鹿茸多肽预处理通过miR-...H9c2细胞损伤的保护作用_周高峰.pdf

第 49 卷 第 2 期2023年 3 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.2Mar.2023DOI：10.13481/j.1671587X.20230213鹿茸多肽预处理通过 miR-133a调控 TGF-/Smad信号通路对 TBHP诱导心肌 H9c2细胞损伤的保护作用周高峰1,肖静1,2,周佳1,刘俊秀1,律广富3,王雨辰1,林贺1,黄晓巍1（1.长春中医药大学药学院临床药学与中药药理教研室，吉林 长春 130117；2.中国医学科学院药用植物研究所，北京 100094；3.长春中医药大学 吉林省人参研究科学院中药药理组，吉林 长春 130117）摘要 目的目的：探讨鹿茸多肽（VAP）预处理对叔丁基过氧化氢（TBHP）诱导大鼠心肌 H9c2细胞损伤的保护作用，阐明 VAP 对 miR-133a/转化生长因子 （TGF-）/Smad 轴 的 作 用 及 其 机 制。方法方法：将 H9c2 心肌细胞分为空白对照组、空白血清组、TBHP 组、TBHP+低剂量（100 mg kg1）VAP 组、TBHP+高剂量（400 mg kg1）VAP 组和 miR-133抑制剂（miR-133 inhibitor）组。空白对照组不做任何处理，其余各组细胞经 VAP 处理 24 h 后，给予 200 mol L1 TBHP 处理；miR-133 inhibitor 组细胞转染 miR-133 inhibitor 24 h，给予 400 mg kg1 VAP 处理 24 h，并给予 200 mol L1 TBHP处理。MTT 法检测各组 H9c2细胞存活率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清液中肌钙蛋白 T（cTnT）、肌钙蛋白 I（cTnI）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平，实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）法检测各组 H9c2细胞中 miR-133表达水平，Western blotting法检测各组 H9c2细胞中转化生长因子 1（TGF-1）、磷 酸 化 Smad2/3（p-Smad2/3）和 Smad4 蛋 白 表 达 水 平。结果结果：MTT 法检测，与 TBHP 组比较，TBHP+低剂量 VAP 组和 TBHP+高剂量 VAP 组 H9c2细胞存 活 率 升 高（P0.05）。ELISA 法检测，与空白对照组比较，TBHP 组 H9c2 细胞中 cTnT、cTnI 和 CK-MB 水平升高（P0.05）；与 TBHP组比较，TBHP+低剂量 VAP组和 TBHP+高剂量 VAP组 H9c2细胞中 cTnT、cTnI和 CK-MB 水平降低（P0.05）。RT-qPCR 法 检 测，与 空 白 对 照 组 比 较，TBHP 组 H9c2 细 胞 中miR-133a 表达水平降低（P0.05）；与 TBHP 组比较，TBHP+低剂量 VAP 组和 TBHP+高剂量VAP组 H9c2细胞中 miR-133a表达水平升高（P0.05或 P0.01），miR-133 inhibitor 组 H9c2细胞中 miR-133a 表达水平明显降低（P0.01）。Western blotting 法检测，与空白对照组比较，TBHP 组H9c2 细 胞 中 TGF-1、p-Smad2/3 和 Smad4 蛋 白 表 达 水 平 升 高（P0.05）；与 TBHP 组 比 较，TBHP+低剂量 VAP组和 TBHP+高剂量 VAP组 H9c2细胞中TGF-1、p-Smad2/3和 Smad4 蛋白表达水 平 降 低（P0.05）。结论结论：VAP 预处理通过 miR-133a 调控 TGF-/Smad 信号通路保护 TPHP 诱导的大鼠心肌 H9c2细胞损伤。关键词 鹿茸多肽；心肌损伤；微小 RNA-133a；转化生长因子；血清药理学中图分类号 R285.5文献标志码 A文章编号 1671587X(2023)02036908收稿日期 20220502基金项目 吉林省卫健委技术创新项目（2020J068）；吉林省发改委创新能力建设项目（2021C011）作者简介 周高峰（1995），女，内蒙古自治区通辽市人，在读硕士研究生，主要从事心血管及内分泌药理学方面的研究。通信作者 黄晓巍，主任药师，博士研究生导师（E-mail：）；林 贺，副教授，硕士研究生导师（E-mail：）369第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）Protective effect of Velvet antler polypeptide pretreatment on myocardial H9c2 cell injury induced by TBHP through regulating TGF-/Smad signaling pathway with miR-133aZHOU Gaofeng1,XIAO Jing1,2,ZHOU Jia1,LIU Junxiu1,LYU Guangfu3,WANG Yuchen1,LIN He1,HUANG Xiaowei1（1.Department of Clinical Pharmacy and Pharmacology of Chinese Medicine，School of Pharmacy，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China；2.Institute of Medicinal Plant Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing 100094，China；3.Department of Pharmacology of Traditional Chinese Medicine，Jilin Ginseng Academy，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China）ABSTRACT Objective：To explore the protective effect of velvet antler peptide（VAP）pretreatment on the myocardial H9c2 cell injury of the rats induced by tert-butyl hydroperoxide（TBHP），and to clarify the effect of VAP on miR-133a/transforming growth factor-（TGF-）/Smad axis and its mechanism.Methods：The H9c2 cells were divided into blank control group，blank serum group，TBHP group，TBHP+low dose（100 mg kg1）of VAP group，TBHP+high dose（400 mg kg1）of VAP group，and miR-133 inhibitor（miR-133 inhibitor）group.The cells in blank control group were given no treatment，and the cells in the other groups were treated with VAP for 24 h，then were treated with 200 mol L1 TBHP；the cells in miR-133 inhibitor group were transfected with miR-133 inhibitor for 24 h，treated with 100 mg kg1 VAP for 24 h+200 mol L1 TBHP.MTT assay was used to detect the survival rates of the H9c2 cells in various groups；the levels of troponin T（cTnT），and cardial troponin T（cTnI）in culture supernatant of the cells in various groups were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）method and creatine kinase-MB（CK-MB）；the expression levels of miR-133 in the H9c2 cells in various groups were detected by real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR）method；the expression levels of transforming growth factor-1（TGF-1），phosphorylated Smad2/3（p-Smad2/3），and Smad4 proteins the in H9c2 cells in various groups were detected by Western blotting method.Results：The MTT results showed that compared with TBHP group，the survival rates of H9c2 cells in TBHP+low dose of VAP group and TBHP+high dose of VAP group were increased（P0.05）.The ELISA assay results showed that compared with blank control group the levels of cTnT，cTnI，and CK-MB in the H9c2 cells in TBHP group were increased（P0.05）；compared with TBHP group，the levels of cTnT，cTnI，CK-MB in the H9c2 cells in TBHP+low dose of VAP group and TBHP+high dose of VAP group were decreased（P0.05）.The RT-qPCR results showed that compared with blank control group，the expression level of miR-133a in the H9c2 cells in TBHP group was decreased（P0.05）；compared with TBHP group，the expression levels of miR-133a in the H9c2 cells in TBHP+low dose of VAP group and TBHP+high dose of VAP group were increased（P0.05 or P0.01），and the expression level of miR-133a in the cells in miR-133 inhibitor group was decreased（P0.01）.The Western blotting results showed that compared with blank control group，the expression levels of TGF-