2022年医学专题—流式细胞仪(Flow-Cytometer)基础简介.ppt

流式细胞仪（Flow Cytometer)基础(jch)简介,中科院生物物理研究所中国科学院蛋白质科学研究平台(pngti)2005年3月 刘春春,第一页，共二十六页。,主要(zhyo)内容,流式细胞仪概要(giyo)流式细胞仪的工作原理流式细胞仪测量的对象,第二页，共二十六页。,什么(shn me)是流式细胞仪,流式细胞仪实物(shw),BD FACSVantage,BD-Calibur,第三页，共二十六页。,流式细胞仪基本(jbn)结构,第四页，共二十六页。,FCM的定义(dngy),流式细胞仪是指，使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号(xnho)，对信号(xnho)进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。,第五页，共二十六页。,对比 流式细胞仪是一种(y zhn)特殊的显微镜,第六页，共二十六页。,第七页，共二十六页。,功能特点（1）多参数定量分析每一个(y)细胞；（2）细胞分选；高纯度：99%以上；可分析小于1/10000比例的稀有细胞群；单细胞克隆等。,（3）高通量（分析(fnx)分选）分析150，000个/秒 分选100，000个/秒,第八页，共二十六页。,应用领域 疾病诊断生物学基础研究环境监测(hun jn jin c)海洋微生物研究农业领域应用等等,70年代美国为攻克癌症而建造。厂商(chngshng)：Becton-DicksonCoulter-BeckmanDOCytomation 已成为一个几十亿美金的产业,第九页，共二十六页。,流式细胞仪工作(gngzu)原理,流体(lit)动力学聚焦,流动(lidng)室,激光聚焦,液流与光源,第十页，共二十六页。,探测(tnc)光路聚焦,第十一页，共二十六页。,光信号(xnho)分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号(xnho)。,光信号(xnho)收集,第十二页，共二十六页。,数据处理,FSC SSC FL1 FL2 FL3,对数(du sh)线性 线性 线性 对数,脉冲(michng)处理，模数转换,光信号(xnho),电信号,记录数据，显示结果,（面积，峰高，宽度）,第十三页，共二十六页。,流式细胞仪产生(chnshng)的信号,非荧光(ynggung)信号,颗粒(kl)度,细胞大小,第十四页，共二十六页。,散射光信号区分裂解(li ji)后的外周血细胞群,第十五页，共二十六页。,荧光(ynggung)信号,荧光染料被激发而发射的光信号。定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量(hnling)的定量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量,第十六页，共二十六页。,PIAnnexinV细胞(xbo)凋亡检测,DNA含量(hnling)-PI,Annexin-V,第十七页，共二十六页。,前向散射光(linear),侧向(c xin)散射光(linear),PEFITC荧光标记检测(jin c)外周血裂解后细胞群,第十八页，共二十六页。,细胞(xbo)分选,第十九页，共二十六页。,流式细胞仪的测量(cling)对象,大小 悬浮在溶液中的相互离散颗粒。大小范围：0.2uM-300uM。对象类型 细胞类型：（1）高等真核细胞；（2）酵母；（3）细菌(xjn)；（4）多细胞的聚集体，如胰岛等。非生命颗粒：细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等。,第二十页，共二十六页。,流式细胞仪能够检测的细胞属性和组分举例 1）不需染色：大小，胞浆颗粒度，细胞自发荧光，色素，细胞精确计数。2）需染色或标记：细胞组分：细胞膜：流动性，通透性，膜电位 细胞内离子：H+（可检测PH值），Na+，K+，Ca2+（结合的和 自由 的）。核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色质结构等 总蛋白质 蛋白质分子(fnz)间相互作用 抗原 细胞骨架成分 受体,第二十一页，共二十六页。,功能属性：酶活性细胞凋亡(dio wn)细胞坏死细胞活性氢硫基凝血素结合位点药物动力学.,经验之谈：凡细胞内能进行荧光标记的成分或者(huzh)某种变化，都可用流式细胞仪进行检测。,第二十二页，共二十六页。,G1,S phase,G2,M,G1,1,2 1,DNA含量(hnling),DNA 含量(hnling),细胞周期时相,G0/1,G2/M,S,细胞(xbo)数,细胞周期分析,第二十三页，共二十六页。,Hoechst33258（AT）,Chromomycin A3（GC）,白血病患者(hunzh),2,4,5,6,X8,9-12,7recip 9-22,13,14151617,Y 18,20,19,22,21,Ph,1/3,染色体组型测定(cdng),1,3,第二十四页，共二十六页。,生物物理所现有(xin yu)流式细胞仪,型号：BD FACSVantage SE参数(cnsh)：分析10，000个/秒，分选7，000个/秒；激光：488nm，UV；四色荧光通道。地点：1406联系方式：电话64839306 或：64862503 电子邮件,第二十五页，共二十六页。,内容(nirng)总结,流式细胞仪（Flow Cytometer)基础简介。2005年3月 刘春春。容易检测各个参数间的相关性 不容易。（3）高通量（分析分选）。光信号分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号。多荧光标记(bioj)胞内多种组分，实现多参数测量。CD14 PE(log)。经验之谈：凡细胞内能进行荧光标记(bioj)的成分或者某种变化，都可用流式细胞仪进行检测。2 1。Y 18。1/3,第二十六页，共二十六页。,