黄芪-当归配伍对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化的影响_邸睿宁.pdf

陕 西 中 医 药 大 学 学 报 年 月第 卷第 期 黄芪当归配伍对 半乳糖致衰老小鼠抗氧化的影响邸睿宁 姜欢欢 李亚茹 刘文妮 方欢乐（长安医院药剂科，陕西 西安；西安培华学院医学院，陕西 西安）摘 要：目的 观察黄芪当归药对对 半乳糖致衰老模型小鼠的抗衰老作用。方法 将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、黄芪当归 组、黄芪当归 组、组，注射 半乳糖造模，经灌胃法给药治疗，每日 次。连续灌胃 周，检测小鼠行为及体重，测定小鼠胸腺、心脏、肝脏、脾脏、肾脏质量指数；生化法测定小鼠肝组织、脑组织及血液中超氧化物歧化酶（）、谷胱甘肽过氧化物酶（）、丙二醛（）含量、过氧化氢酶（）含量；染色观察小鼠肾脏形态变化。结果 和模型对照组比较，黄芪当归药对组体质数增加，脾脏、胸腺、心脏、肾脏、肝脏指数得到一定改善，血液、脑、肝脏组织中、含量显著增加，含量显著降低。肾细胞形态和排列趋于正常，炎症情况减轻。结论 黄芪当归配伍对 半乳糖致衰老模型小鼠氧化应激反应的各项生化指标及肾脏组织病理状态有一定的改善作用。关键词：黄芪当归；半乳糖；抗氧化作用；抗衰老作用中图分类号：文献标识码：文章编号：（）：衰老是指随着年龄的增长，机体在多种因素共同作用而发生的组织结构等退行性病变。目前认为衰老主要是自由基大量堆积，机体氧化应激水平下降，丙二醛含量升高，机体抗氧化酶活力降低，使得机体老化速度加快。传统中药在减缓衰老方面具备一定的应用价值，因此从中药中筛选抗衰老物质成为当前的研究热点。复方中药是近年来研究的热点，而药对是复方中药的重要核心。黄芪当归药对是补气生血的主要药对。主治血虚气弱、劳倦内伤、阳气浮越之虚热证及疮疡久溃不愈。二者配伍首载于陈素庵妇科补解，用于治疗经亏血少之“居经”证。而后金元时期李东垣创立芪归比例 的当归补血汤最为著名，在内外伤辨惑论脾胃论兰室秘藏三书中共见，所治均为血虚发热而设。大量研究证明黄芪、当归具备良好的抗氧化、加强机体免疫力等功能。当归性温、味甘辛，有良好的活血、补血作用，可对抗氧自由基同时产生抗炎等作用。黄芪补气活血、利水消肿，能够发挥抗氧化、抗炎、降糖、利尿等作用。有研究表明黄芪甲苷可增强衰老细胞端粒酶活性和衰老基因 的表达。黄芪干根提取物 有很好的抗衰老作用。黄芪当归药对，配伍可产生协同功效，能够增强人体免疫力等作用。经文献表明，黄芪当归在 范围配伍均有协同增效作用，故本文在此基础上观察黄芪当归两个常用配比 和 对 半乳糖致衰老模型小鼠的抗衰老作用。材料 实验动物 清洁级 小鼠 只，雄性，周龄，购买于西安交通大学医学动物实验中心，动物质量合格证号：（陕）。实验前适应性饲养 周。药物与试剂黄芪、当归均由陕西兴盛德药业有限公司提供；黄芪当归按照 、比例配置，分别称取药材，以水热回流法提取 次，第 次 倍量水，提取；第、次 倍量水，提取，兼并 次提取液，过滤后加热挥发，浓缩制成基金项目：陕西省重点研发计划项目（）；国家级大学生创新创业项目（）通讯作者：方欢乐，硕士，副教授。：年 月第 卷第 期陕 西 中 医 药 大 学 学 报 的试剂（按照生药量计），分装置 冰箱中保存备用。半乳 糖 粉 剂（上 海 国 药 集 团，批 号：）；超 氧 化 物 歧 化 酶（）（批 号：），丙二醛（）（批号：），谷胱甘肽过氧化物酶（）（批号：），过氧化氢酶（）（批号：）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。器材 高速离心机（上海利鑫坚离心机有限公司，型号）；超声波组织粉碎仪（南京先欧仪器制造有限公司）；酶标仪（，型号）。方法 分组及造模 小鼠随机分为 组，分别为空白对照组、模型对照组、黄芪当归 、黄芪当归 组和维生素 组，每组 只。适应性饲养一周后开始造模。除空白对照组外，其余组小鼠每日腹腔注射 半乳糖（）。空白组腹腔注射生理盐水，给药间隔 后，药物组分别灌胃黄芪当归 、黄芪当归 （灌胃量 ）和 组（灌胃量 ）进行治疗，每天 次，观察小鼠进食量、毛发等状态，每周称重 次，连续给药 天。脏器系数测定 处死小鼠，立即在低温条件下取出脑、胸腺、心、肝脏、肾和脾重要脏器。滤纸吸干水分，称重，脏器指数（）脏器质量（）体质量（）。肝脏、脑组织及血清生化指标检测眼球取血，离心 后，分离血清备用。取小鼠肝脏和脑组织放在冰浴过的生理盐水制备的组织匀浆 ，离心，吸取上清液，分别用、试剂盒测定小鼠血清及肝脏、脑组织匀浆液中各种氧化物含量。肾脏组织切片观察 切取肾脏组织约 ，多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片。苏木素伊红（）染色，中性树脂封片，显微镜下查看其细胞形态的变化。统计学方法采用 统计软件，计量资料结果以均数 标准差（）表示，多组间比较采用单因素方差分析（）。以 为差异有统计学意义，为差异具有显著性。实验结果 黄芪当归药对对实验小鼠体重的影响饲养前后，小鼠的体质量变化如下表 所示。实验前，组小鼠均白色毛有光泽；进食量正常，各组小鼠体质量无明显差异（）。模型组小鼠小鼠出现进食量下降，毛发稀疏，行动缓慢，应激反应迟缓等，和空白对照组比较体质量随着时间的延长增长缓慢有显著性差异（），提示模型组小鼠出现明显衰老体征。与模型对照组相比，药物组小鼠体征有很大的改善，体质量随着饲养时间延长增长明显（，）。其中黄芪当归 和 组改善衰老小鼠的状态和体质量更加显著（）。表 小鼠体质量变化（，）空白对照组 模型对照组 黄芪当归 黄芪当归 组 注：与模型对照组比较 ，黄芪当归药对对实验小鼠脏器指数的影响 由表 可见，模型对照组小鼠胸腺、心、肝、脾、肾脏指数均呈显著下降趋势（与空白对照组相比，），说明模型对照组小鼠机体代谢及免疫功能等都降低；与模型对照组相比，药物组均不同程度的升高小鼠胸腺、心、肝、脾、肾指数（，），说明药物能改善机体的衰老，改善脏器的功能，其中黄芪当归 和 组改善效果更加显著，结果见表。陕 西 中 医 药 大 学 学 报 年 月第 卷第 期 表 不同组别的脏器指数比较（，）组别胸腺心肝脾肾空白对照组 模型对照组 黄芪当归 黄芪当归 组 注：与模型对照组比较 ，黄芪当归药对对实验小鼠血清中抗氧化指标的影响由表 可以看出，模型组小鼠血清中、活性显著降低，含量显著增加（与空白对照组相比，）。与模型组相比，黄芪当归 、及 均可升高小鼠血清中、含量，降低 含量（.，），其中黄芪当归 和 组效果更加显著（）。表 对小鼠血清、含量的影响（）组别（）（）（）（）空白组对照组 模型组对照组 黄芪当归 黄芪当归 组 注：与模型对照组比较 ，黄芪当归药对对实验小鼠肝脏中抗氧化指标的影响 由表 可以看出，模型组小鼠的肝脏中、含量下降、含量显著增加（与空白对照组相比，）。与模型组相比，药物组可提高小鼠肝脏中、含量，降低 含量（，）。黄芪当归 及 组改善效果更加显著（）。表 对小鼠肝脏中、含量的影响（）组别（）（）（）（）空白对照组 模型对照组 黄芪当归 黄芪当归 组 注：与模型对照组比较 ，黄芪当归药对对实验小鼠脑组织中抗氧化指标的影响 由表 可以看出，模型组小鼠的脑组织中、含量下降、含量显著增加（与空白对照组相比，）。与模型组相比，药物组可提高小鼠脑组织中、含量，降低 含量（.，.），黄芪当归 及 组表现更加显著，抗氧化效果更好（）。表 对小鼠脑组织中、的影响（）组别（）（）（）（）空白对照组 模型对照组 黄芪当归 黄芪当归 组 注：与模型对照组比较 ，年 月第 卷第 期陕 西 中 医 药 大 学 学 报 黄芪当归药对对实验小鼠肾脏 染色结果 由图 可见，正常组肾小球类圆形且规整，边缘明显，其细胞排列较规整；模型组肾小球结构异常萎缩，排列紊乱，有炎症细胞浸润；黄芪当归 组有一定改善，但是细胞排列还不整齐，部分地方存在炎症细胞，黄芪当归 和 组小鼠较模型组有很大的改善，肾脏结构形态正常，肾小管管腔清晰炎症情况减轻接近正常。正常对照组；模型对照组；黄芪当归 组；黄芪当归 ；组图 各组小鼠肾脏脏光镜下病理形态的改变（）讨论衰老受到多种内环境的影响，是生物体内多种生理生化反应的综合过程。在抗衰老的试验中证明，半乳糖可使许多组织呈现相似衰老的退行性改变。本研究发现衰老模型组小鼠体重下降，毛发稀疏、行动缓慢。同时肝脏、脾脏、心脏、肾脏体质量数下降。表明衰老模型建立成功。目前公认衰老的主要学说之一即为自由基学说。研究认为自由基可引起细胞衰老。体内、抗氧化酶，有很好的抗氧化对抗机体自由基破坏的作用，而 增多可引起脂质过氧化反应，机体 含量变化可间接反映机体细胞受自由基攻击的严重程度。本研究显示衰老小鼠血清、肝脏、脑内、含量明显降低，含量明显升高。说明模型组小鼠出现机体氧化反应导致重要脏器的衰老，肾脏 染色出现肾小球结构的紊乱，间质出现炎症反应。黄芪、当归二者在活性上有差异但又可现出一定的互补效应，其配伍起到相互促进作用。现代药理学研究已表明，黄芪中的主要成分黄芪皂苷、黄酮等，具有益气固表、敛汗固脱、调节免疫等作用；当归主要含有挥发油类（川芎内酯、藁本内酯）、多糖类等化学成分，具有增强人体免疫力、促进心血管等作用，而当归、黄芪水提物均可通过清除氧自由基。黄芪当归药对合用后，通过实验及临床研究不断证实了黄芪当归作用和经典比例，配伍比例不同时，主要成分含量及药理作用会发生变化。本实验观察黄芪当归不同比例抗衰老的效果，结果发现黄芪当归 ，均可以增加小鼠体重，提高衰老小鼠脏器指数，改善肾脏细胞形态、缓解肾脏组织损伤，发挥延缓器官衰老的作用，提高衰老模型小鼠血液、肝脏、脑组织内、含量，降低 含量。其中黄芪当归 组改善效果更加显著。总之，黄芪当归配伍使用可在医药或保健防衰老领域拥有广阔的应用空间。本研究可知黄芪当归对衰老小鼠具有一定干预作用，可通过抗氧化改善衰老症状，保护衰老脏器。通过对黄芪当归药对进行深入研究，对其复方研究及提高临床治疗效果有着重要的意义。本研究可为黄芪当归药对在抗衰老方面的应用和推广提供理论依据。陕 西 中 医 药 大 学 学 报 年 月第 卷第 期 （作者贡献度：第一作者邸睿宁负责生化测试及肾脏 染色，数据收集分析并撰写论文。第二、三、四作者姜欢欢、李亚茹、刘文妮负责动物实验。通信作者方欢乐课题及项目负责人）参考文献曾婷婷，李学智 衰老机制及针灸抗衰老机制研究进展 时珍国医国药，（）：王桔红，谢宗平，陈文 衰老机理及抗衰老研究进展 河西学院学报，（）：蒲秀瑛，李海兵，李晓玥，等 归芪多糖对衰老大鼠肾组织氧化损伤作用的研究 中医药学报，（）：朱蕴兰，陈宏伟，陈安徽，等 金针菇废菇柄发酵物对衰老模型小鼠氧化应激损伤的影响 中国食品添加剂，（）：胡杨洋，陈锐娥，王胜鹏，等 中药药对的系统研究（）黄芪当归药对研究 世界科学技术（中医药现代化），（）：胡杨洋，陈锐娥，王胜鹏，等 中药药对的系统研究（）黄芪当归药对聂克 当归补血汤考 中成药，（）：蒲秀瑛，李言，张伟杰，等 归芪多糖延缓衰老作用的研究 天然产物研究与开发，（）：杨飞霞，王玉，夏鹏飞，等 当归补血汤化学成分、药理作用、临床应用的研究进展及质量标志物的预测分析 中国中药杂志，（）：胡妮娜，张晓娟 黄芪的化学成分及药理作用研究进展 中医药信息，（）：谢静，龚易昕悦，丁立生，等 黄芪及其活性成分对脓毒症临床和药理作用的研究进展 中草药，（）：方欢乐，张慧，陶炎炎，等 黄芪当归药对研究进展 海南医学院学报，（）：，许燕妮，吴江峰，丁舸 当归黄芪药对在方剂配伍中的意义 江西中医药，（）：彭买姣，唐蓉，罗堃，等 不同配伍下黄芪 当归的药理研究进展 科技视界，（）：，阎卉芳 黄芪当归配伍对大鼠血管内膜增生 增殖的影响及 信号途径机制的研究 长沙：湖南中医药大学，王艳红，高江霞，孟敏，等 马栗籽提取物对 半乳糖所致小鼠衰老模型的影响 中国新药杂志，（）：蒋杉，杜凤，康秉文，等 异鼠李素通过减轻氧化应激延缓 半乳糖诱导的人脐静脉内皮细胞衰老 癌变畸变突变，（）：，：刘玥辰，阎星旭，赵换，等 衰老的分子机制及相关代谢组学研究 天津中医药大学学报，（）：闫建华，许晓玲，李荷莲，等 铁皮石斛总黄酮对 半乳糖所致小鼠衰老模型的影响 中医学报，（）：张蓓，余潇苓，万永艳，等