细菌(xìjūn)内毒素方法验证1第一页，共十二页。细菌内毒素验证基本(jīběn)程序试验准备确定样品内毒素限值选择试剂计算MVD鲎试剂灵敏度复核试验供试品干扰初筛试验干扰试验结果判断计算公式：MVD=cL/λMVD为供试品的最大有效稀释倍数，c为供试品溶液的浓度，L供试品的细菌内毒素限值。如果计算在MVD时的供试品浓度，即最小有效稀释浓度，可使用(shǐyòng)公式MVc=λ/L.2第二页，共十二页。鲎试剂(shìjì)灵敏度复核试验•根据鲎试剂(shìjì)灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素工作标准品加入1ml内毒素检查用水溶解，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。然后按所用的鲎试剂灵敏度2λ、λ、0.5λ、0.25λ进行稀释。0.1ml鲎试剂+0.1ml标准品，平行4管；NC：0.1ml鲎试剂+0.1mlBET用水，平行2管37℃±1℃孵育60min±2min。•结果判断：反应管缓缓倒转180°，阳性（+）：凝胶不变形，不从管壁滑脱落；阴性（-）：未形成凝胶或凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者。实验有效：NC管全部阴性（--），2.0λ管全部阳性（++++），0.25λ管全部阴性（----）。数据处理：灵敏度测定值λc=antilg(ΣX/n)。X：为反映终点浓度的对数值（lg),反映终点浓度是系列浓度递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。3第三页，共十二页。干扰(gānrǎo)试验预试验•先用少量的鲎试剂初步确定供试品的最大不干扰浓度，为正式干扰试验提供依据。•例：某样品C：100单位/mlL：0.8EU/单位λ：0.25EU/mlMVD0.25=320倍MVC0.25=λ/L=0.3125单位/mlMVC0.125=λ/L=0.156单位/mlMVC0.06=λ/L=0.078单位/mlMVC0.03=λ/L=0.039单位/ml100单位/ml→20单位/ml→10单位/ml→5单位/ml→2.5单位/ml→1.25单位/ml→0.625单位/ml→0.3125单位/ml→0.156ml/ml→0.078单位/ml→0.039单位/ml分别用4λ的内毒素标准品与各梯度的供试品等量稀释，得到(dédào)相应的供试品阳性对照。4第四页，共十二页。干扰(gānrǎo)试验预试验•结果一供试品无干扰或者干扰很小，可用上述任一浓度进行干扰试验•结果二供试品在某浓度开始(kāishǐ)无干扰，可选择该浓度或者跟低浓度进行干扰试验供试品浓度MVC0.25MVC0.125MVC0.06MVC0.03BET水供试品溶液----------供试品阳性对照++++++++++MVC0.25MVC0.125MVC0.06MVC0.03BET水供试品溶液----------供试品阳性对照--++++++++5第五页，共十二页。干扰(gānrǎo)试验预试验•结果三假阳性，更换另一批供试品进行测试结果四假阴性，消除(x...
