碱水解法提取女贞子中红景天苷的工艺研究_蒋梅香.pdf

2023年2月第29卷第2期February.2023 Vol.29 No.2女贞子为木犀科（Oleaceae）女贞属（Ligustrum L.）植物女贞（Ligustrum lucidum Ait.）的干燥成熟果实，具有滋补肝肾，明目乌发的功效1。其主要有效成分为三萜类、环烯醚萜类、苯乙醇苷类及黄酮类等化合物。现代药理研究表明，女贞子提取物具有抗肿瘤、抗骨质疏松症等多种药理作用2。其中红景天苷是女贞子中苯乙醇苷类的代表化合物，同时也是女贞子提取物具有抗肿瘤3、抗氧化4、抗炎5、抗骨质疏松症6-7、降血糖、降血脂8-9、保肝10-11、调节免疫12等药理作用的主要活性成分，但是女贞子中红景天苷的含量一般为0.206%0.434%13。为了提高女贞子中红景天苷的提取率，现已有酶解法14、冰乙酸水解法15、微波提取法16、回流法17-18、冷浸法18、水提醇沉法18等从女贞子中提取红景天苷的方法，但红景天苷的提取率不超过0.91%。笔者基于前期研究19发现，红景天苷可与裂环环烯醚萜通过酯键形成特女贞苷。且文献资料表明，女贞子中还含有十多种含红景天苷结构的裂环环烯醚萜苷20，总含量约为10.76 mg/g21。故本研究采用碱水解法从女贞子中回流提取红景天苷，并用正交试验优化提取工艺，以提高女贞子提取碱水解法提取女贞子中红景天苷的工艺研究*蒋梅香，刘艳，姚淑琼，彭丽英，喻祖文，刘颖新（湖南中医药高等专科学校，湖南株洲412012）摘要目的：优化碱水解法提取女贞子中红景天苷的工艺条件。方法：按照 中华人民共和国药典 中分析方法验证指导原则对含量测定方法进行方法学验证，再通过单因素试验和正交试验对碱水解提取工艺进行优化。结果：最佳碱水解提取工艺参数为提取时间2 h、液固比401（mL/g）、40%乙醇、1.0%NaOH，碱水解后红景天苷提取率达到1.80%，是未经碱水解提取率的8.5倍。结论：该法操作简单、提取率高、环境污染小，为以红景天苷为主成分的女贞子提取物的开发利用提供了理论依据。关键词女贞子；红景天苷；碱水解；提取工艺；正交试验；提取率中图分类号R284.2文献标识码A文章编号1672-951X（2023）02-0043-04DOI：10.13862/43-1446/r.2023.02.008Study on the Extraction Technology of Salidroside from Nuzhenzi(LigustriLucidi Fructus)by Alkaline HydrolysisJIANG Meixiang,LIU Yan,YAO Shuqiong,PENG Liying,YU Zuwen,LIU Yingxin(Hunan Traditional Chinese Medical College,Zhuzhou Hunan 412012,China)AbstractObjective:To optimize the extraction technology of salidroside from Nuzhenzi(Ligustri LucidiFructus)by alkaline hydrolysis.Methods:The content determination method was validated in accordance with theguiding principles of the validation of analytical methods in the Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China,and the alkaline hydrolysis extraction technology was optimized by single factor test and orthogonal test.Results:The optimum extraction process parameters of salidroside by alkali hydrolysis were extraction time 2 h,liquid-solidratio 401(mL/g),40%ethanol,1.0%NaOH.The extraction rate of salidroside after alkali hydrolysis reached1.80%,which was 8.5 times of that without alkali hydrolysis.Conclusion:This method was simple in operation,high in extraction rate and low in environmental pollution,which provides a theoretical basis for the developmentand utilization of the extract of Nuzhenzi(Ligustri Lucidi Fructus)with salidroside as the main component.KeywordsNuzhenzi(Ligustri Lucidi Fructus);salidroside;alkaline hydrolysis;extraction technology;orthogonal test;extraction rate引用：蒋梅香，刘艳，姚淑琼，彭丽英，喻祖文，刘颖新.碱水解法提取女贞子中红景天苷的工艺研究J.中医药导报,2023,29(2):43-46,67.*基金项目：湖南省教育厅科学研究项目（19C1441）；湖南省青年骨干教师项目（202140）；湖南中医药高等专科学校药食同源功效研究与健康产品开发科技创新团队（202206）432023年2月第29卷第2期February.2023 Vol.29 No.2物中红景天苷的含量，为进一步开发和利用女贞子提取物提供理论依据。1仪器与试剂1.1仪器SHIMADZU LC-20AT型高效液相色谱仪、SPD-M20A型检测器（日本岛津公司）；CPA225D型电子分析天平（德国赛多利斯公司）；KQ250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-4型数显恒温水浴锅（金坛区水北盛威实验仪器厂）；Milli-Q 型超纯水系统（Millpore公司）。1.2药物与试剂女贞子药材（酒女贞子）（批号：21073112）购自湖南衡岳中药饮片有限公司；红景天苷对照品（批号：110818-202009，纯度：98.6%）购自中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯，批号：20115121）购自美国天地公司；无水乙醇（分析纯，批号：20211008）购自湖南汇虹试剂有限公司；氢氧化钠（批号：210401）购自上海展云化工有限公司；无水碳酸钠（批号：210618）购自天津市大茂化学试剂厂；碳酸氢钠（批号：20201009）购自汕头市光华化学厂；盐酸（分析纯，批号：20210825）购自株洲市星空化玻有限责任公司；pH试纸（批号：20210515）购自上海三爱思试剂有限公司。2方法与结果2.1分析测定方法2.1.1色谱条件色谱柱为Phenomenex Luna C18（250 mm4.6mm，5.0m）；流动相为甲醇-水（2080），流速为1.0 mL/min；柱温为30；检测器为二级管阵列检测器（DAD），检测波长为275 nm，进样量为10 L。2.1.2对照品溶液的制备精密称取98.6%的红景天苷对照品13.46 mg，加甲醇10 mL制成1.327 mg/mL的红景天苷对照品储备液。精密吸取上述红景天苷对照品储备液4.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得0.530 8 mg/mL的红景天苷对照品溶液。2.1.3供试品溶液的制备精密称取女贞子药材粉末0.5 g，置于150 mL的圆底烧瓶中，加含1.0%氢氧化钠的50%乙醇溶液50 mL，称质量，加热回流2 h，冷却后称质量并补足质量。取上清液，用盐酸调pH值至56，用0.45 m的微孔滤膜滤过，续滤液即为供试品溶液。2.1.4系统适用性试验精密吸取红景天苷对照品溶液、女贞子供试品溶液各10 L，注入高效液相色谱仪进行测定。在“2.1.1”项下色谱条件下，红景天苷色谱峰对称因子在0.951.05之间，与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论塔板数均大于5 000。（见图1）图 1HPLC 图2.1.5线性关系考察依次精密量取红景天苷对照品溶液，置于10mL容量瓶中，加甲醇稀释制成含红景天苷53.08、106.16、212.32、318.48、424.64、530.80 g/mL的6种不同质量浓度的红景天苷对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分析检测，记录峰面积。以峰面积为纵坐标（Y）、红景天苷浓度为横坐标（X）绘制标准曲线，得到回归方程为Y=2 722.9X+1 838.5，r=1.000（n=6）。结果表明红景天苷在53.08530.8 g/mL范围内浓度与峰面积具有较好的线性关系。2.1.6精密度试验精密称取女贞子药材粉末1份，约0.5 g，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液连续进样6次，记录峰面积，计算红景天苷峰面积的RSD%值为1.14%，说明仪器精密度良好。2.1.7稳定性试验精密吸取女贞子供试品溶液，按上述色谱条件在0、1、2、4、6、8、12、24 h分别进样分析，记录峰面积，计算红景天苷峰面积的RSD%值为1.13%，表明供试品溶液在室温条件下放置24 h稳定性良好。2.1.8重复性试验分两组进行重复性试验，两组各精密称取女贞子药材粉末6份。第1组按“2.1.3”项下制备供试品溶液，测得红景天苷的平均提取率为1.72%，RSD%值为1.10%，结果表明碱水解制备供试品溶液时方法的重复性较好。第2组除不加1.0%氢氧化钠外，其他均按“2.1.3”项下制备供试品溶液，测得红景天苷的平均提取率为0.21%，RSD%值为1.74%，结果表明不加氢氧化钠制备供试品溶液时方法的重复性也较好。设计第二组试验的目的是检测出碱水解前的酒女贞子中红景天苷的提取率，酒女贞子中红景天苷平均提取率为0.21%，与李彦灵等13报道相一致，也为后续加样回收率试验做好准备。2.1.9加样回收率试验精密称取女贞子药材粉末6份，每份约0.5 g，分别置于150 mL圆底烧瓶中，分别精密加入红景天苷对照品适量，按“2.1.3”项下不加氢氧化钠制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，记录峰面积，计算回收率。红景天苷的加样回收率见表1，结果表明本方法准确性较好，可用于红景天苷的定量检测。表 1红景天苷加样回收率试验结果（n=6）样品 取样量(mg)样品量(mg)加入量(mg)测得量(mg)加样回收率(%)加样平均回收率(%)RSD(%)1504.11.06361.06162.079397.8498.621.662503.51.06241.06162.068197.373503.11.06151.06162.1462101.094503.01.06131.06162.067197.375504.11.06361.06162.077397.756503.81.06301.06162.1307100.292.2单因素试验考察碱水解法影响因素2.2.1单因素试验方法碱水解回流法提取女贞子中的红景天苷，对影响红景天苷提取率的4个因素进行研究，固定其中3个因素的中间水平，变化第4个因素，各个因素水平选择为提取时间：0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h；液固比（mLg）：201、301、401、501、1001；乙醇浓度：10%、30%、50%、70%、90%；NaOH浓442023年2月第29卷第2期February.2023 Vol.29 No.2度：0.2%、0.5%、1.0%、2.0%