2022年医学专题—优质课动物细胞培养和核移植技术.ppt

动物细胞工程(gngchng)常用的技术手段：,动物细胞培养、动物细胞核移植(yzh)、动物细胞融合、生产单克隆抗体等,复习(fx)：,植物细胞工程常用的技术手段有哪些？,植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术,动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。,第一页，共二十三页。,2003年月日下午，12岁的四川简阳少年小林放学路上捡了些鞭炮，并把里面的火药抖出来，蹲在地上将其点燃，导致面部、四肢不幸被严重烧伤并感染，在当地医院治疗半月后，于4月22日转入(zhun r)武警四川消防总队医院烧伤整形科。为了挽救儿子的生命，小林的爸爸、妈妈向医生恳求：“割我们的皮给儿子吧！”烧伤整形科主任魏平经不起这份亲情的重托，最终“妥协”了：同意进行这种国内极其罕见的亲体皮肤移植手术。,阅读(yud)资料,儿子捡鞭炮严重烧伤感染(gnrn)，父割千块皮肤,第二页，共二十三页。,思考(sko)一下！,1、小林在皮肤烧伤之后，很容易(rngy)得病，为什么？,2、皮肤在我们人体当中是第几道防线(fngxin)，其他几道防线(fngxin)是什么？,3、选取植皮时，理论上选择谁的皮肤最好？为什么？,4、自身的健康皮肤是有限的，能不能通过其他途径获得自身 的皮肤？,第三页，共二十三页。,一、动物(dngw)细胞培养过程,阅读“动物(dngw)细胞培养过程”并思考：,1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？2、为什么要对取出的动物组织(zzh)进行处理，使细胞分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？6、简述动物细胞培养的操作过程,第四页，共二十三页。,一、动物(dngw)细胞培养,1、概念：从动物机体中取出相关组织，将它们(t men)分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,原理(yunl)：,细胞增殖,如何进行动物细胞培养?,第五页，共二十三页。,胰蛋白酶(y dn bi mi)或胶原蛋白酶,.培养(piyng)条件,动物(dngw)组织,分散成单个细胞,制成细胞悬液,培养,胰蛋白酶胶原蛋白酶,原理：细胞增殖（有丝分裂）结果：细胞群，细胞产物,原代培养,传代培养,2、动物细胞培养过程,动物胚胎细胞或幼龄动物的器官组织,剪碎,第六页，共二十三页。,动物细胞生长(shngzhng)特点：,细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触(jich)时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触(jich)抑制。,第七页，共二十三页。,接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时(c sh)细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。,接触抑制,动物细胞生长(shngzhng)特性,第八页，共二十三页。,原代培养：通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：原代培养的细胞(xbo)出现接触抑制后，贴满瓶壁的细胞(xbo)需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞(xbo)增殖。这样即为传代培养。,第九页，共二十三页。,1、无菌、无毒消毒、灭菌抗生素定期更换培养液（清除代谢废物）2、营养(yngyng)合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、无机盐、微量元素（血清、血浆）3、温度和pH4、气体95%空气，5%CO2,培养(piyng)条件,第十页，共二十三页。,.,动物细胞培养技术(jsh)的实际应用,1、大量生产细胞或产物。如：病毒疫苗 干扰素 单克隆抗体 胰岛素2、给基因工程提供受体细胞。3、检测(jin c)有毒物质及毒性。4、用于生理、病理、药理等方面 的研究，为治疗和预防疾病提 供理论依据。,第十一页，共二十三页。,二、动物体细胞核移植技术(jsh)和克隆动物,克隆(k ln)就是无性繁殖，具体地说，是指 一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。,a.分子(fnz)水平上：,b.细胞水平上：,c.个体水平上：,1.什么是克隆？,一般指DNA克隆。,指一个单一的细胞分裂所形成的细胞群体。,指基因型完全相同的两个或一个群体。,第十二页，共二十三页。,2、克隆(k ln)动物能否用类似植物组织培养的方法获得？为什么？,目前(mqin)不能。,因为动物细胞的全能性随着分化(fnhu)程度的提高逐渐受到限制。目前，用动物体细胞克隆的动物，实际上是通过核移植来实现的。,第十三页，共二十三页。,将动物的一个细胞(xbo)的，移入一个已经去掉的细胞中，使其并发育成一个新的，这个新的胚胎最终发育为动物个体。分类胚胎细胞核移植、体细胞核移植,细胞核,细胞核,卵母,重组(zhn z),胚胎(piti),核移植技术,第十四页，共二十三页。,胚胎(piti)移植,体细胞核移植过程(guchng)（体细胞克隆动物）,第十五页，共二十三页。,体细胞,细胞培养,体细胞,卵巢(luncho)卵母细胞（M中期：）,去核,去核的卵母细胞,注入(zh r),重组(zhn z)细胞,构建重组胚胎,胚胎移植,将胚胎移入受体（代孕）母体,生出与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛,总结：体细胞核移植过程,（供 核）,（供 质）,据上图思考下列问题：,第十六页，共二十三页。,整个过程(guchng)用了哪些技术？细胞培养、核移植、胚胎移植新生牛的性别、基因？与供体相同繁殖方式？无性繁殖原理？动物细胞核的全能性,体细胞核移植技术(jsh),第十七页，共二十三页。,1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须(bx)先去掉受体卵母细胞的核？,为使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自有重要利用(lyng)价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。,2.实施细胞工程时，所需受体细胞大多采用(ciyng)卵母 细胞的原因？,体积大，易操作。含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。,第十八页，共二十三页。,3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物(dngw)，是对体细胞供体动物(dngw)进行了100%的复制吗？为什么？,不是的，因为：克隆动物绝大部分DNA来自(li z)于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA,即线粒体中的DNA是来自(li z)于受体卵母细胞。所以，用教材中所述的方法克隆的动物不是供核动物完全相同的复制。,生物的性状不仅(bjn)与遗传物质有关，还受环境的影响。,4、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？,10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞,第十九页，共二十三页。,加速家畜遗传(ychun)改良进程，促进优良畜群繁育,保护濒危(bnwi)物种，增加存活数量,克隆动物作为生物(shngw)反应器，生产医用蛋白,可以作为异种移植的供体,4、应用前景：,可以用于组织器官的移植,第二十页，共二十三页。,5.体细胞核移植技术(jsh)的应用前景,第二十一页，共二十三页。,5、存在(cnzi)问题：,成功率低 克隆动物(dngw)存在健康问题 克隆动物食品的安全性问题存有争议,第二十二页，共二十三页。,内容(nirng)总结,动物细胞工程常用的技术手段：。”烧伤整形科主任魏平经不起这份亲情的重托，最终“妥协”了：同意进行这种国内极其罕见的亲体皮肤移植手术。2、皮肤在我们人体当中是第几道防线，其他几道防线是什么。5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。二、动物体细胞核移植技术和克隆(k ln)动物。体细胞核移植过程（体细胞克隆(k ln)动物）,第二十三页，共二十三页。,