精子激活剂应用于梗阻性无精症患者ICSI的比较分析_彭涛.pdf

9 贺赞静，侯娜 血清胱抑素 C 检测在系统性红斑狼疮肾损害早期诊断的价值J 新疆医学，2017，47(3):324 325 10 赵秀芬，黄智敏，钱军，等 血清胱抑素 C 与 IgA 肾病Lee 氏病理分级的相关性J 江苏医药，2016，42(23):2553 2555 11 范燕琴，丁国华，陈星华，等 IgA 肾病患者血清胱抑素C 对早期肾小管间质损害的预测作用J 医学研究杂志，2015，44(8):21 25 12 向莉，周华，李旻，等 胱抑素 C 评估 IgA 肾病患者肾纤维化程度及早期肾损害的价值J 江苏医药，2012，38(16):1899 1901 论著 收稿日期:2022 04 13基金项目:昆明市卫生健康委员会卫生科研课题(2020 05 01 118)。作者简介:彭涛(1977 )男，硕士，助理研究员，从事生殖医学实验室工作 14 余年。精子激活剂应用于梗阻性无精症患者 ICSI 的比较分析*彭涛，鞠海宇，赵立晓，张喜贤(云南锦欣九洲医院生殖医学科，云南昆明650000)摘要:目的睾丸或附睾穿刺获得的精子经过含有 PF 的精子激活剂处理后，挑选出活动精子行 ICSI，最后比较分析相关指标。方法研究分为观察组 91 例患者，男方行睾丸/附睾穿刺抽吸取精术或者解冻此前手术获得精子，经过激活处理后，选活动的精子行 ICSI 操作;对照组选择未行激活的此类患者 77 例，显微镜下机械接触法选活动精子行 ICSI。对 2组的受精率、卵裂率、可用胚胎率、囊胚形成率、临床妊娠率等指标比较分析。结果2 组间的受精率(81.3%VS79.5%)、卵裂率(97.1%VS 98.1%)差异无统计学意义(P 0.05)。可利用胚胎率(55.5%VS 46.1%，P=0.008)、囊胚形成率(57.8%VS 46.0%，P=0.007)均有提高。2 组均没有分娩畸形胎儿。另在冷冻睾丸/附睾精子亚组中，观察组的受精率、正常受精率均有高于对照组的趋势，但样本量较小，尚无统计学意义。结论对睾丸(附睾)精子，尤其是对冷冻复苏后的精子行激活处理，可帮助实验室操作人员镜检并挑选出活动精子行 ICSI，获得较为理想的实验室及临床结局，而且未发现危害。关键词:无精子症;睾丸穿刺术;卵细胞胞质内单精子注射;己酮可可碱中图分类号:698.2文献标志码:A文章编号:1006 4141(2023)01 0010 04Comparative analysis on the application of sperm activatorfor ICSI patients with obstructive azoospermiaPENG Tao，JU Haiyu，ZHAO Lixiao，ZHZNG Xixian(Department of eproductive Medicine，Yunnan jiuzhou Hospital，Kunming Yunnan 650000，China)Abstract:Objective sperm obtained by testicular or epididymal puncture were treated with sperm activator containing PF，andmotile sperm were selected for ICSI，and the relevant indicators were compared and analyzed at last.Methods The study was dividedinto observation group A with 91 patients，the male underwent testicular/epididymal puncture aspiration method or thawed prioroperations to obtain sperm.After activation treatment，active sperm were selected for ICSI operation.In control group，77 cases ofsuch patients without activation were selected and motile sperm were selected for ICSI by mechanical contact method under microscope.The index of fertility rate，cleavage rate，available embryo rate，blastocyst formation rate and clinical pregnancy rate were comparedand analyzed between the two groups.esults There was no statistical significance in the difference of fertility(81.3%VS 79.5%)and cleavage rate(97.1%VS 98.1%)(P 0.05)in the two groups.Both available embryo(55.5%VS 46.1%，P=0.008)andblastocyst formation rate(57.8%VS 46.0%，P=0.007)increased.There were no malformed fetuses in the two groups.Inaddition，in the frozen testicular/epididymal sperm subgroup，the fertilization rate and normal fertilization rate of observation group Awere higher than that of observation group B，but the sample volume was less and there was no statistical significance.ConclusionsActivation of testicular/epididymal sperm，especially sperm after cryoresuscitation，can help laboratory operators to microscopy andselect motile sperm for ICSI，and achieve ideal laboratory and clinical outcomes，and no harm was found.Key words:azoospermia，testicular puncture，ICSI，pentoxifylline01云南医药 2023 年第 44 卷第 1 期据 WHO 近年来调查，育龄夫妇中约有 10%15%不育，其中男性病因占 40%。据相关研究显示1，不孕妇女多集中在 25 35 岁年龄段，但近年来由于生育政策逐步放开，患者的年龄也逐步上升，辅助生殖技术成为了治疗的主要手段。梗阻性无精子症患者占男性不育患者的 15%，在辅助生殖治疗中，从男性患者身体中获取精子需采用睾 丸 精 子 抽 吸 术(testicular sperm aspiration，TESA)或者附睾精子抽吸术。但是，在显微镜下观察到的活动精子数量稀少，甚至可能完全未见活动精子2。有研究证明，虽然睾丸精子具有受精能力，但行卵胞浆内单精子注射(intracytoplas-mic sperm injection，ICSI)时使用不活动的睾丸精子与使用活动的睾丸精子相比，缺乏使卵子受精的能力，难以获得理想的临床结局3。有鉴于此，在 ICSI 时应尽量避免使用不动精子。目前，国内各中心多采用机械接触法和激光接触法判断选择经皮 附 睾 精 子 抽 吸 术(percutaneous epididymalsperm aspiration，PESA)或 TESA 获得精子行 IC-SI4，5。本研究在 PESA 或 TESA 获得精子加入含己酮可可碱(pentoxifylline，PF)的精子激活剂实施短时间激活后，使有些原本不动的精子活动，帮助操作人员迅速挑选出足量的活动精子行 ICSI。通过与采用机械接触法选出的精子行 ICSI 的结果做比较。比较 2 组间的受精率、卵裂率、可用胚胎率、妊娠率等实验室及临床指标是否有区别，据此判断精子激活对 ICSI 结局的效果，现报告如下。1资料与方法1.1资料选取 2019 年 5 月 2021 年 4 月，于云南九洲医院生殖医学科行 PESA 或 TESA 取精后 ICSI 的168 例无精子症患者。其中，试验组为 2020 年 5月 2021 年 4 月行精子激活处理 91 例无精子症患者。对照组为 2019 年 5 月 2020 年 4 月的未行精子激活的无精子症患者 77 例作为研究对象。纳入标准为，女方年龄45 岁;男方至少 2 次的精液常规检查证实为无精子症，并且经过诊断性睾丸穿刺或附睾穿刺证实睾丸或附睾内存在正常精子，PESA 精子的活力为偶见活动精子。本研究经过院伦理委员会批准，纳入患者均签署知情同意书。1.2方法1.2.1PESA 和 TESA男方行局部麻醉，使用10 mL 注射器经皮穿刺附睾或睾丸，抽出少许附睾液或睾丸组织，置于约 1 mL 培养液的培养皿中，经机械破碎曲细精管后在显微镜(200)挑选精子，备 ICSI。如需冷冻精子，则经患者同意后，将附睾液或曲细精管破碎液加入等体积精子冷冻液，按冷冻操作说明置于液氮罐中冷冻保存。1.2.2试验组和对照组操作在女方取卵日，男方患者中经 PESA 或 TESA获得的精子悬液、或者解冻冷冻精子，制作 ICSI操作液滴，将有效成分 PF 的精子激活剂，直接添加到精子液滴中比例为 1 10，置于 37、不通CO2培养箱孵育 5 min。然后用显微操作仪挑选出活动的精子，移入聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyr-rolidone PVP)液滴中备用。每次有 5 条以上的活动精子后，再放入卵子行 ICSI 操作。对照组精子处理:未做激活处理，用显微镜仪 ICSI 操作针直接触碰精子，精子如有活动则挑选出活动的精子，移入 PVP 液滴中备用。每次有 5 条以上的活动精子后，再放入卵子行 ICSI 操作。1.2.3胚胎评估及移植冷冻标准ICSI 受精 17 h 后评估受精率，受精 44 h 后评估受精卵分裂率，受精 68 h 后评估可用胚胎，选择可移植与冷冻胚胎。胚胎移植后 35 d 超声检查见卵黄囊者确定为临床妊娠。1.2.4评估指标受精率(受精卵数/成熟卵数 100%)、卵裂率(卵裂胚胎数/受精卵数 100%)、可用胚胎率(可用胚胎数/卵裂胚胎数 100%)、囊胚形成率(形成囊胚数/培养囊胚数 100%)、临床妊娠率(临床妊娠周期数/移植周期数 100%)、胚胎种植率(妊娠卵黄囊数/移植胚胎总数 100%)。1.3统计学处理采用 SPSS 20.0 软件对资料进行统计学处理，计量资料采用百分比表示，组间采用卡方检验进行数据分析。P 值(双尾)0.05 认为有统计学意义。2结果2.1患者基本情况试验组与对照组间患者年龄、体重指数、不孕年限、基础促卵泡素(Follicle Stimulating Hor-mone，FSH)、促性腺激素(gonadotropins，Gn)用药量、用药天数、获卵数及胚胎移植个数均无统计学差异(P 0.05)(见表 1)。试验组，91 例，11云南医药 2023 年第 44 卷第 1 期31 例解冻精子，60 例新鲜精子，加入精子激活剂后挑选活动精子行 ICSI。对照组，77 例，32 例解冻精子，45 例新鲜精子，显微镜下机械