基金项目:山西省卫生健康委员会青年项目(2023121)作者简介:刘馨月，女，1998－03生，在读硕士，E-mail:liuxyue1@163．com收稿日期:2022－11－22基于网络药理学的雷公藤抗肾纤维化作用及实验验证刘馨月1，田杰2，李赟2，周雪娇2，李维鹏1，李贤霖1，郑晓俊2*(1山西医科大学药学院，太原030001;2山西医科大学第一医院药剂科;*通讯作者，E-mail:zhengxiaojun0525@163．com)摘要:目的运用网络药理学探究雷公藤中药缓解肾纤维化(renalfibrosis，ＲF)的核心成分及相关信号通路，并进一步针对肾纤维化关键信号通路之一Wnt信号通路进行细胞实验验证。方法运用网络药理学筛选雷公藤核心成分的潜在靶点，构建“雷公藤核心成分－潜在靶点”及蛋白质互作网络分析图，进行京都基因与基因组百科全书(Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes，KEGG)通路富集分析。将不同浓度的山柰酚(0，5，10，15，20μmol/L)、β－谷甾醇(0，5，10，15，20μmol/L)、雷公藤甲素(0，5，10，15，20nmol/L)作用于人肾小管上皮细胞(humanembryonickidneyepithelialcells，HKC)，通过CCK-8实验检测存活率，存活率最高的药物浓度作为后续实验的给药浓度。蛋白免疫印迹法及q-PCＲ检测空白组、山柰酚组、β－谷甾醇组、雷公藤甲素组磷脂酶D1(phospholipaseD1，PLD-1)表达水平，筛选影响Wnt通路的核心成分。进一步将细胞分组:对照组、雷公藤甲素组、TGF-β组、TGF-β+雷公藤甲素组，观察各组细胞形态改变，蛋白免疫印迹法及q-PCＲ法检测各组细胞α－平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果网络药理学表明雷公藤通过WNT/β-catenin信号通路发挥抗肾纤维化作用，主要核心成分为山柰酚、β－谷甾醇、雷公藤甲素。CCK-8实验结果显示，与0μmol/L相比，山柰酚浓度≥15μmol/L时，HKC细胞存活率降低(P＜0．01);β－谷甾醇浓度≥15μmol/L时，HKC细胞存活率降低(P＜0．01);雷公藤甲素浓度≥10nmol/L时，HKC细胞存活率降低(P＜0．01)。故选择山柰酚10μmol/L、β－谷甾醇10μmol/L和雷公藤甲素5nmol/进行后续实验研究。与空白组相比，雷公藤甲素组PLD-1蛋白及mＲNA表达量明显降低(P＜0．01)，山柰酚组及β－谷甾醇组PLD-1蛋白及mＲNA表达量差异均无统计学意义(P＞0．05)。细胞形态学结果表明，与对照组相比，TGF-β组梭形转化增多(P＜0．01);与TGF-β组相比，TGF-β+雷公藤甲素组梭形转化减少(P＜0．01)。与对照组相比，TGF-β组α-SMA蛋白及mＲNA表达升高(P＜0．01);与TGF-β组相比，TGF-β+雷公藤甲...
