2022年医学专题—扩增活化的自体淋巴细胞技术.pptx

EAAL 扩增活化的自体淋巴细胞治疗(zhlio)肿瘤技术简介Introduction of EAAL Therapy,第一页，共七十三页。,肿瘤(zhngli)免疫治疗的机制Mechanisms of Cancer Immunotherapy,通过调动机体自身的免疫系统，达到控制肿瘤生长，杀伤肿瘤细胞的目的。前提：肿瘤细胞有别于正常细胞肿瘤抗原肿瘤特异性T细胞免疫应答肿瘤特异性抗体(kngt)免疫应答天然免疫对肿瘤细胞的杀伤作用,第二页，共七十三页。,如何达到有效(yuxio)的免疫治疗效果,有足够可以识别肿瘤抗原的杀伤性T细胞机体的免疫环境有利于上述细胞发挥抗肿瘤功能Th1/Th2Treg这些(zhxi)T细胞可以到达肿瘤组织局部T 细胞归巢在肿瘤局部，这些T细胞可以发挥有效的杀伤功能肿瘤基质及肿瘤组织微环境,第三页，共七十三页。,肿瘤(zhngli)疫苗,过继(guj)细胞免疫治疗,肿瘤(zhngli)的免疫治疗方法Approches of Cancer Immunotherapy,第四页，共七十三页。,细胞(xbo)免疫治疗Cellular Immunotherapy,包括肿瘤在内的多种慢性病的最重要的生物治疗方法(fngf)之一肿瘤的细胞免疫治疗：非特异性 LAK细胞 CIK细胞 EAAL细胞特异性 Provenge,树突状细胞 肿瘤特异性T细胞,-其它慢性病的细胞免疫治疗：慢性病毒感染性疾病乙肝、丙肝艾滋病慢性寄生虫感染(gnrn)糖尿病多发性硬化症系统性红斑狼疮,第五页，共七十三页。,扩增活化(huhu)的自体淋巴细胞（EAAL）的定义,自体免疫细胞治疗技术CD3+T淋巴细胞为主（95.91%0.24%），含少量NK细胞体外扩增活化肿瘤杀伤功能改进的LAK和CIK治疗：细胞培养效率和肿瘤杀伤能力显著增强EAAL是Expanded Activated Autologous Lymphocytes（扩增活化的自体淋巴细胞）的简称。其定义是通过采取机体自身20-100ml静脉血，分离获得0.8-3 x 107外周血单个核细胞，经过体外无血清培养基培养，获得以CD3细胞为主的，包含(bohn)CD8+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD3+CD56+NKT细胞、NK细胞，细胞数量在3 x 109以上的活化的混合淋巴细胞，这些细胞在体外具有明确肿瘤杀伤功能。,第六页，共七十三页。,EAAL技术(jsh)特点,使用无血清淋巴细胞培养基进行细胞培养，保证没有潜在(qinzi)的病源微生物感染,不需使用(shyng)单采机，对患者免疫系统没有破坏作用,细胞扩增的高效性和高活性:扩增效率约为2001000倍,独特的细胞培养工艺，少量外周血即可满足多次细胞回输的要求,可与化疗联合，完全满足多个化疗疗程对细胞治疗次数和细胞治疗数目的要求，从而产生较好的协同治疗肿瘤效果。,可进行多次、高频治疗，达到最好的治疗效果,第七页，共七十三页。,EAAL技术的临床-实验室操作(cozu)流程,外周血20-100ml,扩增及活化(huhu),回输100ml/次，1-8次,培养(piyng)及扩增14-35天,收集诱导的杀伤细胞,第八页，共七十三页。,EAAL的作用机制(jzh)研究,第九页，共七十三页。,自体肿瘤(zhngli)细胞的体外杀伤效应（IFN-）,第十页，共七十三页。,培养后的淋巴细胞与顺铂以不同序贯方式联合(linh)对PLA-801D细胞的抑制率,(注：联合作用(zuyng)组、单顺铂组和单淋巴细胞作用(zuyng)组抑制率进行单因素方差分析,P0.01*),EAL联合化疗(hu lio)的体外杀伤效果,第十一页，共七十三页。,EAL细胞的肿瘤(zhngli)抗原特异性分析,第十二页，共七十三页。,EAAL在裸鼠体内(t ni)对HepG2形成肿瘤的抑制作用,裸鼠注射(zhsh)EAAL细胞的剂量分组,p 0.05,第十三页，共七十三页。,G1,G2,G3,G4,G5,第十四页，共七十三页。,EAAL对患者体内免疫环境的改变(gibin)作用,CD8+杀伤性T淋巴细胞比例上升NK细胞比例上升CD4/CD8 T淋巴细胞比值下降分泌的IFN-细胞比例上升IFN-的分泌量上升经EAAL治疗(zhlio)后，患者体内杀伤性淋巴细胞数量和比例显著增加,第十五页，共七十三页。,EAAL为CD8+T细胞(xbo)为主,第十六页，共七十三页。,IL-2,IFN-g,IL-4,IL-5,TNF-a,b-actin,0 1 5(mg/ml),PHA,A,B,Figure 5.Cytokine gene expression by ex vivo-expanded T cells.Expanded CyT cells were re-stimulated with PHA(1 and 5 mg/ml)for 4 hr and total RNA was extracted from the cells and the gene expression levels of IL-2,IFN-g,IL-4,IL-5,and TNF-a were analyzed by RT-PCR(A).Band areas were analyzed using an image analysis systems(Multi-Analyst,Bio-Rad,CA),and data were presented as ratios vs.b-actin,which served as an internal control(B).Representative image from sample#4 was shown.,EAAL细胞(xbo)分泌Th1类细胞因子,第十七页，共七十三页。,第十八页，共七十三页。,PRE,POST,第十九页，共七十三页。,第二十页，共七十三页。,第二十一页，共七十三页。,The subsets of IFN-gamma+lymphocytes,第二十二页，共七十三页。,第二十三页，共七十三页。,The change of the ratio of IFN-gamma+cells,第二十四页，共七十三页。,EAAL的疗效(lioxio),单独(dnd)使用手术后预防复发稳定肿瘤改善生活质量与化疗/靶向治疗联合协同作用改善化疗和靶向治疗副作用延长患者的总生存期,第二十五页，共七十三页。,（LANCET 2000;356;802-07）,EAAL的疗效(lioxio)：降低肝癌手术后的复发率：随机对照临床实验结果,第二十六页，共七十三页。,一例晚期肝癌患者(hunzh)实现6年带瘤生存Hepatology(28),5,1436-7,1998.,患者：62岁，男性，丙肝，肝癌Child B级，约7厘米大小。已出现右门静脉肿瘤栓塞和右肾转移（T4N0M1,B期）该肿瘤已无法切除。该患者因此接受了质子照射治疗，治疗后肿瘤出现坏死并且体积缩小至原来的50%。EAAL治疗：放射治疗之后患者每12月应用一次过继性免疫治疗平均每次回输细胞1.40.510（10）绝大多数为T细胞标记阳性（95%2%CD3+，902%CD3+/HLA-DR+，61%9%CD8+，39%8%CD4+）且对Daudi细胞具有细胞毒活性的细胞。细胞回输在6年内共为53次完成（平均5-6周一次回输）累计回输细胞总数为7.310（11）结果：获得了6年无复发生存，整个(zhngg)过程没有出现治疗相关的不良反应。在长期观察中，该患者健康状况良好，未出现肝癌的复发，且肝功能好转。,第二十七页，共七十三页。,左眼睑细胞(xbo)鳞癌和结肠腺癌双原发（Jpn J Clin Oncol 2000:30(6)267-271）,患者：同时患有左眼睑细胞鳞癌和结肠腺癌，两者都已出现淋巴结转移。患者接受了左眼剜除术及左颈部改良根治性淋巴结清扫术和随后的跨结肠切除术和局部淋巴结清扫。治疗：EAAL过继性免疫治疗作为单一术后辅助治疗，而未接受可引起免疫抑制的化疗。共进行了150次回输（平均2周一次回输）平均每次回输细胞数为1.3810（10）。结果(ji gu)：至文章发表为止，术后6年内尚未发现复发和其它转移。,第二十八页，共七十三页。,EAAL治疗(zhlio)神经胶质母细胞瘤的效果,Case Age Sex,Initial treatment,Ope.Rad.Chemo.,TTP,Follow,1.37 F Total 60GyACNU 1010Alive,2.17 F Total 60GyACNU 102Alive,3.49 M Total 60GyACNU 24m 39Dead,4.56 M Total 60GyACNU 8m 40Dead,5.40 M Total 60GyACNU 26Alive,TTP再発期間。,2003年12月現在。,5例中5例3年以上生存(shngcn)。2例10年以上生存。2006年2月現在、5例中3例5年以上生存論文投稿作業中。,第二十九页，共七十三页。,病例(bngl)1.非小细胞肺癌脑转移,患者男性，54岁，非小细胞肺癌，并伴有脾、脑转移，TNM IV期治疗：EAAL为单一治疗，六周内共五次回输总回输细胞数为1.6610(10)。结果：第五次输注后10天行MRI检查，与治疗前对比：右额叶强化结节此次扫描未见异常强化，仅表现为斑片状长T1长T2信号，范围较前缩小，余脑实质结构对称，灰白质界限清晰，未见异常强化灶，中线结构居中，脑室(nosh)系统未见异常，小脑及脑干未见异常，头颅诸骨未见骨质破坏灶。提示右额叶转移瘤较EAAL细胞输注前好转。脾上极实性占位较前变化不大。胸部CT 肺中叶下叶病灶变化不大。,第三十页，共七十三页。,病例(bngl)2.髓母细胞瘤术后和放化疗后复发,患者：女，21岁，小脑蚓部髓母细胞瘤手术后二年（2005年3月）脊髓复发，进行单纯化疗3个疗程，肿瘤消失。继续口服化疗药，连续7个疗程。2006-2-28核磁共振发现，脑脊髓广泛种植复发治疗：化疗与EAAL疗法结合治疗方案。累积回输共14次，回输细胞总数达到6.7710（10）。结果：2个疗程后，2006-6-21核磁共振发现转移灶大部分消失，明显好于对单纯化疗的预期。患者化疗后白细胞，血色素低。EAAL细胞治疗缩短了恢复时间，起到良好的支持治疗作用。患者在化疗期间(qjin)无发热和感染，一直坚持爬山锻炼，也没有出现过第一次化疗时的贫血导致的心慌、气短等症状；患者精神状态良好，无食欲下降、体重减轻、睡眠不良、精神萎靡等化疗不良反应。,第三十一页，共七十三页。,病例(bngl)3.贲门癌肺转移伴腹水,患者：女，贲门癌肺转移伴腹水，化疗无效治疗：两周间隔，两次输注EAAL细胞，腹腔及静脉各半，共计细胞总数为1.1310（10），回输前进行腹腔低剂量化疗（以前同样剂量化疗未显示治疗效果）。结果：腹部CT检查，与回输前2005-11-15腹部CT结果相比较：可见肝S4结节低密度结节较前缩小（20mm13mm1812mm）肝右叶低密度结节较前缩小(16mm24mm14mm22mm)，脏壁层腹膜表面及肠管表面多发结节较前缩小（20mmX22mm17mmX1 5 mm）双侧附件区及盆腔内腹膜多发异常强化结节及肿块(zhn kui)亦较前缩小，现最大75mm60mm，原为95mm60mm。腹水较前减少。,第三十二页，共七十三页。,病例4：复发的乳腺癌治疗(zhlio)后(5 次回输),肿瘤标志物水平下降,Patient:0012Infusion date:12/29/051/5/061/12/061/19/061/26/06,第三十三页，共七十三页。,病例(bngl)5：颅内淋巴细胞瘤,患者：男，颅内淋巴细胞瘤手术，未能完全切除治疗：10倍于常规剂量化疗，第一次化疗后副作用强，无法正常生活每次化疗后在化疗间歇回输两次EAAL结果：手术未能切除的肿瘤消失患者未再产生化疗的副作用，实现正常生活；无脱发