2022年医学专题—筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选.ppt

2.2.2 动物(dngw)细胞融合与单克隆抗体,第一页，共二十七页。,1、概念(ginin),动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个(y)细胞的过程,一、动物(dngw)细胞融合,2、原理：膜的流动性,第二页，共二十七页。,一、动物(dngw)细胞融合,3、结果：形成杂交(zjio)细胞。杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核 细胞。,4、诱导(yudo)方法：聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒、电激等。,第三页，共二十七页。,5、过程(guchng)：,第四页，共二十七页。,3、过程(guchng)：,细胞相互(xingh)凝集,膜上蛋白质分子(fnz)和脂质分子(fnz)重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。,第五页，共二十七页。,6、优点(yudin)：,突破了有性杂交的局限，使远缘(yun yun)杂交成为可能,7、应用：用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培养(piyng)等的重要手段。最重要的用途：制备单克隆抗体,第六页，共二十七页。,2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么(shn me)影响？,3、植物体细胞杂交诱导(yudo)原生质体融合常用的方法有哪些？,离心、振动、电激等物理方法(fngf)；PEG等化学方法(fngf),问题讨论,动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。,、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能，只能得到杂交细胞,第七页，共二十七页。,4、动物细胞融合能利用(lyng)上述两类方法吗？还有其他方法吗？,能，还可以利用灭活的病毒（生物(shngw)方法）进行诱导,问题(wnt)讨论,、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？相同，都是细胞膜的流动性,第八页，共二十七页。,问题(wnt)讨论,6、为什么要用灭活的病毒(bngd)？,病毒(bngd)一般对生物体是有伤害的。,仙台病毒,物理或化学方法,丧失感染活性,保留融合活性,第九页，共二十七页。,获得(hud)杂种植株,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性,8、植物、动物(dngw)细胞融合的比较,第十页，共二十七页。,抗体(kngt)是由何种细胞产生的？2.抗体是如何产生的？,二、单克隆抗体(kngt),第十一页，共二十七页。,（一）获得抗体的传统(chuntng)方法,1、方法：向动物体内反复注射某种抗原(kngyun)，使动物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。2、缺点：产量少、纯度低、特异性差,.,.,第十二页，共二十七页。,3、解决问题的设想:免疫反应过程中，每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群，获得大量的单一抗体。4、面临的新问题：一个B淋巴细胞不可能在体外培养条件(tiojin)下无限增殖的。,.,.,第十三页，共二十七页。,1、如何(rh)获得化学性质单一、特异性强的抗体？,问题(wnt)讨论,提示(tsh)：,1.什么样的细胞可以产生抗体？2.什么样的细胞可以无限增殖？,2、瘤细胞和癌细胞有何区别？,共同点：两者都有无限增殖的能力不同点：瘤细胞不能转移,第十四页，共二十七页。,1、设计方案：一个B淋巴细胞只分泌(fnm)一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖,杂种(zzhng)细胞,（二）单克隆抗体(kngt)的制备,第十五页，共二十七页。,2、单克隆抗体(kngt)制备过程,细胞融合、筛选(shixun),足够数量(shling)的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,（选择性培养基）,诱导其融合的方法有哪些？,第十六页，共二十七页。,单克隆抗体(kngt)的制备,第十七页，共二十七页。,单克隆抗体(kngt)的制备,第十八页，共二十七页。,B BB B瘤 瘤瘤 瘤,、细胞融合后培养液中有几种(j zhn)细胞？,思考(sko)：,杂交瘤细胞(xbo),、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？,细胞融合技术、细胞培养技术,第十九页，共二十七页。,3、单克隆抗体的概念(ginin)：化学性质单一，特异性强的抗体,4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可大量(dling)制备。,第二十页，共二十七页。,诊断疾病（识别作用(zuyng)，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,（三）单克隆抗体(kngt)的应用,优点：准确(zhnqu)、高效、简易、快速,用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运载药物，如“生物导弹”）,（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，用于治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）,第二十一页，共二十七页。,小结(xioji),两个(lin)过程,动物(dngw)细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势,单克隆抗体,第二十二页，共二十七页。,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法(fngf)，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案,制备(zhbi)单克隆抗体,B细胞(xbo),抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,第二十三页，共二十七页。,世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程(guchng)如图所示，请据图回答：,乙,甲,a,b,c,d,e,f,(1)图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，a和b是通过(tnggu)_分裂形成的，其DNA含量是体细胞的 _；c肯定是_ 细胞，乙的遗传性状与提供 _的绵羊 一致.,减数(jin sh),一半,体,细胞核,第二十四页，共二十七页。,乙,甲,a,b,c,d,e,f,(2)产生 甲和乙的过程分别是和（3）在形成乙是的过程中，需要将d的细胞核取出，将c细胞核移入d细胞内，此技术叫。所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是（4）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用(xunyng)与它交配的绵羊最好是-,有性生殖(yuxng shngzh),克隆(k ln),核移植,卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能。,黑毛,第二十五页，共二十七页。,乙,甲,a,b,c,d,e,f,（5）在产生多莉羊时，需将e细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（f）子宫里，这种技术在细胞工程中叫（6）继植物组织培养后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞也有（7）在繁殖多莉羊的过程(guchng)中，是否遵循孟德尔遗传规律？多莉羊的性状与d羊、c羊及f羊的关系是什么？,胚胎(piti)移植,全能性,不遵循，多莉羊的多数(dush)性状象c羊，个别性状象d羊，发育也会受到f羊影响。,第二十六页，共二十七页。,内容(nirng)总结,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体。动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成(xngchng)一个细胞的过程。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成(xngchng)杂种动物个体吗。一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖。全能性,第二十七页，共二十七页。,