第３７卷第１期２０２３年２月长治医学院学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＨＡＮＧＺＨＩＭＥＤＩＣＡＩＣＯＬＬＥＧＥＶｏｌ．３７Ｎｏ．１Ｆｅｂ．２０２３·基础研究·基金项目：安徽省自然科学基金项目（１９０８０８５ＭＨ２５２，２００８０８５ＱＨ４０５）；蚌埠医学院研究生科研创新计划项目（Ｂｙｙｃｘ２１００８，Ｂｙｙｃｘｚ２１０１６）作者单位：１蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心（安徽蚌埠２３３０３０）；２蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室；３蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室；４蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室作者简介：王楚彤，女，硕士，研究方向：微生物与免疫学；通信作者：汪洪涛，男，博士，教授，研究方向：抗感染免疫，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｏｎｇｔａｏｗａｎｇ＠ｂｂｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎ；许涛，男，博士，讲师，研究方向：抗感染免疫，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｔａｏｘｕ＠ｂｂｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎ。结核分枝杆菌ＰＰＥ５９蛋白的表达、纯化和生物信息学分析王楚彤１，４袁美丽１，４魏婧１，４李敏英１，４许涛１，３，４汪洪涛１，２，４摘要目的：构建结核分枝杆菌ｐＥＴ２８ａ⁃ＰＰＥ５９原核表达载体，异丙基⁃β⁃Ｄ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达和纯化获得ＰＰＥ５９蛋白；同时对ＰＰＥ５９蛋白进行生物信息学分析，预测其可能结构和功能。方法：以Ｈ３７Ｒｖ基因组为模板扩增获得ＰＰＥ５９基因，利用同源重组将其克隆至原核表达载体ｐＥＴ２８ａ，后转化至大肠杆菌表达菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）中，ＩＰＴＧ诱导表达，采用Ｎｉ＋－ＮＴＡ亲和层析柱对ＰＰＥ５９蛋白进行纯化，获得重组ＰＰＥ５９蛋白并进行鉴定。使用Ｐｒｏｔｐａｒａｍ、ＮｅｔＰｈｏｓ３.１Ｓｅｒｖｅｒａ、ＡＢＣｐｒｅｄ、ＳＹＥＰＥＩＴＨＩ等软件对ＰＰＥ５９蛋白的理化性质、磷酸化位点和Ｔ、Ｂ细胞表位等进行预测和分析。结果：成功构建ｐＥＴ２８ａ⁃ＰＰＥ５９重组载体，经诱导表达和纯化，成功获得ＰＰＥ５９蛋白；生物信息学预测发现，ＰＰＥ５９有２个开放阅读框，３１个磷酸化位点，并含有多个Ｔ细胞和Ｂ细胞抗原表位。结论：成功构建ｐＥＴ２８ａ⁃ＰＰＥ５９表达载体，获得高纯度ＰＰＥ５９蛋白，且被抗Ｈｉｓ⁃ｔａｇ小鼠单抗特异性识别；ＰＰＥ５９具有大量的磷酸化位点及丰富的Ｔ、Ｂ细胞表位，可作为结核病疫苗的重要候选蛋白之一。关键词结核分枝杆菌；ＰＰＥ５９蛋白；原核表达；生物信息学中图分...
