拷贝数变异测序在稽留流产遗传学检测中的应用_覃颖.pdf

海南医学2023年4月第34卷第8期Hainan Med J,Apr.2023,Vol.34,No.8拷贝数变异测序在稽留流产遗传学检测中的应用覃颖1，毛锦江1，钟文富2贵港市人民医院产科1、检验科2，广西贵港537100【摘要】目的探讨拷贝数变异测序(CNV-seq)技术在研究早期稽留流产原因中的应用价值。方法选取2020年1月至2021年12月在贵港市人民医院就诊的220例稽留流产患者，对其绒毛/胎儿组织进行拷贝数变异测序(CNV-Seq)，分析稽留流产与染色体异常的相关性。结果220例稽留流产标本中，成功检测215例，成功率为97.73%。结果检出染色体异常140例(65.28%)，染色体正常75 例(34.72%)。染色体异常中，数目异常型113例(80.71%)，最为常见，其中三体型 82 例(58.57%)，X 单体型 13 例(9.29%)，三倍体 18 例(12.86%)。嵌合体 13 例(6.05%)，染色体片段缺失/重复14例(6.51%)。孕妇年龄35岁组发生染色体异常率为72.58%，略高于孕妇年龄0.05)。结论CNV-seq对流产物的遗传学诊断具有明确的应用价值，染色体数目异常是导致早期流产最常见的原因之一，对再生育指导具有重要意义。【关键词】稽留流产；绒毛；核型；拷贝数变异测序；下一代测序【中图分类号】R714.21【文献标识码】A【文章编号】10036350（2023）08114804Application of copy number variation sequencing in genetic detection of missed abortion.QIN Ying1,MAOJing-jiang1,ZHONG Wen-fu2.Department of Obstetrics1,Department of Clinical Laboratory2,Guigang Peoples Hospital,Guigang 537100,Guangxi,CHINA【Abstract】ObjectiveTo explore the application value of copy number variation sequencing(CNV-seq)technology in studying the causes of early missed abortion.MethodsA total of 220 patients of missed abortion ad-mitted to Guigang Peoples Hospital from January 2020 to December 2021 were selected.CNV-Seq was performed onthe villus/fetal tissue of the patients to analyze the correlation between missed abortion and chromosomal abnormali-ties.ResultsAmong the 220 patients,215 were detected successfully,with a success detection rate of 97.73%,including140 cases(65.28%)of chromosomal abnormalities and 75 cases(34.72%)of normal chromosomes.Among the 140 casesof chromosomal abnormalities,113(80.71%)were of numeral abnormalities of chromosome,including 82(58.57%)of tri-somy,13(9.29%)of X haplotype,and 18(12.86%)of triploidy.There were 13 cases(6.05%)of mosaicism and 14 cases(6.51%)of chromosomal segment deletion/duplication.The chromosomal abnormality rate of pregnant women aged 论著 doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2023.08.017基金项目：广西贵港市科学技术局项目(编号：2000042)。第一作者：覃颖(1986)，女，硕士，主治医师，主要研究方向为优生遗传、围产医学。通讯作者：毛锦江(1969)，女，硕士，主任医师，主要研究方向为优生遗传、围产医学，E-mail：。Journal of Neuroanatomy,2021,37(1):35-40.王淑静,胡子娟,杨俊杰,等.局灶性脑缺血对大鼠前额叶皮质神经型一氧化氮合酶的影响J.神经解剖学杂志,2021,37(1):35-40.17 Nettersheim FS,Hohmann C,Pfister R,et al.Severe tirofiban-in-duced throm-bocytopenia and thrombotic microangiopathy after per-cutaneous coronary intervention J.Dtsch Med Wochenschr,2019,144(2):109-113.18 Yang Q,Ji HJ,Song MQ,et al.Effects of rehmannia decoction onlearning and memory impairment and expression of c-fos neuronal ni-tric oxide synthase in vascular dementia rats J.Chinese Remediesand Clinics,2020,20(14):2325-2327.杨钤,吉海杰,宋美卿,等.地黄饮子对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍及神经元c-fos神经型一氧化氮合酶表达的影响J.中国药物与临床,2020,20(14):2325-2327.19 Li HY,Lin P,Nyazikhan M,et al.Effect of irbesartan combined withlevamlodipine besylate on blood pressure and endothelial function inhypertensive patients J Electronic Journal of Modern Medicine andHealth Research,2021,5(14):20-22.李浩源,林朋,尼亚孜汗 麦麦提明,等.厄贝沙坦联合苯磺酸左旋氨氯地平对高血压患者血压水平与内皮功能的影响J.现代医学与健康研究(电子版),2021,5(14):20-22.20 Zhang YB,Zhang Y,Zhang XQ.Variation and implication of serumnitric oxide level,nitric oxide synthase activity,interleukin and its re-ceptor levels in mild gastroenteritis children accompanied by benigninfantile convulsions J.Guangxi Medical Journal,2020,42(18):2357-2360.张彦博,张滟,张学琴.轻度胃肠炎伴婴幼儿良性惊厥患儿血清一氧化氮水平、一氧化氮合酶活性、白细胞介素及其受体水平的变化及意义J.广西医学,2020,42(18):2357-2360.21 He GY,Li WX,Wang L,et al.Research progress of miR-146 in theoccurrence and development of bronchial asthma J.Journal of Prac-tical Medicine,2018,34(10):1737-1739.何桂媛,李文新,王莉,等.miR-146在支气管哮喘发生发展中的研究进展J.实用医学杂志,2018,34(10):1737-1739.22 Zhang P,Lu Q,Chen LP,et al.Discussion on related risk factors ofchildren with attention deficit hyperactivity disorder J.ChineseCommunity Doctors,2020,36(1):40,42.张平,陆青,陈丽萍,等.儿童注意缺陷多动障碍患者相关危险因素探讨J.中国社区医师,2020,36(1):40,42.(收稿日期：2021-10-09)1148Hainan Med J,Apr.2023,Vol.34,No.8海南医学2023年4月第34卷第8期稽留流产(missed abortion，MA)是指胚胎或胎儿已死亡，滞留在宫腔内未能及时自然排出者1-2。8%15%的孕妇在妊娠早期会发生自然流产，大多数发生在孕早期(711周)3-4，近几年有增加趋势。导致稽留流产的原因众多，随着细胞遗传学技术的进步和对稽留流产遗传原因的长期研究，胎儿/胚胎染色体异常是稽留流产最常见的原因，约占75%，这种染色体异常是由于生殖细胞的遗传物质异常所致3。既往研究表明，育龄女性中有20%30%的卵子和年轻健康男性中有6%8%的精子存在染色体异常，通常是染色体数目异常3。拷贝数变异测序(CNV-seq)技术是采用一下代测序技术(NGS)检测大于0.2 Mb DNA序列的结构变异，是一种从基因组的随机片段拷贝中平行测序大量短 DNA 链的技术。基于 NGS 正迅速发展，CNV-seq作为一种低深度全基因组测序，在产前诊断、流产、先天性异常或神经发育迟缓的患儿等临床检测染色体疾病中广泛使用2，4。本研究利用CNV-seq技术检测对我院收治的稽留流产患者的绒毛/胎儿组织进行遗传学分析，以帮助确定病因，并提供遗传咨询，评估下一次妊娠的风险。1资料与方法1.1一般资料收集2020年1月至2021年12月在贵港市人民医院产科就诊的220例稽留流产患者的绒毛/胎儿组织，患者年龄1746岁。纳入标准：根据临床病史、实验室检查和经阴道超声检查诊断为稽留流产，所有稽留流产发生在胎龄6至13周之间，并接受流产物细胞遗传学相关检查的患者。排除标准：孕早期有不良接触史和服药史，生殖系统解剖结构异常，糖尿病，精神病和免疫系统疾病的患者。本研究已经医院医学伦理委员会批准，所有患者均于检查前签署知情同意书。1.2研究方法清宫手术或药物流产终止妊娠排出的绒毛/胎儿组织，用0.9%氯化钠溶液多次漂洗去除母体血液及污染物后挑取样本，置于无菌容器中，4保存及运输，样本送至深圳华大临床检验中心进行检测。使用PCR扩增产物够进行单链分离和环化反应，最终获得带有一个接头的单链环状DNA文库。采用PCR-free建库方法建立单链环状DNA文库，利用华大自主测序平台MGISEQ-2000进行测序，并利用测序仪自带的数据处理软件Zebracall找到最终的CNV结果。参考美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)、临床基因组资源中心(ClinGen)等相关指南共识及数据库对CNV进行解读判定。1.3统计学方法应用SPSS25.0软件进行数据统计分析。计数资料采用构成比(%)表示，组间比较采用2检验。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1CNV-seq检查结果220例稽留流产患者进行其绒毛/胎儿组织经CNV-seq检查，成功检测215例，失败5例，成功率为97.73%(215/220)。检出异常染