2022年医学专题—改良Lowry氏法测定蛋白质含量.ppt

改良(giling)Lowry氏法测定蛋白质含量,The Lowry Method for Protein Quantitation,基因(jyn)时代，为生命科学提供源动力！,第一页，共八页。,目的与要求：掌握改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法；了解标准曲线在物质定量测定(cdng)中的应用及绘图要点。,基因时代，为生命科学提供(tgng)源动力！,第二页，共八页。,实验原理：在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应 Biuret Reaction）蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成钼蓝-钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度(nngd)成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应）,基因时代，为生命科学提供(tgng)源动力！,第三页，共八页。,操作步骤,基因时代，为生命科学提供(tgng)源动力！,第四页，共八页。,混匀后置于37度水浴10分钟。冷却后各管加入试剂B 0.1mL，室温(sh wn)放置10分钟。各管接着加入试剂C 3mL，立即混匀，置37度水浴10分钟。冷却后，以0号管为空白，在分光光度计上以波长650nm比色读取光密度值。,基因时代，为生命科学提供(tgng)源动力！,第五页，共八页。,结果与计算：根据测定管光密度值查标准曲线，由标准曲线计算血清蛋白质含量，再按血清稀释(xsh)倍数换算为g/L。,基因时代，为生命科学提供(tgng)源动力！,第六页，共八页。,注意事项：各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊。移液管使用前要看清楚刻度和是否写着快、吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余液体(yt)。减量法可有效减少误差。分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白管调节透光度为100%。,基因(jyn)时代，为生命科学提供源动力！,第七页，共八页。,内容(nirng)总结,改良Lowry氏法测定蛋白质含量。基因时代，为生命科学提供源动力。在碱性条件下蛋白质的肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物。（双缩脲反应(fnyng)Biuret Reaction）。蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸还原，生成钼蓝-钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量,第八页，共八页。,