：0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、7ml冰醋酸、46.5ml蒸馏水。第三页，共六页。四.实验方法步骤1.撕取洋葱鳞茎内表皮1cm2假设干片，置于小烧杯中。2.用磷酸缓冲液〔pH6.8〕提前浸泡2小时左右。3.吸去磷酸缓冲液，用1%TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。4.吸去TritonX-100，用M-缓冲液洗2次，每次5分钟。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。5.用3%戊二醛固定0.5～1h。6.用磷酸缓冲液〔pH6.8〕洗2次，每次5分钟。7.考马斯亮蓝R250染色30分钟。8.蒸馏水洗2次。9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。五.实验报告1.绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。2.说明实验过程中各步骤处理的作用。第四页，共六页。细胞骨架第五页，共六页。内容总结细胞生物学实验课件。2.通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运。本试验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的。2.用磷酸缓冲液〔pH6.8〕提前浸泡2小时左右。9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。1.绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。细胞骨架第六页，共六页。
